甘石青黛膏對大鼠亞急性濕疹模型皮損的影響

孫占學　趙麗娟　張豐川　李元文

濕疹是由多種內外致病因素引起的一種具有滲出傾向的皮膚炎癥反應，屬于IV型變態反應[1]。皮疹表現為紅斑、丘疹、水腫、水皰、結節、表皮剝脫、苔蘚化等多型性損害，伴有劇烈瘙癢，易復發。濕疹屬于中醫“濕瘡”范疇，是皮膚科常見難治性疾病。北京中醫藥大學東方醫院應用甘石青黛膏治療濕疹多年，臨床療效顯著。本課題主要從實驗角度進行研究，以大鼠亞急性濕疹模型為研究對象，從皮損紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化等方面進行療效觀察，為研究中藥甘石青黛膏治療濕疹作用機制奠定基礎。

1　材料與方法

1.1　實驗動物

SD大鼠40只，4～5周齡健康，雄性，清潔級，體重(290±6)g，購于北京北京維通利華動物中心，合格證號：0220333,許可證號：SCXK(京)2006-0009。

1.2　藥物與試劑

治療藥物：甘石青黛膏，處方組成(以下藥物為道地藥材飲片粉碎成微粉后稱取的重量)：煅石膏38.6 g、爐甘石25 g、滑石110.8 g、青黛6.5 g、枯礬6.5 g、苦參128.8 g、冰片12.8 g。另稱取白凡士林537 g，應用水浴箱加熱熔化，待冷卻至40～50 ℃，加入上述微粉，攪勻，自然冷卻后，分裝密封，10 g/盒，其中含生藥38%。

對照藥物：白凡士林，批號：蘇衛藥準字(82)第3014-1，南京長江石化有限公司。

主要試劑：硫化鋇，硫化鈉，2.4-二硝基氯苯(dinitrochloro-benzo,DNCB)，98%戊巴比妥鈉，丙酮，醫用淀粉，液態氮，福爾馬林溶液。

1.3　分組與模型制備

常規飼養大鼠7天后，隨機分為2組，安慰劑組、甘石青黛膏組每組20只。兩組大鼠體重比較沒有顯著性差異，具有可比性。飼養過程中甘石青黛膏組死亡2只，安慰劑組死亡1只。

造模方法參考文獻[2-3],略有更改。

脫毛：給予2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，在每只大鼠背部標記甲乙兩處，甲處面積約0.5 cm×0.5 cm，乙處面積約1 cm×1 cm，兩處間隔2 cm；應用剪刀剪除長毛，應用備皮刀刮凈鼠毛，再用6%硫化鈉混合適量淀粉糊涂抹在剃毛區，等待4分鐘，然后應用紗布蘸溫水輕輕揩去硫化鈉淀粉糊。

造模：剃毛區甲處涂7%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液致敏。2周后，在安慰劑組、甘石青黛膏組剃毛乙處涂0.1%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液，每周激發1次，療程4周。

大鼠亞急性濕疹模型造模成功后，大鼠背部皮損均出現紅斑、丘疹、結痂、少許滲出、部分皮損表現表皮剝脫、鱗屑。組織病理表現為表皮細胞內水腫，棘層增厚，角化過度及角化不全，血管周圍淋巴細胞浸潤。

1.4　藥物干預

甘石青黛膏組予甘石青黛膏外涂干預。于造模成功次日，繼續常規飼養之外，在剃毛區乙處，甘石青黛膏外涂干預治療，每次取藥0.6 g(即0.15 g/cm2)，輕輕按摩10圈，以不黏膩為度，每日涂藥2次，療程2周。

安慰劑組予白凡士林干預，干預方法同甘石青黛膏組。

1.5　觀察指標與療效評定方法

大鼠亞急性濕疹模型皮損判定指標：具有紅斑、丘疹、結痂、少許滲出、表皮剝脫、鱗屑。

皮損療效評定方法：皮損的評分采用趙辨濕疹面積及嚴重度指數(eczema area and severity index，EASI)評分法[4]，臨床表現分為4項，即：紅斑、硬腫(水腫)/丘疹、表皮剝脫、苔蘚化。每一臨床表現的嚴重度評分參考Berth-Jones[5-6]的六區域六體征異位性皮炎評分法。即以0～3分計分，0=無，1=輕，2=中，3=重，各種癥狀分值之間可記半級分，即0.5。

皮損總體療效評定方法：參照《中藥新藥臨床研究指導原則》(試行)療效判定標準，略作改動，僅以皮疹(紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化)治療前后的總積分變化來判斷療效，分4級判定。計算公式(尼莫地平法)為：[(治療前積分-治療后積分)/治療前積分]×100%。臨床痊愈：皮損基本全消退，癥狀積分減少95%。顯效：皮損大部分消退，95%>癥狀積分減少≥70%。有效：皮損部分消退，70%>癥狀積分減少≥50%。無效：皮損消退不明顯，癥狀積分減少不足50%。總有效率=(痊愈+顯效)例數/總例數×100%

1.6　統計學分析

2　結果

2.1　皮損療效評定

兩組大鼠濕疹模型在干預前皮損積分比較經t檢驗，P>0.05，差異無統計學意義。

干預之后，安慰劑組紅斑、水腫、表皮剝脫較治療前有所改善，經t檢驗P>0.05，差異無統計學意義。而苔蘚化改善明顯，經t檢驗P<0.05，差異有統計學意義。

甘石青黛膏組紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化較治療前均有明顯改善，經t檢驗P<0.01，差異有統計學意義。

甘石青黛膏組治療后和安慰劑組治療后，在紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化相比較，經t檢驗，P<0.01，差異有統計學意義，甘石青黛膏療效優于安慰劑。

表1　甘石青黛膏和安慰劑對大鼠濕疹模型皮損的

注：與甘石青黛膏組治療前比較，aP>0.05；與安慰劑組治療前比較，bP>0.05，cP<0.05；甘石青黛膏組治療后與治療前比較，dP<0.05；甘石青黛膏組治療后和安慰劑組治療后比較，eP<0.05。

2.2　皮損總體療效評定

兩組大鼠濕疹模型干預后皮損均有不同程度的改善，其中，安慰劑組總有效率為42.10%，甘石青黛膏組總有效率為72.22%，經Wilcoxon秩和檢驗，Z=-2.124,P<0.05，差異有統計學意義。見表2。

表2　兩組皮損總體療效比較

3　討論

中醫外治濕疹多選用清熱解毒、祛風止癢、收斂生肌等藥物，外治之法在濕疹治療過程中占有重要地位，中藥外治濕疹具有直達病所，迅速止癢，劑型變化靈活等特點，非常適合濕疹的多形性損害伴瘙癢劇烈特征。本課題采用中藥甘石青黛膏為治療藥物干預大鼠濕疹模型皮損，研究結果表明甘石青黛膏對于消除紅斑、水腫，促進表皮修復以及消除鱗屑方面具有較好的療效，總有效率為72.22%，明顯高于安慰劑療效(42.10%，P<0.01)。另外，本課題采用在大鼠背部進行濕疹造模方法，一方面濕疹皮損面積大，利于觀察皮損，解決既往研究以大鼠或小鼠耳部為濕疹造模部位，皮損局限之弊；另一方面，分別從紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化等皮損進行逐項觀察、療效評定以及總體療效判定，比較全面反映甘石青黛膏治療濕疹效果。甘石青黛膏為中草藥制劑，主要成分為煅石膏、爐甘石、滑石、青黛、枯礬、苦參、冰片等。其中青黛清熱解毒，現代研究青黛具有抑制角質細胞增殖作用；煅石膏、滑石粉、煅爐甘石能收斂止癢；苦參燥濕止癢，具有殺菌效果；冰片、枯礬清涼止癢、軟堅散結[7-8]。諸藥共同發揮清熱燥濕、祛風止癢功效。實驗研究結果表明甘石青黛膏可以明顯控制紅斑、水腫、表皮剝脫及苔蘚化，療效顯著。但是甘石青黛膏以凡士林膏為基質，主要成分含有青黛，應用后皮膚黏膩，染衣著色，給應用帶來不便。下一步準備從基質改良，藥物脫色方面進行研究，以利于推廣。

[1]趙辨.臨床皮膚病學[M].3版.南京:江蘇科學技術出版社, 2001:604.

[2]Boyera N, Caver D,Bouclier M, et al.Repeated application of dinitrochlorobenze to the ears of sensitized guinea pigs: Apreliminary characterization of a potential new animal model for contact eczema in humans[J].Skin Pharmacol，1992，5(3)：184-188.

[3]蘆源,關洪全.小鼠背部慢性皮炎—濕疹模型的初步研究[J]. 遼寧中醫藥大學學報, 2009,11(10):181-182.

[4]趙辨. 濕疹面積及嚴重度指數評分法[J]. 中華皮膚科雜志,2004,37(1):3-4.

[5]Berth-Jones J. Six area six sign atopic dermatitis(SASSAD) severity score: a simple system for monitoring disease activity in atopic dermati-tis[J]. Br J Dermatol, 1996,135 (Suppl48):25-30.

[6]Fuchibe K Nabe T，Fujii M，et a1．Delayed type allergic itch-associated response induced by toluene-2,4-diisocyanate in hairless mice[J]．J Pharma-col Sci,2003,93(1):47-54.

[7]李楠,張豐川,李元文.復方甘石青黛膏治療皮炎濕疹的臨床觀察[J].環球中醫藥,2009，2(4)：280-281.

[8]孫占學,李元文,李曰慶,等.甘石青黛膏治療神經性皮炎66例臨床療效觀察[J].中華中醫藥雜志, 2010，25(11)：1849-1851.