子宮肌瘤動物模型研究

景慧芳,張曉

(1.南京中醫藥大學,江蘇南京210029;2.南京市中醫院,江蘇南京210009)

子宮肌瘤是女性生殖器最常見的良性腫瘤,其發病率有逐年上升的趨勢,而病因和發病機制尚不明確。目前治療子宮肌瘤最根本的手段是手術治療,因為手術治療的局限性和患者自身的意愿,藥物保守治療顯得尤為重要,中醫藥辨證治療子宮肌瘤的臨床效果明確,適宜的動物模型是發病機制研究和臨床前藥物篩選的關鍵。筆者回顧近年來子宮肌瘤動物模型的相關文獻,以期為子宮肌瘤的中醫動物實驗研究提供幫助。

1 自發性子宮肌瘤動物模型

自發性子宮肌瘤動物模型以Eker鼠為代表。Eker鼠存在tuberous sclerosis complex 2(Tsc-2,結節硬化復合物2)腫瘤抑制基因的缺陷。65%的雌性未交配Eker鼠可自發地形成子宮肌瘤,且其表現、對激素的反應及在分子水平的改變與人類子宮肌瘤相似[1]。

2 免疫缺陷動物移植性子宮肌瘤模型

這類模型的實驗動物有NOD/SCID鼠和無胸腺裸鼠。NOD/SCID鼠缺乏IL-2家族共同因子受體鏈基因[2],無胸腺裸鼠存在第11對染色體上等位基因的突變。Hiroshi Ishikawa等[3]將人子宮肌瘤組織植入NOD/SCID鼠的腎包膜下,移植的子宮肌瘤組織存活率近100%;且移植瘤保留了原子宮肌瘤的生物學特征[4]。Shahram Vaezy等[5]在60只8～10周無胸腺裸鼠的單側肩胛上注射3×106～5×106子宮肌瘤細胞,每周測量并計算肌瘤的大小,3個月后51只裸鼠成功造模。

3 誘發性子宮肌瘤動物模型

3.1 單一雌激素誘導法 孫虎等[6]選雌性未孕Wistar大鼠造模,予肌內注射己烯雌酚0.02 mL/只(含藥0.04 mg),隔日1次,連續5周造模成功。Porter等[7]認為卵巢中的某些因素會抑制因雌激素刺激而引起的子宮肌瘤生長,而隨著患者年齡的增長,這種保護作用減弱。這提示實驗動物在雙側卵巢摘除后給予雌激素誘導可能更易造出子宮肌瘤的動物模型,朱焰等[8]選用性成熟的豚鼠,在摘除雙側卵巢后經皮下注射E2100 μ g/只,2次/周,連續12周,成功造模。在單一雌激素誘導子宮肌瘤動物模型造模的過程中,動物死亡率與E2誘導頻率呈正相關,與E2給藥周期可能存在正相關,但因為給予高劑量E2時動物死亡時間均早于低劑量組,所以動物死亡率與E2給藥劑量之間的關系尚不明確;E2誘導劑量與肌瘤發生率呈正相關,延長E2的作用時間或許并不能顯著提高肌瘤形成率[9-10]。

3.2 雌、孕激素協同誘導法

3.2.1 雌激素全程給藥、后期加入孕激素 蔣秋燕等[11]取SD大鼠每周3次肌內注射苯甲酸雌二醇0.05 mg/100 g,連續3個月,第4個月起每周2次加注黃體酮0.5 mg/100g,連續1個月;每周稱重1次,并根據體質量調整激素用量;4月后造模成功。雷呈志等[12]選用清潔級實驗用雌性豚鼠,給予苯甲酸雌二醇0.1mg/d腹腔注射,每周3次,第12～16周加用黃體酮1 mg/d腹腔注射,每周1次,16周后造模成功。

3.2.2 雌激素早期給藥、后期改為孕激素 奚劍敏等[13]取未孕SD系清潔級雌性大鼠造模,腹腔注射苯甲酸雌二醇0.05 mg/100 g,每天1次,連續25 d后,改為腹腔注射黃體酮注射液0.4 mg/100 g,每天1次,連續5 d;30 d后造模成功。李東華等[14]也用此法應用于Wistar雌性健康成年未孕大鼠成功造模。

3.2.3 雌、孕激素全程聯用 胡舒勤等[15]取清潔級雌性SD大鼠,肌注苯甲酸雌二醇0.06 mL(含藥量0.12 mg),每周3次;同時肌注黃體酮0.05 mL(含藥量1 mg),每周1次,16周后造模成功。在雌、孕激素協同誘導造模過程中,在造模的初期可能會出現大鼠活動減少,倦怠、精神欠佳等情況,有的大鼠進食減少,生長緩慢,毛豎立無光澤,易激惹,部分大鼠出現脫毛、四肢炎性腫塊等現象[11,14],而動物死亡的情況鮮有報道。

4 討論

國外子宮肌瘤動物模型多為自發性或免疫缺陷動物移植模型,國內因條件所限多選誘發性子宮肌瘤動物模型。就造模的成功率而言,將人類子宮肌瘤組織植入NOD/SCID鼠的腎包膜下來形成子宮肌瘤動物模型的成模率最高,近100%;其次為在無胸腺裸鼠單側肩胛上注射子宮肌瘤細胞,為85%;再次為雌性未交配Eker鼠,自發性成膜率為65%;而國內普遍使用的誘導性模型的成模率僅為27%～41%[16]。

在誘導性子宮肌瘤動物模型中,雌孕激素協同誘導法較單一雌激素誘導法的動物死亡率低,且有研究[17]表明雌、孕激素同用的造模方法成型穩定,且與子宮肌瘤的發病原因相吻合,更易觀察到藥物的預防和實驗治療作用,綜合評價優于單用雌激素造模的方法。雌孕激素協同誘導造模法根據造模周期不同分為短期和長期2種,研究[18]表明長期雙模法更符合子宮肌瘤發展緩慢、病程長的特點,造模更穩定、更成功,可作為進一步實驗模型的選擇。應用雌孕激素協同長期誘導大鼠或豚鼠形成子宮肌瘤的動物模型更適宜子宮肌瘤的研究,但激素的給藥劑量、頻率、周期目前尚不統一,還需進一步研究。

目前,文獻中報道的子宮肌瘤證型模型僅血瘀證1種,中醫藥治療疾病需辨證論治,子宮肌瘤的中醫分型多樣,兩者之間存在的差異可能對子宮肌瘤的中醫動物實驗研究造成一定的不良影響,適宜于子宮肌瘤的中醫動物實驗研究的證型模型還應繼續完善。

[1]Cheryl LW,Deborah H,Jeffery I.Everitt.Uterine Leiomyoma in the Eker Rat:A Unique Model for Important Diseases of Women[J].Geen,Chromosomes&Cancer,2003,38:349-356.

[2]Macchiarini F,Manz MG,Palucka AK,et al.Humanized mice:are we there yet[J].JEM,2003,202(10):1307-1311.

[3]Ishikawa H,Ishi K,Serna VA,et al.Progesterone is essential for maintenance and growth of uterine leiomyoma[J].Endocrinology,2010,151(6):2433-2442.

[4]王梅梅,凌斌,陳錚錚,等.人子宮肌瘤SCD鼠皮下移植瘤的建立及其生物學研究[J].中國臨床保健雜志,2006(5):462-464.

[5]Vaezy S,Fujimoto VY,Walker C,et al.Treament of uterine fibroidtumorsin a nude mouse model using high intensity focused ultrasound[J].GeneralObstetrics andGynecology,2000,183(1):6-11.

[6]孫虎,孫蓉,趙衍剛.宮瘤平顆粒對子宮肌瘤模型大鼠瘤樣增生的影響[J].山東中醫雜志,2005,24(8):493-495.

[7]Porter KB,Tsibris JC,Nicosia SV,et al.Estrogen-induced guinea pig model for uterine leiomyomas:Do the ovaries protect?[J].BiolReprod,1995,52(4):824-832.

[8]朱焰,邱小燕,吳建輝,等.子宮肌瘤動物模型的建立[J].中國藥理學報,2006,22(3):374-378.

[9]徐曉麗.子宮肌瘤動物模型細胞凋亡及其調控因素的研究[D].北京:中國中醫科學院,2006.

[10]陳海剛,朱蘭,崔全才,等.雌激素制備大鼠子宮肌瘤動物模型[J].中國醫學科學院學報,2011,33(4):408-411.

[11]蔣秋燕,馮春泉,唐玉云,等.消煎膏直腸給藥對大鼠子宮肌瘤細胞凋亡的研究[J].廣西中醫學院學報,2008,11(2):4-6.

[12]雷呈志,向陽,敖國昆,等.達那唑海藻酸鈉微球用于豚鼠子宮肌瘤動脈栓塞術后細胞凋亡的研究[J].中國實用婦科與產科雜志,2008,24(8):188-191.

[13]奚劍敏,丁正香,子宮肌瘤大鼠模型的病理改變及病因分析[J].現代生物醫學發展,2010,10(3):466-469.

[14]李東華,謝小磊,張亞蘭,等.扶正祛瘀中藥調控子宮肌瘤模型大鼠p53信號通路基因表達譜的研究[J].中國婦幼保健,2010,25(33):4910-4913.

[15]胡舒勤,鄭紅兵.桂枝茯苓膠囊對實驗性子宮肌瘤中孕激素受體和胰島素樣生長因子I的影響[J].湖北中醫雜志,2005,27(4):6-9.

[16]朱麗紅,胡婷婷,嚴維娜,等.雌、孕激素負荷法大鼠子宮肌瘤模型的建立[J].陜西中醫學學報,2009,32(4):72-75.

[17]李冬華.子宮肌瘤大鼠模型制備方法之比較[J].中國現代醫學雜志,2005,15(24):3700-3702.

[18]王占利,李坤寅,趙穎,等.長期與短期雙模法子宮肌瘤大鼠模型制備的比較[J].中醫研究,2012,25(5):54-57.