HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量

劉佳麗蔡威黔陳 穎

HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量

劉佳麗1蔡威黔1陳 穎2

目的建立華鳳仙藥材中沒食子酸的HPLC含量測定方法，為評價華鳳仙藥材的質量提供理論參考。方法采用HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，色譜條件為：C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸(5：95)，流速為1.0ml/min，檢測波長為273nm。結果沒食子酸進樣量在0.053～0.795μg范圍呈良好的線性關系(r=0.9996)，平均回收率為101.76%，RSD為1.90% (n=6)。藥材中沒食子酸的平均含量為0.18mg/g。結論本測定法快速、簡便、靈敏度高、重現性好，可用于華鳳仙藥材的質量控制研究。

華鳳仙；HPLC；沒食子酸

華鳳仙（Impatiens chinensis Linn.）分布于廣東、廣西、浙江、江西、福建、云南等地，又稱水鳳仙、水指甲花、象鼻花等。具有清熱解毒、活血散瘀、消腫拔膿的功效，用于治療發熱、咳嗽、咳痰、肺結核、跌打損傷、瘀血疼痛；外用治蛇頭指瘡、癰瘡腫毒等病癥，為廣西民間常用中草藥[1]，并收錄在《廣西中草藥》藥材標準中。目前有關華鳳仙藥材的質量控制方面報道甚少，僅在測定總黃酮方面有報道[2]，由于該藥材在廣西民間使用證明具有較好的療效，常用于治療發熱、咳嗽等，應用較廣泛。然而現在很多民間醫生只是靠一些積累的經驗來判斷華鳳仙藥材的真偽，這樣在使用上很大程度上會有偏差，安全用藥就得不到保障，也在一定程度上限制了華鳳仙藥材的制劑開發；且現代藥理研究表明，沒食子酸單體成分具有較強的體外抑菌作用[3]，與治療發熱、咳嗽等的疾病相一致，為了保證該藥材的質量，必須要制訂相關的質量控制標準。本文采用HPLC法測定華鳳仙藥材中指標成分沒食子酸的含量，為華鳳仙藥材的質量控制提供科學依據，為進一步研究該藥材藥效物質打下基礎[4-7]。

1 儀器與材料

Agilent1100高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；Hypersil ODS2 C18柱(5μm，4.6mm× 250mm)；沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號110831-200803）；水（超純水）；甲醇、乙腈為色譜純（Fisher）；其他試劑均為分析純。華鳳仙藥材（批號為20101103、20101216、20110627）采于廣西南寧市高峰林場，鑒定為鳳仙花科（Balsaminaceae）植物華鳳仙（Impatiens chinensis Linn.）的根、莖、葉和花全株。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱為Hypersil ODS2 C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸（5：95）；檢測波長為273nm；流速為1.0ml/min。理論塔板數按沒食子酸計應不少于3000。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量，加水使溶解并稀釋成每1ml含53μg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備稱取華鳳仙藥材（批號為20101103）粗粉約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線的繪制精密吸取對照品溶液1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0μl，注入高效液相色譜儀，進行測定，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y=239638x +21482（ r=0.9996），表明沒食子酸進樣量在0.053～0.795μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。以水溶劑作為空白對照。對照品、供試品、空白對照的色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.2 精密度實驗精密吸取對照品試液10μl，連續進樣6次，按“2.1”色譜條件下分別測其峰面積，日內精密度RSD值為1.05%（n=6）。同法測定日間精密度RSD值為1.69%（n=6），表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 重復性實驗取華鳳仙藥材（批號為20101103）粗粉約2g，共6份，精密稱定，按“2.3”項下的方法制備成供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件下，分別進樣10μl注入高效液相色譜儀進行測定，藥材中沒食子酸的平均含量為0.15mg/g，RSD為1.30%（n=6），表明方法重現性良好。

2.4.4 穩定性實驗取華鳳仙藥材（批號為20101103）粗粉約2g，精密稱定，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，常溫下放置，在“2.1”項下色譜條件下，分別在放置0，4，8，12，16，24h后進樣10μl注入高效液相色譜儀測定峰面積，峰面積的RSD值為1.52%（n=6），表明供試品溶液在24h內穩定。

2.4.5 加樣回收試驗取已知含量華鳳仙藥材（批號為20101103）粗粉約1g（含量為0.15mg/g），精密稱定，共9份，按高、中、低三個量級，分別精密加入沒食子酸對照品溶液適量，按“2.3”項下的方法平行制備9份供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件下，進樣10μl注入高效液相色譜儀測定分別測定含量，計算回收率，平均回收率為101.79%，RSD為1.90%（n=9）。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.5 樣品含量測定稱取三批華鳳仙藥材粗粉各2g，精密稱定，平行三次，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件下，分別進樣10μl進行測定，以峰面積計算沒食子酸的含量。結果見表2。

表2 三批華鳳仙藥材中沒食子酸含量測定結果（n=3）

3 討論

本實驗首次對華鳳仙藥材中沒食子酸的含量進行了HPLC分析，參考文獻[3-6]比較了甲醇、乙醇-水、水等多種溶劑作為提取溶劑，經過HPLC分析，甲醇和乙醇-水作為提取溶劑時，雜質干擾比較嚴重，且提出量較少，最后選擇水作為沒食子酸的提取溶劑，該溶劑廉價、無毒、提取效果好。比較甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸等多種流動相及不同的比例，最后確定乙腈-0.1%磷酸（5：95）作為該含量測定的流動相，在該流動相下，沒食子酸指標成分達到基線分離，分離度符合要求。本實驗測定了不同采收時間的三批華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，平均含量為0.18mg/g，為了更好的研究華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，今后將從不同產地、不同采收時間等多角度收集樣品，同時開展指紋圖譜等相關的研究，為科學有效地控制該藥材的質量提供參考，進一步研究該藥材藥效物質打下基礎。

本實驗所采用方法快速、簡便、準確、靈敏度高、重現性好，可用于華鳳仙藥材的含量測定，對于華鳳仙藥材的質量控制和進一步研究該藥材具有參考意義。

[1] 江蘇新醫學院.中藥大辭典.上冊[M].上海：上?？茖W技術出版社,1985：917-918.

[2] 彭定基,李兵,陳曉麗.華風仙總黃酮的含量測定[J].廣西中醫學院學報,2010,13(1)：54-55.

[3] 韋建華,盧汝梅.周媛媛.草龍提取物及化學成分的抗菌活性研究[J].時珍國醫國藥,2011,22(6)：1449-1450.

[4] 何依玲,李曉譽.高效液相色譜法測定鐵莧菜中沒食子酸含量[J].中國藥業,2007,16(11)：18-19.

[5] 張朔生.HPLC測定炮制前后石榴皮中沒食子酸的含量[J].藥物分析雜志,2010,30(6)：1104-1106.

[6] 金欣,王峰,姚嵐,等.HPLC測定野老鸛草中沒食子酸和鞣花酸的總量[J].中成藥,2010,32(7)：1172-1176.

[7] 史偉國,王麗敏,劉翠娟,等.地榆不同部位沒食子酸的含量測定[J].黑龍江醫藥科學,2011,34(1)：14-15.

Determination of the Content of Gallic Acid in the Impatiens Chinensis by HPLC

Liu Jiali Cai Weiqian Chen Ying

ObjectiveEstablished HPLC methods for the determination of the Impatiens chinensis and provide theoretical reference for the control of the quality of the Impatiens chinensis.MethodsHPLC were adopted to determine effective contents of gallic acid of the Impatiens chinensis.Hypersil ODS2 C18(4.6mm×250mm, 5μm) column as analytic column, with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid (5∶95).The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was 273 nm.ResultsThe liner range of gallic acid was 0.053～0.795μ g(r=0.9996). The average recovery was 101.76%, RSD was 1.90% (n=6).ConclusionThis method is fast, easy, high sensitivity, good reproducibility, and can be used for the quality control study of the Impatiens chinensis.

Impatiens chinensis; HPLC; Gallic acid

R927.2

A

1673-5846(2013)02-0061-03

1 龍崗區人民醫院，廣東深圳 518172

2 廣東食品藥品職業學院，廣東廣州 510520

劉佳麗，女，本科學士，主管藥師。E-mail：14554055@qq.com。

蔡威黔，男，碩士研究生，主任藥師。E-mail：weiqiancai@21cn.com。