湖州地區蟬花中小極性組分的氣質聯用分析

歐曉陽，許閃閃，袁 強

(1.浙江中醫藥大學藥學院，杭州 310053；2.浙江中醫藥大學附屬第二醫院，杭州 310005)

蟬花[1]為麥角菌科大蟬草(CordycepscicadaeShing)的無性型蟬擬青霉(PaecilamycescicadaeMiqueSamson)寄生在蟬科昆蟲山蟬(CicadaflammataDist)若蟲上的子座及若蟲尸體形成的蟲菌復合體，主產于浙江、四川、安徽、福建、廣東、云南、江蘇等地。蟬花是菌蟲復合體藥材，主要藥用部位為子座及寄主昆蟲的尸體(菌核)。宋代唐慎微所著的《經史證類備急本草》中記述：“蟬花，味甘，寒，無毒。主小兒天吊，驚癇螈，夜啼心悸。”現代研究證明蟬花具有免疫調節[2]，滋補強壯[3]，抑制腫瘤[4-5]等作用。本文對采集自浙江湖州地區的蟬花進行化學成分研究，根據相似相容原理，選定石油醚為其小極性溶劑，乙酸乙酯為其中等極性溶劑，報道其中石油醚部位和乙酸乙酯部位17個化合物的定性分析結果。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHIMADZU GC/MS-QP 2010氣相色譜-質譜聯用儀，配備電子轟擊源(EI)、SIL-10Advp自動進樣器；Sartorius-BS110S型分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)；FA2004AN型電子分析天平(上海恒平科學儀器有限公司)；KQ5200超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司);R-204型旋轉蒸發儀(上海申生科技有限公司)；HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2 藥材與試劑 蟬花藥材收購自湖州地區，經浙江中醫藥大學藥學院宋捷民教授鑒定，蟬花為麥角菌科真菌蟬擬青霉(Paecilomycescicadae(Miq.)Samson)寄生于蟬蛹體上的干燥復合體。乙醇、石油醚、乙酸乙酯均為分析純。

2 樣品的提取分離與分析方法

2.1 蟬花樣品的制備[6-7]取蟬花粉末(過三號篩)50 g,加10倍量95%乙醇加熱回流提取3次，每次3 h，合并提取液，減壓回收乙醇至無醇味，得干浸膏。將此浸膏分散于1 000 mL去離子水中，超聲制成水混懸液。依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取，分別得到石油醚萃取部位(A)和乙酸乙酯萃取部位(B)。

A：回收溶劑，得到石油醚部位浸膏，浸膏用適量丙酮溶解后，作為供試品溶液。

B：回收溶劑，得到乙酸乙酯部位浸膏，浸膏用適量丙酮溶解后，作為供試品溶液。

2.2 GC-MS色譜條件[8-9]GC分析條件：Rtx-5MS毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷倫公司)；載氣：He(純度99.999%)；柱流速控制；恒壓：67.2 Mpa；載氣總流速:30 mL/min；柱流速：1.19 mL/min。不分流進樣：1 μL；柱溫箱程序升溫：初溫50 ℃，以10 ℃/min數率升至100 ℃,然后從100 ℃以6 ℃/min數率升至280 ℃(保持15 min)。

EI/MS分析條件:氣相色譜-質譜接口溫度：230 ℃；離子源真空度：0.1 MPa；離子源溫度:200 ℃；電子能量：70 eV；燈絲電流：60 μA；檢測器電壓：0.78 kV；四極桿溫度：150 ℃；溶劑延遲時間4.0 min；調諧方式：自動調諧；質量掃描范圍：60-450 amu；SIM掃描方式間隔：0.2 s。

3 結果

吸取各供試品溶液1 μL,進樣，按照2.2項下的實驗條件進行GC-MS分析，得到GC-MS總離子流圖。通過氣相質譜分析工作站NIST質譜標準圖庫進行檢索，按各色譜峰的質譜裂解碎片圖與文獻核對，對基峰質荷比和相對峰度等進行比較，并參照有關文獻進行鑒定確認，從而鑒定出蟬花醇提物石油醚部位和乙酸乙酯部位化合物，共17種。

蟬花石油醚部位的化合物經定性分析，主要成分為正十三烷、甘菊藍、正十六烷、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸乙酯、十五酸乙酯、二十五烷酸、棕櫚酸乙酯、硬脂酸、反式角鯊烯、麥角甾醇，見表1，總離子流圖見圖1。

表1 蟬花石油醚部位的化合物定性分析結果

蟬花乙酸乙酯部位的化合物經定性分析，主要成分為肉豆蔻酸乙酯、吡咯烷乙酸乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、酚酞二丁酯、十八酸乙酯、膽甾醇、月桂酸，見表2，總離子流圖見圖2。

表2 蟬花乙酸乙酯部位的化合物定性分析結果

圖1 蟬花石油醚部位總離子流圖(TIC)色譜圖

圖2 蟬花乙酸乙酯部位總離子流圖(TIC)色譜圖

4 討論

蟬花為浙江省特色中藥資源，長期以來的臨床應用及科學研究表明蟬花具有類似冬蟲夏草的功效，而價格只占到冬蟲夏草的百分之一，是理想的冬蟲夏草的代用品。

本實驗對蟬花進行乙醇提取，對石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位的化學成分進行了研究，將分離得到的成分統一進行了定性鑒別。采用氣質聯用共鑒定出17種化學成分，其中麥角甾醇、膽甾醇、甘菊藍、硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸等為蟬花、冬蟲夏草共有成分[10-12]。

此外，王琪等[13]指出麥角甾醇為蟬花的活性成分之一，具有抗氧化能力，其作用部分等同于維生素D2[14]，能維持及調節血漿鈣、磷正常濃，對防治兒童佝僂病、老年骨質疏松有重要作用[15]。有研究[16]初步表明麥角甾醇可以抑制對人肝癌細胞HepG2增殖。甘菊藍對傷口具有抗菌消炎作用。角鯊烯對人體和動物體有解毒作用，能治療皮炎和潰瘍等，并且具有較好的抗腫瘤作用[17]。以上均是對人體有益的生理活性物質。揮發油成分如肉豆蔻酸、十五酸乙酯、十八酸乙酯、月桂酸等，是蟬花的致香成分，應用于多種食用香精配方，使蟬花蟲體具有香味。

本研究能更全面、真實地反映出蟬花藥材中的化學組分，為蟬花替代冬蟲夏草提供了實驗數據，并為蟬花的進一步開發提供了物質基礎，也對浙江湖州產地的蟬花鑒別提供了一定的依據。

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