骨刺消膠囊中水提工藝的正交試驗(yàn)研究

王文驪 劉軍鋒 高錦成 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（咸陽(yáng)712000）

骨刺消膠囊由海馬、鹿角膠、續(xù)斷、杜仲等十六味藥材組成，具有補(bǔ)益肝腎、舒筋活血、通絡(luò)止痛的功效。臨床上主要用于骨質(zhì)增生，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病［1］。杜仲、續(xù)斷等七味藥材作為水提工藝的主要藥物，川續(xù)斷皂苷Ⅵ作為續(xù)斷的主要代表成分。為了有效的控制該工藝，我們通過(guò)正交工藝設(shè)計(jì)，對(duì)骨刺消膠囊水提工藝采用高效液相色譜法測(cè)定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，結(jié)合干膏率兩個(gè)指標(biāo)，確定最佳工藝。

1 儀器與試藥 1.1 儀器 日本島津2010液相色譜儀，class－vp數(shù)據(jù)工作站；BP211D型電子分析天平（德國(guó)塞多利斯天平有限公司）d＝0.01mg；BS210S型電子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）d＝0.1mg；LXJ－Ⅱ型臺(tái)式離心機(jī)（南京第一醫(yī)療器械廠）；DK－98－ⅡA型水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥 杜仲、續(xù)斷等七味藥材購(gòu)于陜西省藥材公司。川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品檢驗(yàn)鑒定中心（批號(hào)：111685－200401）。乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果 2.1 檢測(cè)方法的確定 2.1.1干膏率的測(cè)定：按1／10處方量比例，稱取杜仲、續(xù)斷、威靈仙各1.8g，熟地6.5g，澤瀉2.4g，山楂2g，黃芪1.5g，平行9份，隨機(jī)取樣編為1～9個(gè)試驗(yàn)號(hào)。按正交表表2中每個(gè)試驗(yàn)號(hào)要求進(jìn)行試驗(yàn)，合并提取液，濾過(guò)，精密量取濾過(guò)后的濾液100mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h，迅速稱重，計(jì)算干浸膏得率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.2 測(cè)定川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量［2］：供試品溶液的制備按連翹藥材1g量計(jì)，精密量取離心濾過(guò)后的濾液適量，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?0mL甲醇轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品2.77mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含0.11mg的溶液，即得。

色譜條件 色譜柱：C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（30：70）；檢測(cè)波長(zhǎng)：212nm；進(jìn)樣量10μL；流速：1.0mL。理論板數(shù)按川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

干擾性試驗(yàn)：按處方比例照樣品制備工藝制成陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。在上述色譜條件下，進(jìn)樣10μL，依法測(cè)定，結(jié)果表明處方中其它成分對(duì)川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量測(cè)定無(wú)干擾。

含量測(cè)定：取樣品，平行操作2次。每次分別精密量取對(duì)照品和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

2.2 正交試驗(yàn) 2.2.1 試驗(yàn)因素和水平設(shè)定：通過(guò)多因素的正交試驗(yàn)，優(yōu)選水提取工藝的各項(xiàng)參數(shù)。以水提取干浸膏得率及川續(xù)斷皂苷Ⅵ提取量作為考核指標(biāo)，以選擇最佳的工藝參數(shù)。影響水提取的主要因素有加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)，故我們選擇正交方式進(jìn)行設(shè)計(jì)研究。為了系統(tǒng)考察水提取的工藝參數(shù)，我們?cè)O(shè)計(jì)的因素與水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果具體見(jiàn)表2。

2.2.3 將正交試驗(yàn)結(jié)果分析：結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 L9（34）正交表及正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 干浸膏得率及川續(xù)斷皂苷Ⅵ提取量方差分析

由表2K及R值可知，以干浸膏得率為考察指標(biāo)時(shí)，A3＞A2＞A1，B2＞B1＞ B3，C3＞C2＞C1，C因素影響最大，B、A因素次之。結(jié)合表3干浸膏得率方差分析知，各因素作用主次為C＞A＞B，其中C因素影響比較顯著，A、B次之，D因素影響較小，均無(wú)顯著性差異，因此水煎煮最佳提取工藝為A3B2C3。由表2K及R值可知，以川續(xù)斷皂苷Ⅵ提取量為考察指標(biāo)時(shí)，A3＞A2＞A1，B2＞B1＞B3，C3＞C1＞C2，A因素影響最大，B、C因素次之。結(jié)合表4川續(xù)斷皂苷Ⅵ提取量方差分析，水煎煮最佳提取工藝為A3B2C3。

2.2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)：由于優(yōu)選的工藝不包括在正交表的9次試驗(yàn)中，故對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。用同一批藥材，稱取1／10處方量，按A3B2C3進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，測(cè)定水煎浸膏得率及川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

由上表可見(jiàn)，以干浸膏得率和川續(xù)斷皂苷Ⅵ提取量為指標(biāo)，數(shù)據(jù)較穩(wěn)定，且干膏率和含量較高。故確定A3B2C3為最佳工藝，即藥材加水煎煮3次，每次加水12倍量，煎煮1.5h。

3 討 論 本實(shí)驗(yàn)研究杜仲、續(xù)斷等藥材的水提工藝，因其主要有效成分為川續(xù)斷皂苷Ⅵ，故本實(shí)驗(yàn)以干膏率及川續(xù)斷皂苷Ⅵ為考察指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)結(jié)合方差分析結(jié)果表明，水提影響干膏得率的主要因素是煎煮次數(shù)，加水量和煎煮時(shí)間影響較小。水提影響川續(xù)斷皂苷Ⅵ得率的主因素也是煎煮次數(shù)。最佳提取工藝為加水12倍量，煎煮3次，每次1.5h，所得浸膏得率和川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量均較高。

［1］ 陳 平，翁樹凡.中藥治療骨質(zhì)增生50例［J］.陜西中醫(yī)，1985，7（04）：175.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：118.