頂空毛細管氣相色譜法測定阿魏酸鈉中有機溶劑殘留量

黃宇玫，羅文艷

1南昌大學科學技術學院，南昌330029;2南昌大學第四附屬醫院藥劑科，南昌330003

阿魏酸鈉(sodium ferulate)是當歸、川芎等中藥材中的主要成分阿魏酸的鈉鹽，能抑制丙二醛及血栓素B2的產生，減輕心肌水腫及乳酸脫氫酶的釋放，并能促進6-酮-前列腺F1a的產生，具有抗血小板聚集、舒展血管及心肌保護作用［1，2］。市場上的阿魏酸鈉多為人工合成品，其在合成工藝中使用了乙醇、哌啶和吡啶三種有機溶劑，《中國藥典》2010年版附錄僅規定了這其中乙醇和吡啶的限度，對于阿魏酸鈉中三種有機殘留溶劑的色譜分析及殘留量的測定尚未見文獻報道。為了控制有機溶劑殘留量，提高藥品的安全性和可靠性，本文建立了頂空毛細管氣相色譜法測定阿魏酸鈉中有機溶劑殘留量的方法。結果表明，所建立的方法簡便、快捷、靈敏度高，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

Agilent6890N型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器(FID)，7694E頂空進樣器，Sartorius BP211D精密電子天平(德國賽多利斯股份公司)。

阿魏酸鈉(麗珠集團利民制藥廠，批號0908012、0911014、0912018);乙醇、哌啶、吡啶均為色譜純。

2 方法與結果

2．1 溶液配制

供試品溶液:精密稱取阿魏酸鈉原藥0．20 g，置20 mL頂空瓶中，精密加入水5 mL，密封，搖勻，作為供試品溶液。

對照品溶液:精密稱取乙醇500 mg，哌啶和吡啶各20 mg，置100 mL量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密量取對照品貯備液2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2．2 色譜條件

安捷倫色譜柱DB-624石英毛細管柱(0．53 mm×30m，3μm);程序升溫，初始溫度80℃，以8℃/min升至200℃，保持4 min;進樣口溫度200℃，檢測器溫度250℃;FID檢測器。載氣氮氣，流速5．0 mL/min;氫氣30 mL/min;空氣400 mL/min;分流比10∶1;頂空瓶溫度80℃;平衡時間30 min;定量環體積1．0 mL。

在上述色譜條件下，乙醇、哌啶與吡啶色譜峰的理論板數均不低于5000，各有機溶劑色譜峰分離度均大于2．0，空白溶劑無干擾，結果見圖1。

圖1 對照品溶液(A)和供試品溶液(B)的氣相色譜圖Fig.1 Gas chromatogram of control solution(A)and sample solution(B)

2．3 線性關系及檢出限

精密量取對照品貯備液 0．2、0．5、1、2、5、10 mL，分別置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封。按“2．2”項下色譜條件測定，以各自測得的峰面積為縱坐標(A)，濃度為橫坐標(c)進行線性回歸。取對照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件測定，檢測限以S/N=3計算。結果見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Table 1 Regression equation and linear range

2．4 精密度試驗

取“2．1”項下對照品溶液6份，照“2．2”項下色譜條件，分別進樣，計算相對標準偏差(RSD)。結果乙醇、哌啶、吡啶的 RSD 分別為 0．8%、1．1%、1.4%。

2．5 回收率試驗

精密稱取阿魏酸鈉原藥0．20 g，置20 mL頂空瓶中，分別加入低(80%)、中(100%)、高(120%)濃度的對照品溶液5 mL，各3份，共9份，按“2．2”項下色譜條件，計算得乙醇、哌啶、吡啶的平均回收率分別為 99．3%、100．1%、99．5%;RSD分別為0.9%、0．5%、0．7%。

2．6 樣品測定

分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各5 mL，置20 mL頂空瓶中，按“2．2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以外標法按峰面積計算各有機溶劑殘留量。結果，批號0911014和0912018檢出了乙醇，含量分別為0．04%和0．03%;批號0908012均未檢出。

3 討論

3．1 色譜柱選擇

本品需控制的乙醇、哌啶、吡啶3種有機溶劑均為極性溶劑，按照相似相溶的原理，考察了DB-624、DB-WAX、DB-1、DB-1701不同極性毛細管色譜柱。結果顯示，中等極性色譜柱DB-624對這3種有機溶劑峰形和分離效果均最佳。

3．2 柱溫選擇

通過對升溫程序的比較發現，本實驗采用程度升溫時，對乙醇、哌啶、吡啶分離良好，峰形較好。

3．3 進樣方式的選擇

頂空進樣方式較之液體樣品直接進樣具有諸多優點，尤其是它避免了大體積溶劑進入色譜柱導致的柱降解和共流出。

3．4 有機溶劑限度

乙醇、哌啶、吡啶均為合成過程中引入的有機溶劑。根據“藥品注冊的國際技術要求(ICH)［3］”和《中國藥典》(2010年版二部)［4］關于藥品中有機溶劑殘留量指導原則的規定，乙醇為第三類溶劑，吡啶為第二類(應限制使用)溶劑，哌啶為管制毒性藥品，應按藥品生產品質量管理規范(GMP)或其他質量要求加以限制使用，即指導原則規定，乙醇限量應為0．5%，吡啶為0．02%。本次研究的樣品中，僅檢出了部分乙醇殘留，但所測結果均在藥典規定的范圍內。

本實驗方法簡便、快捷，靈敏度高，結果準確。適用于阿魏酸鈉中有機溶劑殘留量的檢測。

1 Ruan Q(阮琴)，He XX(何新霞)，Hu YY(胡燕月)，et al．Ferulic acid and ligustrazine from Rhizome of Szechuan Lovage effect on nervous system ofmice．Chin JHospital Pharm(中國醫院藥學雜志)，2007，27:1087-1090．

2 Zhang YP(張延萍)，Zhou DJ(周冬菊)，Wang XS(王新勝)，et al．Studies on ferulic acid effect component from Rhizome of Szechuan Lovage inhibiting tyrosinase activity．Chin JHospital Pharm(中國醫院藥學雜志)，2010，30:1111-1113．

3 Zhang HJ(周海鈞)translate．The International Technical Requirements of Drug Registration·Quality Section(藥品注冊的國際技術要求·質量部分)．Beijing:People Hygiene Press，2001．343．

4 Chinese Pharmacopoeia Commission(國家藥典委員會)．Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(中華人民共和國藥典)．Beijing:China Medical Science Press，2010．Vol II，Appendix 63．