?；撬釋?duì)大鼠鐵利用和抗氧化能力的影響

王芙蓉， 謝中國(guó)， 葉興乾， 鄧尚貴， 陳士國(guó)*， 胡亞芹， 肖定福

（1.舟山普陀海洋高科技園區(qū)，浙江 舟山316100；2.浙江大學(xué) 生物工程與食品學(xué)院，浙江 杭州 310029；3.浙江海洋學(xué)院食品與藥學(xué)學(xué)院、醫(yī)學(xué)院，浙江舟山316000；4.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128）

鐵是人和動(dòng)物必需的一種微量元素，在體內(nèi)參與血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及某些酶的合成，在機(jī)體代謝過(guò)程中起著極其重要的作用，缺鐵嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致缺鐵性貧血（IDA）。IDA是常見(jiàn)的一種營(yíng)養(yǎng)性貧血，其發(fā)病遍及世界各地。世界衛(wèi)生組織調(diào)查報(bào)告顯示，IDA患者占世界總?cè)丝?0%～30%左右[1]。研究發(fā)現(xiàn)IDA可引起機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致機(jī)體抗氧化能力的下降[2]。

牛磺酸是一種條件性必需氨基酸，具有抗氧化、提高免疫力等[3-4]多種功能。文獻(xiàn)報(bào)道，?；撬釋?duì)改善貧血有一定的效果[5]，對(duì)鐵過(guò)載小鼠引起的心臟損傷有保護(hù)作用[6-7]，?；撬釋?duì)正常大鼠和缺鐵性貧血大鼠的抗氧化作用鮮有報(bào)道，本文主要探討牛磺酸對(duì)大鼠鐵利用及抗氧化作用的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備

?；撬?，購(gòu)于潛江永安藥業(yè)股份有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99%；FeSO4.7H2O，分析純，國(guó)藥集團(tuán)產(chǎn)品；SD大鼠，購(gòu)于上海斯萊克生物有限公司；UV-2550型分光光度計(jì)，日本Shimadzu公司產(chǎn)品；AA700型原子吸收分光光度計(jì)，美國(guó)Perkin Elmer公司產(chǎn)品。

1.2 動(dòng)物分組和喂養(yǎng)

健康雄性 SD 大鼠 40只，體質(zhì)量（80±5）g，以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)喂養(yǎng)3 d。隨即分為4組，其中16只整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程都飼喂正常飼料，另外24只喂缺鐵飼料，耗空28 d建造缺鐵性貧血模型。缺鐵飼料參照AIN-76飼料配方[8]，其中的礦物元素添加劑不添加鐵劑。缺鐵大鼠根據(jù)Hb含量隨機(jī)分為3組:缺鐵組、缺鐵加?；撬峤M和補(bǔ)鐵加牛磺酸組。缺鐵組和缺鐵加?；撬峤M繼續(xù)飼喂缺鐵飼料，補(bǔ)鐵加?；撬峤M改喂正常飼料。整個(gè)實(shí)驗(yàn)飼喂正常飼料的16只大鼠根據(jù)體質(zhì)量分為正常對(duì)照組和正常+牛磺酸組。添加?；撬峤M的大鼠每天灌胃?；撬?.5 g/kg，缺鐵組和正常對(duì)照組灌胃等體積去離子水，共21 d。

動(dòng)物飼養(yǎng)在不銹鋼籠中，環(huán)境溫濕度恒定（（24±1） ℃，（55±5）%），自由采食、自由飲用去離子水，光照12 h/d，實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免鐵污染。灌胃結(jié)束后，40只大鼠分別用巴比妥鈉腹腔注射麻醉，在大鼠深度麻醉狀態(tài)下剖開(kāi)腹部，從腹主動(dòng)脈取血10 mL左右，從中取一部分全血測(cè)定Hb，另一部分取血清測(cè)血清鐵（SI）、血清鐵蛋白（SF）、總鐵結(jié)合力（TIBC）和血清抗氧化酶活性。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 血液指標(biāo)的測(cè)定 Hb的測(cè)定:氰化高鐵血紅蛋白法[9]；血清SI和TIBC，采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定。SF采用ELASA法測(cè)定，試劑盒購(gòu)于美國(guó)R&D公司。

1.3.2 肝臟和脾臟中鐵含量的測(cè)定 待測(cè)肝臟和脾臟樣品分別加混合酸（V（硝酸）∶V（高氯酸）=4∶1）10 mL緩緩加熱，待溶液變成無(wú)色時(shí)，蒸發(fā)余酸至近干，冷卻，定容，稀釋到合適的倍數(shù)后用美國(guó)Perkin Elmer公司AA700型火焰原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定鐵含量。

1.3.3 血清抗氧化指標(biāo)的測(cè)定 總抗氧化能力（TAOC）、總超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力及丙二醛（MDA）含量用試劑盒測(cè)定。試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS18.0軟件中的單因子方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 ?；撬釋?duì)大鼠血液指標(biāo)的影響

牛磺酸對(duì)大鼠血液指標(biāo)的影響見(jiàn)表1。經(jīng)28 d的缺鐵造模，大鼠 Hb 含量為（86.07±3.40）g/L，說(shuō)明大鼠已經(jīng)處于缺鐵性貧血狀態(tài)。對(duì)缺鐵性貧血大鼠補(bǔ)充?；撬?1 d后，缺鐵+牛磺酸組大鼠Hb含量已恢復(fù)正常，與缺鐵組比較差異顯著（P＜0.05），但低于其他3組（P＜0.05）。

缺鐵組大鼠SI和SF含量顯著低于其他4組（P＜0.05），缺鐵+?；撬峤M大鼠SI和SF含量低于正常組（P＜0.05），補(bǔ)鐵+?；撬峤MSI和SF含量顯著高于缺鐵+?；撬峤M （P＜0.05），而正常組和正常+?；撬峤M大鼠SI和SF含量差異不顯著 （P＞0.05）。缺鐵組大鼠TIBC顯著高于其他4組 （P＜0.05）。

表1 牛磺酸對(duì)大鼠血液指標(biāo)的影響Table 1 Effect of taurine supplements on blood indexs of rats

2.2 ?；撬釋?duì)大鼠肝臟、脾臟中鐵含量的影響

牛磺酸對(duì)大鼠肝臟、脾臟中鐵含量的影響見(jiàn)表2。缺鐵組大鼠肝臟和脾臟中鐵的含量顯著低于正常組（P＜0.05）。正常大鼠補(bǔ)充牛磺酸對(duì)大鼠肝臟和脾臟中鐵的含量有一定的提高，并可顯著提高脾臟鐵含量（P＜0.05），缺鐵大鼠補(bǔ)充?；撬岷罂纱龠M(jìn)肝臟和脾臟中鐵的含量，補(bǔ)鐵+?；撬峤M與缺鐵組比較可顯著提高肝臟和脾臟中鐵的含量（P＜0.05）。

2.3 ?；撬釋?duì)大鼠血清抗氧化能力的影響

牛磺酸對(duì)大鼠血清抗氧化能力的影響見(jiàn)表3。缺鐵組大鼠血清T-AOC、SOD和 GSH-PX活性均低于正常組大鼠，而MDA含量高于正常組（P＜0.05），表明缺鐵可引起機(jī)體抗氧化能力的降低。正常+?；撬峤M與正常組比較對(duì)大鼠的抗氧化能力沒(méi)有顯著影響（P＞0.05）。缺鐵+牛磺酸組和補(bǔ)鐵+?；撬峤M大鼠均可提高血清T-AOC、SOD和 GSH-PX活性，降低MDA含量，補(bǔ)鐵+?；撬峤M大鼠血清MDA含量和SOD活性與缺鐵組大鼠比較差異顯著 （P＜0.05）。

表2 ?；撬釋?duì)大鼠肝臟、脾臟鐵含量的影響Table 2 Effects of taurine on iron contents of liver and spleen of rats

表3 ?；撬釋?duì)大鼠血清抗氧化能力的影響Table 3 Effects of taurine on serum antioxidative ability of rats

2.4 討論

正常組大鼠添加牛磺酸對(duì)Hb含量影響不大，而缺鐵和缺鐵后補(bǔ)鐵大鼠添加牛磺酸可提高大鼠Hb含量，表明牛磺酸能促進(jìn)缺鐵大鼠鐵的吸收，而對(duì)正常大鼠鐵吸收的促進(jìn)效果不明顯。

鐵蛋白是體內(nèi)含鐵最豐富的一種蛋白質(zhì)，在鐵的代謝方面起著重要作用。SF能反映體內(nèi)鐵存儲(chǔ)量及機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，是判定體內(nèi)鐵缺乏的有效指標(biāo)[10]。TIBC代表血清鐵運(yùn)鐵蛋白含量，缺鐵性貧血時(shí)血清總鐵結(jié)合力可升高[11]。IDA可引起機(jī)體SI、SF下降，TIBC含量偏高。缺鐵組大鼠添加?；撬岷骃I、SF含量升高，TIBC含量降低，說(shuō)明?；撬峥商岣逫DA大鼠對(duì)鐵的利用。

肝臟和脾臟是機(jī)體鐵主要的儲(chǔ)存部位，在機(jī)體鐵代謝平衡中具有重要作用。

IDA大鼠肝臟和脾臟鐵含量與正常組比較顯著降低，說(shuō)明缺鐵嚴(yán)重時(shí)可引起機(jī)體儲(chǔ)存鐵顯著降低。添加牛磺酸和補(bǔ)鐵后可提高IDA大鼠肝臟和脾臟鐵含量。

SOD與GSH-Px構(gòu)成人體重要抗氧化酶系統(tǒng)，二者協(xié)同作用以減少活性氧自由基的產(chǎn)生，防止脂質(zhì)過(guò)氧化及其中間代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的損害。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，測(cè)定MDA的量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷程度[12]。因此，檢測(cè)血清T-AOC、SOD、GSH-Px和MDA的變化，可以反映機(jī)體的抗氧化能力的變化。本實(shí)驗(yàn)缺鐵組大鼠血清MDA升高，而SOD、GSH-Px和T-AOC下降，表明IDA大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，抗氧化能力下降，存在明顯的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。通過(guò)灌胃?；撬峥梢种艻DA大鼠MDA的升高及SOD、GSH-Px、T-AOC的下降，表明?；撬峥杀Ｗo(hù)IDA大鼠體內(nèi)的抗氧化酶活性，從而維持機(jī)體氧化及抗氧化系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡，減少自由基對(duì)機(jī)體的損傷作用。前期也有研究發(fā)現(xiàn)缺鐵可加重脂質(zhì)過(guò)氧化，認(rèn)為自由基的產(chǎn)生和清除均需要含鐵酶類的參與，而缺鐵時(shí)清除自由基的酶活性降低，自由基清除障礙，過(guò)多的自由基可引起脂質(zhì)過(guò)氧化[13]。?；撬峋哂锌寡趸饔茫虼薎DA大鼠添加?；撬岷罂商岣邫C(jī)體的抗氧化能力，且補(bǔ)鐵+牛磺酸組大鼠改善IDA效果更佳。

3 結(jié)語(yǔ)

牛磺酸可顯著提高缺鐵性貧血大鼠血紅蛋白、血清鐵、血清鐵蛋白和肝臟鐵含量，顯著降低血清總鐵結(jié)合力，提高血清抗氧化酶活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛的產(chǎn)生，表明牛磺酸可提高缺鐵性貧血大鼠鐵的利用和抗氧化能力；?；撬釋?duì)正常大鼠鐵利用和抗氧化能力的作用效果不顯著。因此，?；撬峥捎行У母纳迫辫F性貧血。

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