HS-SPME-GC-MS分析枸骨葉揮發性成分

魏金鳳，顧海鵬，康文藝

河南大學中藥研究所，開封475004

枸骨葉為冬青科植物枸骨(Ilex cornutaLindl)的葉，又名:貓兒刺、枸骨刺、八角茶、老鼠刺和十大功勞葉等，分布于甘肅、陜西、江蘇、河南和湖北等地［1］。文獻報道枸骨葉中含有熊果酸、齊墩果酸、羽扇豆醇、皂苷、三萜類和多酚類等物質［2-7］，其中邢瑩瑩等人以水蒸氣蒸餾法對枸骨葉中的揮發性成分進行研究，鑒定出了枸骨葉中的酸、酯、醇、酮和酰胺等化學成分［8］。藥理研究發現枸骨葉具有抗菌活性、心血管作用、較強的抑制T淋巴細胞活化、增殖的作用，以及對小鼠的胚胎毒性［9-11］。本文首次應用頂空固相微萃取技術提取枸骨葉揮發性成分進行研究。

1 材料與儀器

枸骨葉于2010年7月采集于河南開封，由河南大學中藥研究所李昌勤副教授鑒定為冬青科植物枸骨(Ilex cornutaLindl)的葉，標本存于河南大學中藥研究所。

美國安捷倫公司GC 6890 N GC/5975 MS氣相色譜-質譜聯用儀;美國Supelco公司手動固相微萃取(SPME)裝置;萃取頭為65μm聚二甲基硅氧烷(PDMS-DVB);C6-C26正構烷烴(Alfa Aesar)。

2 方法

2．1 SPME 取樣

使用前先將SPME的萃取纖維頭在氣相色譜的進樣口老化10 min，老化溫度為250℃，載氣體積流量為1．0 mL/min。取枸骨葉0．7 g，置于5 mL 的樣品瓶中，蓋上蓋子，插入65μm PDMS-DVB萃取纖維頭，于50℃下頂空取樣30 min后，取出后立即插入色譜儀進樣口(溫度250℃)脫附1 min。

2．2 GC-MS 分析條件

2．2．1 氣相色譜

DB MS石英彈性毛細管柱(0．10μm×30．0 m× 250 μm)，載氣為高純氦氣(99．999%)，流速1．0 mL/min，進樣口溫度250℃;色譜柱初始溫度50℃(保持2．0 min)，以8℃/min升溫至120℃(保持2 min)，最后以4℃/min升溫至220℃(保持5 min)。分流進樣，分流比為10∶1。

2．2．2 質譜條件

電離方式:EI源，電離能量70 eV;離子源溫度為230℃;四極桿溫度150℃;傳輸線溫度為280℃;電子倍增器電壓1588V。質量掃描范圍30～400 amu，譜圖檢索:采用NIST08．L進行檢索。

2．2．3 保留指數測定

按照文獻［13，14］進行 KI(Kovats 保留指數)計算。

3 結果與討論

HS-SPME-GC-MS從枸骨葉中鑒定出32個化合物，占總峰面積的91．30%，峰面積歸一法確定各組分質量分數。結果列于表1。

表1 枸骨葉揮發性成分Table 1 Volatile components of Ilex cornuta Lindl leaves

31 Nonadecane 十九(碳)烷 C19 H40 97 1．50 32 Butylisobutyl phthalate 鄰苯二甲酸二異丁酯 C16H22 O4 96 1．49 Total 91．30

本實驗從枸骨葉中分離鑒定出的化合物由表1所示，枸骨葉主要揮發性成分是植酮(19．64%)，其次是二氫獼猴桃內酯(5．38%)、壬醛(5．10%)、六氫假紫羅酮(3．94%)、己醛(2．69%)和香葉基丙酮(2.22%)。

本文利用SPME技術對枸骨葉揮發性成分提取，與邢瑩瑩等以水蒸氣蒸餾法提取差異大，水蒸氣蒸餾法得到的成分主要是棕櫚酸(31．02%)和鄰苯二甲酸甲酯(14．22%)以及萜類衍生物(11．03%)為主［8］，本文得到的主要為飽和酮類化合物。

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