清熱解毒類中成藥微生物限度檢查方法驗證

姚衛(wèi)紅 張麗娜 劉美秀

清熱解毒類中成藥微生物限度檢查方法驗證

姚衛(wèi)紅 張麗娜 劉美秀

目的探究清熱解毒種類的中成藥的抑制細(xì)菌效果，同時研究對于中成藥微生物限度檢查方法。方法 遵照《中華人民共和國藥典》2005年版，對微生物的限度檢查方法進行有效的實驗并驗證。結(jié)果大腸菌群和大腸埃希菌無抑制活性，可直接在常規(guī)法檢查中應(yīng)用。結(jié)論有必要建立醫(yī)院專業(yè)的微生物限度檢查，采用培養(yǎng)基稀釋法，冰醋酸薄膜過濾法進行微生物限度檢查。

清熱解毒類；中成藥微生物；限度檢查

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 ①黃連上清片，福建省漳州市樂爾康藥業(yè)（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z19993035）；②黃連上清片，北京同仁堂（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z11020293）；③三黃片，安徽華佗國藥，（批號：0015139）：④黃連上清片，長春新安藥業(yè)，（批準(zhǔn)文號：Z22024528）；⑤黃連上清片，吉林省跨海生化藥業(yè)（批準(zhǔn)文號：Z22025474）；⑥四季三黃片，江西華泰藥業(yè)（批號：100910）；⑦一清顆粒，浙江偉康藥業(yè)（批號：20110403）；⑧一清軟膠囊，大連天宇奧森制藥（批號：110407）。

1.1.2 稀釋液與培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：101009），玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號：1004193），膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號：100526），營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號：100914）[1]。

1.1.3 菌株：白色念珠菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，枯草芽孢桿菌。其中枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，白色念珠菌都是由四川省食品藥品檢驗所提供。

1.2 檢查方法根據(jù)2010年版《中國藥典》中關(guān)于X微生物的限度的相關(guān)檢查方式進行。使用45C恒溫的瓊脂營養(yǎng)培養(yǎng)基20ml器具，分別平行測定器皿，35C培養(yǎng)3d，進行計數(shù)[2]。

用經(jīng)24h培養(yǎng)的26C恒溫的第三代黑去么的改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，在器皿中加入6ml的0.05%聚山梨酯以及濃度為0.9%的生理鹽水，將孢子洗凈，再把孢子的懸浮液吸去，使用濃度為0.5%的聚山梨酯80、濃度為0.9%的生理鹽水進行20倍稀釋，直至10～4，吸取2ml稀釋液，用溫度為45℃的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)液20ml，器皿，分別平行測定兩器皿，26C培養(yǎng)5d，然后進行計數(shù)。

菌液制備完成后，對細(xì)菌，霉菌以及酵母菌的數(shù)量進行驗證，通過平皿法（方法1）、培養(yǎng)基稀釋法（方法2）、薄膜過濾法（方法3）。計算回收率，菌落的回收率=實驗組的平均菌落數(shù)-樣品組的平均菌落數(shù)*菌液組的菌落數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 對計數(shù)方法進行驗證在酵母菌、細(xì)菌和霉菌的計數(shù)方法實驗證明，清熱解毒類的中成藥能夠很好地抑制菌落活性，而抑制枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的具體效果則大相徑庭，對菌落的抑制作用能夠經(jīng)各種方式去除，都能獲得超過50%的回收率。見表1。

2.2 驗證檢查方法的有效性實驗結(jié)果顯示，對上述兩種菌群沒有活性抑制作用，能在常規(guī)法檢查中進行應(yīng)用。見表2。

表1 5種陽性回收率額結(jié)果分析(回收率/%)

表2 控制菌檢查結(jié)果

3 討論

研究結(jié)果顯示，采用計數(shù)法對細(xì)菌、酵母菌和霉菌的試驗結(jié)果進行統(tǒng)計，結(jié)果顯示，從抑制菌落活性方面看，清熱解毒類中成藥的效果更為顯著，而對于枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌而言，則其抑制效果各有不同，且該抑菌作用能經(jīng)不同的實驗方式抵消，均達(dá)70%以上的回收率。分別對控制菌大腸菌群和大腸埃希菌進行方法驗證，結(jié)果提示大腸菌群和大腸埃希菌無抑制活性，可直接在常規(guī)法檢查中應(yīng)用。

由此得知，雖然藥品的成分類似，但是他們的抑菌原理并不一樣，抑菌效果也就大相徑庭。在選擇抑菌藥劑時，要根據(jù)實際情況選擇合適的抑菌藥劑，從而達(dá)到最好的抑菌效用。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄79-88.

[2] 閆紅,薛坤,張月丹.11種口服中成藥微生物限度檢查方法驗證[J].中國藥房,2010,21(11)：29-32.

R691

B

1673-5846(2013)02-0429-02

四川省雅安市食品藥品檢驗所，四川雅安 625000