豬巴氏桿菌病的診斷和治療

高君石

（江蘇省常熟市海虞動物防疫站，江蘇常熟 215500）

豬巴氏桿菌病的診斷和治療

高君石

（江蘇省常熟市海虞動物防疫站，江蘇常熟 215500）

豬巴氏桿菌病也稱豬肺疫，主要由多殺性巴氏桿菌引起，是一種急性、敗血性傳染病。病豬常表現為咽喉部急性腫脹或纖維素性胸膜肺炎癥狀，多因飼養管理不當造成。通過發病情況、臨床癥狀、病料涂片染色、鏡檢、細菌分離培養、生化實驗或動物實驗等結果而確診。本文通過江蘇省常熟市某豬場的實際案例，介紹了該病的具體診斷方法及相關治療手段。

豬巴氏桿菌；細菌培養；藥敏試驗；治療

豬巴氏桿菌病主要由多殺性巴氏桿菌 （Pastenrella multocida） 而引起，是一種急性、敗血性傳染病，也稱豬肺疫或豬出血性敗血癥。該病的主要特征為敗血癥，咽喉部急性腫脹或表現為纖維素性胸膜肺炎癥狀。豬巴氏桿菌病主要由B型菌株引起，呈散發性發生，多因飼養管理不當，環境寄生蟲和其他細菌誘因等引發復合感染而發病，我國將其列為二類動物疫病。

多殺性巴氏桿菌為細小球桿菌，寬0.25～0.4 μm，長0.5～1.5 μm。單個存在，有時成雙排列。革蘭氏染色為陰性。本菌最適生長溫度為37℃，pH 7.2～7.4。添加血液或血清時，則生長良好。在血液瓊脂平板上培養，形成濕潤、光滑、邊緣整齊的圓形露珠樣灰白色小菌落，有熒光，不溶血。在肉湯中培養呈均勻一致的中等度渾濁，有黏性沉淀物，培養久時，表面形成菌膜。在麥康凱和含有膽鹽的培養基上不生長。本菌可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，產酸不產氣。對乳糖、鼠李糖、楊苷、菊糖、肌醇不發酵[1]。

一般情況下，不同畜禽間不容易相互感染多殺性巴氏桿菌。健康豬上呼吸道中常帶有此菌，但多半為弱毒或無毒的類型。由于豬群擁擠、圈舍潮濕、衛生條件差、通風不良、寒冷、悶熱、陰雨連綿、氣候驟變、長期營養不良、處于半饑餓、寄生蟲病、長途運輸等不良因素，降低了豬體的抵抗力，或發生某種傳染病時，病菌乘機侵入機體內繁殖，而增強毒力，引起發病。這種以內源性感染為主的豬肺疫，成散發性發生。在自然條件下很少能傳染另外的健康豬。當然，由于細菌通過發病豬體增強毒力后，仍可傳染另外的健康豬，因此，不能忽視健康豬在傳染來源上的作用。本病大多發生于中、小豬，成年豬患病較少。

江蘇省常熟市某豬場一棟育肥舍豬只精神沉郁，厭食，有高熱等現象，送檢2頭病重豬只至獸醫工作站實驗室檢查，經發病情況、臨床癥狀、病料的涂片染色、鏡檢、細菌的分離培養、生化實驗及動物實驗，診斷為豬巴氏桿菌病。通過藥敏試驗發現，病菌對氟苯尼考、恩諾沙星、環丙沙星敏感，對多數藥物耐藥。選擇高敏藥物治療病豬，病情很快得到控制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

將兩頭送檢病豬處死，剖檢，無菌采取血液、肺臟、肝臟等作為病原分離材料，根據需要剪取適當大小的組織塊，盛于無菌容器內，在4℃條件下暫時存放，備用。

1.1.2 培養基

改良馬丁氏瓊脂（牛肉湯500 mL，改良豬胃消化液500mL，氯化納2.5 g，瓊脂20 g，pH 7.4～7.6，滅菌30～40分鐘）。麥康凱瓊脂（蛋白胨17 g，豬膽鹽5 g，氯化鈉5 g，瓊脂17 g，乳糖10 g，蒸餾水100 mL，0.01%結晶紫水溶液10 mL，0.5%中性紅水溶液5 mL，pH 7.3～7.4），購于杭州微生物試劑有限公司。馬丁氏肉湯（牛肉湯500 mL，豬胃消化液500 mL，氯化鈉2.5 g，pH 7.2～7.6）。鮮血瓊脂（每100 mL改良馬丁氏瓊脂加入家兔鮮血10 mL）。

1.1.3 革蘭氏染色液

草酸銨結晶紫染液，A液：結晶紫2 g，95%乙醇20 mL；B液：盧戈碘液（碘片1 g，碘化鉀2 g，蒸餾水300 mL，先將碘化鉀溶解于少量水中，再將碘片溶碎在碘化鉀溶液中，待碘全部溶解后，加足水份即成）；95%的乙醇溶液；番紅復染液（番紅2.5 g，乙醇100 mL，取上述配好的番紅乙醇液10 mL與80 mL蒸餾水混勻即成）[2]。

1.1.4 生化發酵管

包括葡萄糖、半乳糖、蔗糖、甘露醇等發酵用的小試管，購于北京索萊寶科技有限公司。

1.1.5 藥敏紙片

包括阿莫西林、鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、環丙沙星等紙片，購于哈爾濱華通醫療設備公司。

1.1.6 實驗動物

20～25 g健康小白鼠4只。

1.2 方法

1.2.1 細菌的分離

先用燒灼滅菌的手術刀片燒烙組織表面，然后在燒烙處用剛才的手術刀片切開組織，用滅菌的接種環在切開組織內挑取部分組織，分別劃線接種于改良馬丁氏瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿、鮮血瓊脂平皿；組織制成懸液接種于馬丁氏肉湯小管培養基。采用連續劃線法：右手持接種環，通過火焰滅菌，冷卻后，在切開的組織內稍用力接觸，左手持起培養基平板，先將環上組織涂于瓊脂平板一角，然后用接種環自該部位開始，向左向右并逐漸向下移動，連續劃成若干條分散的平行線，劃線完畢后平皿倒置，36～37℃培養18～24小時。

1.2.2 細菌的純培養

取出上述接種的鮮血瓊脂平皿，選擇典型的灰白色菌落做純培養。用燒灼滅菌的接種環小心挑取單個菌落，移種于鮮血瓊脂平板；用接種環先將培養物涂布在平板第一區并作數次劃線，再在二、三、四區依次用接種環劃線；每劃一個區域，應將接種環燒灼一次，待冷卻后再劃下一個區域，每一區域的劃線應接觸上一區域的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以形成單個菌落；劃線完畢后倒置，37℃恒溫需氧培養18～24小時后，于4℃條件下存放。

1.2.3 革蘭氏染色鏡檢

用接種環挑取一環生理鹽水于潔凈玻片上，再用接種環挑取少量純培養的細菌于玻片上的生理鹽水混合，并均勻涂布于玻片上，自然干燥用火焰固定；在玻片上滴加草酸銨結晶紫染色液,作用1～3分鐘，水洗；加盧戈碘液于玻片上媒染，作用1分鐘，水洗；再加95%的酒精脫色，作用15～30秒，水洗；加番紅復染液復染1分鐘，水洗，自然干燥后鏡檢[2]。

1.2.4 生化實驗

進行糖（苷、醇）類發酵實驗，實驗方法與結果判定方法如下：無菌操作，用接種針取純培養的待檢菌接種于各糖類微量發酵管，倒置37℃溫箱內培養18～24小時后觀察結果。如細菌能分解此種糖類產酸，則指示劑呈酸性變化，發酵管中顏色發生改變；不分解此種糖類，則無顏色變化；產氣可使倒置的小管內出現氣泡。

1.2.5 藥敏實驗

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分，溶解后不斷地向紙片周圍區域擴散，形成遞減的濃度梯度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內細菌生長被抑制，從而產生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度[3]。

具體操作與結果判定方法如下：①于純培養平皿上，挑取單個菌落均勻涂布于鮮血瓊脂平板內；②用無菌小鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于瓊脂表面，各距離要相等，每張紙片的間距不小于24 mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15 mm，然后倒置于37℃培養24小時；③平板取出后，仔細觀察藥敏紙片周圍有無抑菌圈形成，根據抑菌圈直徑的大小可判定菌株的各藥敏紙片的敏感性。

1.2.6 動物實驗

將病料研磨成糊狀，加10倍滅菌生理鹽水稀釋成懸液，用此懸液皮下注射3只小白鼠，每只0.2 mL，并觀察結果。

2 結果

2.1 細菌分離結果

培養18～24小時后，改良馬丁氏瓊脂平皿生長純粹的培養物，有圓形、灰白色、濕潤的露珠狀菌落。馬丁肉湯培養物生長開始輕度混濁，4～6小時后液體清亮，管底出現粘稠沉淀，震搖后不分散，表面形成菌環。鮮血瓊脂平皿上長出單個菌落，菌落周圍不溶血，肉眼觀察為光滑圓整、半透明、灰白色。麥康凱瓊脂平皿上不生長。

2.2 革蘭氏鏡檢結果

鏡檢看見兩端鈍圓濃染的革蘭氏陰性球桿狀菌，初步確定為巴氏桿菌。

2.3 糖 （苷、醇）類發酵實驗結果

3個平行實驗的結果見表1。

2.4 藥敏結果

藥敏結果見表2。

2.5 動物實驗結果

接種的3只小白鼠均在24～48小時內死亡，對照小白鼠在2～3天內無

表1 糖 （苷、醇）類發酵實驗結果

表2 藥敏結果

明顯變化，剖檢取3只死亡小白鼠的肝組織分別做涂片，按上述方法進行革蘭氏染色，鏡檢下發現大量兩端鈍圓革蘭氏陰性的細小球桿菌。

3 診斷

根據流行病學、臨床癥狀、實驗室診斷等綜合分析，確診為豬巴氏桿菌病。

4 治療

隔離發病豬只，進行專人飼養，全場用10%的石灰乳或3%的氫氧化鈉進行消毒。

對發病豬采用高敏藥物，選用氟苯尼考注射液或恩諾沙星注射液進行治療。部分病豬肌肉注射氟苯尼考注射液，按每公斤體重10～20 mg，隔48小時一次；另一部分肌肉注射恩諾沙星注射液，按每公斤體重2.5 mg，每日1～2次。對少數高熱病豬肌肉注射10%安乃近注射液，每次每頭5～10mL。

在未發病豬群的飼料中添加環丙沙星（每50 kg水中添加30 g，每日兩次）、氟苯尼考（每1 000 kg飼料中添加200～300 g，每日兩次）等藥物混飲、混飼。

加強飼養管理，連續用藥，對環境差的育肥豬舍進行整頓，注意保溫與通風，增強豬體抵抗力。

三周后育肥豬舍病情已基本穩定，沒有新的病例發生，大部分豬的精神與進食恢復正常，少數病豬仍有慢性呼吸道感染癥狀。隨后進行全群免疫，皮下注射豬肺疫氫氧化鋁菌苗（5 mL/頭）。直至所有育肥豬成熟上市，該場未發生相同病例。

5 分析

由于巴氏桿菌為條件性致病菌，所以豬群擁擠、衛生條件差、通風不良、寒冷、氣溫驟變等因素都可導致豬群機體抵抗力下降，病原菌侵入機體幾率加大。此次發病可能是一棟育肥豬舍環境簡陋，導致豬群抵抗力下降而傳染給另外的豬群。

對于此病豬場應及早發現，及早治療，以免引起繼發感染，引發其他呼吸道疾病，造成較大的經濟損失[4]。

治療豬肺疫的藥物常常花費很高，且效果不佳。因而預防本病尤為重要，應從加強飼養管理，改善飼養環境和減少細菌傳播等方面入手。主要有以下幾點：做好早期斷奶和隔離；做好圈舍消毒和清潔衛生工作，可選用燒堿、生石灰、百毒殺等消毒藥物，消除降低豬抵抗力的因素，防止疾病發生；加強場內人員管理，各個舍的飼養員不準互串崗位，獸醫人員分崗位管理；盡量減少混群和分群及豬群的密度；病死后豬的尸體消毒后妥善處理；豬場不應從外地盲目引進生豬，對引進的生豬應進行7～15天的隔離觀察，待穩定后要及時進行豬肺疫單苗的免疫。

每年春秋兩季定期用豬肺疫疫苗進行免疫接種。方法有三：一是用豬肺疫氫氧化鋁疫苗5 mL/頭進行皮下注射，14天后產生免疫力，免疫期為6個月，半月內禁用抗生素；二是口服豬肺疫弱毒凍干菌苗，7天后產生免疫力，免疫期為6個月，1周內禁用抗生素；三是注射豬肺疫免疫血清，使用預防注射量，即仔豬20mL/頭，中豬30 mL/頭，大豬40 mL/頭[4]。

本次試驗中藥敏試驗結果表明，巴氏桿菌對阿莫西林、青霉素、復方新諾名、鏈霉素、卡那霉素、四環素低度敏感，對恩諾沙星、環丙沙星、氟苯尼考高度敏感。通過藥物試驗篩選經濟、療效好、高敏的藥物進行治療，既可以取得良好的治療效果，又可為該病的治療提供參考依據。

[1]趙占民.動物傳染病學.北京:中國農業科技出版社，1996:193-196

[2]孫彬,徐益斌,徐連均.雛雞沙門氏菌的分離、鑒定以及藥敏試驗.北京農業,2008, 30:32-34.

[3]李沂軒.陰道加德納菌與細菌性陰道病相關性研究:[碩士論文].天津:天津醫科大學,2006.

[4]陶春中,霍文明.豬肺疫的診斷與治療.動物科學與動物醫學,2005,22(1): 52-53.

S858.28

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1673-4645(2013)06-0046-03

2013-01-23