耳背靜脈放血治療扁平疣及對外周血T淋巴細胞亞群的影響

孫文倩　曹碧蘭　顏廷凱　曾霓　陶銳　陳曉紅　曾令芬　方寧

[摘要]目的：觀察耳背靜脈放血治療扁平疣的臨床療效及檢測其對外周血T細胞亞群的影響。方法：應用耳背靜脈放血治療扁平疣患者35例，雙側耳背每周放血1次，療程15周。觀察療效并于治療前后抽取患者的靜脈血，采用流式細胞儀檢測患者外周血T淋巴細胞亞群。結果：完成隨訪的33例患者總有效率為84.85%。患者在治療前CD4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對照組（P<0.05，P<0.01）；治療后均顯著升高（P<0.01），與正常對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。結論：耳背靜脈放血治療扁平疣有較好的臨床療效，可調節患者外周血T淋巴細胞亞群水平，提高患者的細胞免疫功能，導致疣體脫落。

[關鍵詞]扁平疣；耳背靜脈放血；T淋巴細胞亞群；流式細胞儀

[中圖分類號]R752.5+2 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）09-0950-03

扁平疣是由人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染引起的表皮良性贅生物，常侵犯青少年的顏面、手背及前臂，其發生、發展和消退與機體的免疫功能狀態密切相關，尤其是細胞免疫。治療上主要有物理治療（如激光、冷凍等），抗病毒治療及免疫療法（主動免疫及被動免疫）等。耳穴治療扁平疣在我國已有多年歷史，且療效確切，總有效率為70%～100%，平均為91%，但既往的研究主要局限于臨床療效觀察[1]。為探討耳穴療法治療扁平疣的免疫機制，本研究應用耳穴療法中常用的耳背靜脈放血法治療扁平疣，并觀察臨床療效和檢測其治療前后外周血T淋巴細胞亞群的水平，從免疫學的角度了解耳背靜脈放血對扁平疣患者免疫狀態的影響。

1 資料和方法

1.1一般資料：實驗組為2011年9月～2012年6月在遵義醫學院附屬醫院皮膚科門診就診的扁平疣患者35例，均符合扁平疣的臨床診斷標準[2]，完成耳背靜脈放血治療患者33例，失訪2例。在完成隨訪的病例中，男性12例，女性21例，年齡9～47歲，平均（21.97±7.54）歲，病程2月～7年，平均（2.09±1.75）年；患者皮損主要發生于面部和手背，少部分為頸部和前臂。入選患者3個月內未接受過干擾素、胸腺肽及IL-2等抗病毒及免疫調節劑治療，且2月內均無突然增多、發紅、發癢等癥狀；不伴有自身免疫性疾病、嚴重的系統性疾病和其他病毒感染性疾病。正常對照組15例，均為健康志愿者，其中男性6例，女性9例，平均年齡（26.28±4.25）歲。兩組性別和年齡方面無明顯差異；所有患者及對照組成員均知情同意。

1.2 耳背靜脈放血治療方法：患者取坐位，選患者耳背上1/3近耳輪處明顯靜脈1支，揉搓使其充血，75%酒精消毒后用左手拇指、食指將耳背拉平，中指頂于下，右手持消毒刀片，迅速刺破血管，擠壓出血約10滴，血止后，再以1cm×1.5cm大小的兩層消毒紗布敷于傷口上，并用膠布固定。雙側耳背每周放血1次，療程15周，治療過程中若疣體脫落即停止治療。

1.3 療效判定標準：痊愈：皮損全部消退，無新出皮疹；顯效：皮損消退>70%；有效：皮損消退在3O%～7O%或有個別新出皮疹；無效：皮損無變化或消退不足30%。總有效率=（痊愈例數+顯效例數+有效例數）/總例數×100%。

1.4 樣本采集：無菌條件下分別采集患者治療前、治療后及正常對照組EDTA抗凝靜脈血2ml立即送檢。

1.5 試驗方法

1.5.1 儀器與試劑：FACSCalibur流式細胞儀（美國BD公司）。主要試劑：外周血CD4-FITC/CD8-PE/ CD3-PerCP三色抗體、FACS Lysing Solution紅細胞裂解液（均來自美國BD公司）。

1.5.2 實驗操作：樣品測定管中加入熒光抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP20μl，抗凝血50μl混勻，避光靜置20min，再加入紅細胞裂解液200μl充分混勻，避光靜置15min后使用流式細胞儀進行檢測。激光室工作波長488nm，FITC受激發后發綠色熒光，PE受激發后發橙色熒光，PerCP受激發后發深紅色熒光，每份樣品檢測20 000個細胞。測定結果采用MultiSET功能軟件分析。

1.6 統計學處理：采用SPSS17.0統計軟件對所得數據進行治療前后配對t檢驗，組間比較采用成組t檢驗；以P<0.05為差異有統計學意義。數據采用 x±s表示。

2 結果

2.1 臨床療效：33例患者治療后痊愈20例（60.61%）；顯效5例（15.15%）；有效3例（9.09%）；無效5例（15.15%）；總有效率為84.85%。其中治愈患者中有18例在治療4～8周后局部皮疹突然增大、發紅、發癢或出現新發皮疹（起效標志），繼續治療2～3周后疣體脫落痊愈；2例患者皮疹消退無上述反應過程，僅表現為原有皮疹逐漸變平至完全消退。治療過程中除有輕微疼痛外，療程結束后所有患者的耳背靜脈放血部位均未出現瘢痕和感染等任何不良反應。

2.2 對外周血T淋巴細胞亞群的影響 患者在治療前CD4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對照組（t=2.23，P<0.05；t=3.00，P<0.01）；而CD8+明顯高于正常對照組（t=2.66，P<0.05）；治療后與正常對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。治療前與治療后各指標比較，差異均有統計學意義（P<0.01），詳見表1。

3 討論

扁平疣是一種病毒感染性皮膚病。雖然本病有自愈傾向，但因主要發生于青少年的面部、手背及前臂等暴露部位，嚴重影響美觀和身心健康，因此患者的治療愿望仍十分迫切。從本文臨床就診情況看以年輕女性患者居多，這可能是女性追求美的積極性高于男性所致，然而目前并沒有證據表明扁平疣的發病與性別有關。

本研究結果顯示耳背靜脈放血治療扁平疣的總有效率為84.85%；治療前其CD4+和CD4+/CD8+比值降低，而CD8+明顯升高；提示機體存在免疫平衡紊亂。治療后患者的CD4+細胞、CD4+/CD8+比值較治療前顯著升高，CD8+細胞水平顯著下降，與正常對照組比較，差異無統計學意義。提示耳背靜脈放血可以調節扁平疣患者外周血T淋巴細胞亞群水平，恢復機體的免疫平衡，增強機體的抗病毒能力，最終導致疣體脫落。本結果與以往的文獻報道相似[1，3-5]。

中醫認為扁平疣主要是人體感受潮濕毒邪，內動肝火所致，其發生發展與內在的臟腑功能及免疫、內分泌、神經等功能的失調密切相關[1，6]。耳廓上各耳穴與臟腑軀體的聯系是多途徑的，如耳穴針刺治療主要是通過神經體液綜合調節來激發機體內非特異性防御反應，調動體內各種免疫因素，提高抗御病邪的能力[7]。皮膚作為一個內分泌組織，具有神經內分泌的功能與其他系統互相影響共同維持機體的內環境穩定。近年來神經一內分泌一免疫（Neuro-endocrine-immunity Net work，NEI）網絡的提出和研究[8]拉近了中醫與現代醫學的距離；隨著分子生物學的發展，已逐步認為NEI網絡是生物體內的精密、完整而且復雜的調節體系，正如針灸它本身并不提供任何外源性物質，卻能通過NEI網絡，調節下丘腦一垂體一性腺（HPA）軸，產生一系列生理生化改變來維持機體內環境穩定，恢復機體的內分泌、免疫等功能而達到治療疾病的目的，在病理情況下發揮其雙向調節作用[8-9]。

針對臨床療效的差異性，可能與多種因素有關，如宿主的主要組織相容性復合體（MHC）的多態性、患者感染HPV的類型和數量，以及患者的年齡、病程等，因此臨床呈現出個體之間不同的治療效果。但耳背靜脈放血治療扁平疣總體療效滿意，方法簡單且不良反應小，患者容易接受，值得臨床推廣。

[參考文獻]

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[3]黃紅革.扁平疣患者穿刺置疣術治療前后外周血T淋巴細胞亞群和IL-2檢測的臨床意義[J].放射免疫學志，2007，2O（5）：438-439.

[4]仇萌，鄒先彪.黃芪注射液治療扁平疣療效觀察及對外周血T淋巴細胞亞群和白細胞介素-2的影響[J]. 中國中醫藥信息雜志，2010，17（8）：7-8.

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[6]董勤.耳穴療法治療扁平疣的作用特點探析[J].上海針灸雜志，2008，27（5）：44-45.

[7]黃麗春.耳穴診斷學[M].北京：科學技術文獻出版社，2004：317-319.

[8]付義，陳冰.神經-內分泌-免疫（NEI）網絡研究促進中西醫交融[J].中華中醫藥刊，2008，26（4）：821-822.

[9]王春雷，吳金鵬，王軍.筋膜學說解讀中醫經絡實質及針灸作用機制[J].中國中醫基礎醫學雜志，2008，14（4）：312-314

[收稿日期]2013-03-22 [修回日期]2013-04-24

編輯/張惠娟