頂空毛細管氣相色譜法測定非那甾胺原料藥中有機溶劑殘留量

郭文獻，辜鵬程，李勤耕（重慶醫科大學藥學院，重慶 400016）

非那甾胺屬4-氮甾體激素類化合物，是首個特異性的5 α-還原酶抑制劑，口服有效；主要用于治療良性前列腺增生，可使增大的前列腺減小，改善尿流等癥狀及雄激素性脫發[1-2]；其相對分子質量僅為373，為脂溶性。

藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產中，以及在制劑制備過程中使用或產生而又未能完全去除的有機溶劑。由于很多有機溶劑對環境、人體都有一定的危害，因此，為保障藥物的質量和用藥安全以及保護環境，控制殘留溶劑量具有重要意義。非那甾胺在合成過程中，使用了甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯等4種有機溶劑，但關于其有機溶劑殘留的研究，國內尚未見文獻報道。筆者根據人用藥物注冊技術要求國際協調會（ICH）[3]頒布的殘留溶劑研究指導原則和2010年版《中國藥典》的相關規定[4]，并參考有關文獻[5-6]，采用頂空氣相色譜法，以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑，同時測定上述4種有機溶劑殘留量。結果表明，該方法簡便、靈敏、重復性好，可用于非那甾胺原料藥中有機溶劑殘留量的測定。

1 材料

6890氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）、7694 E頂空進樣器（美國Agilent公司）；ME2355型電子天平（德國Sartorius公司）。

非那甾胺原料藥（重慶醫科大學醫藥研究所提供，批號:101201、110306、110325、110404、110512，純度分別為:99.5%、99.2%、99.1%、99.4%、99.2%）；甲醇、三氯甲烷、丙酮和甲苯均為色譜純，DMSO為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Phenomenex ZB-624毛細管柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm）；DMSO為溶劑；柱溫采用程序升溫:初始溫度50℃，保持20 min，并以10℃/min的速率升至200℃，保持20 min；進樣口溫度:200℃；FID檢測口溫度:250℃；載氣:N2，流速:1.0ml/min；分流比:5∶1；頂空進樣，平衡溫度:80℃，平衡時間:45 min，進樣時間:1 min，定量環溫度:100℃，傳輸線溫度:110℃。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取甲醇150mg、丙酮250mg、三氯甲烷30mg、甲苯44.5 mg，置于同一50 ml量瓶中，用DMSO溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得對照品貯備液。精密量取對照品貯備液2.5 ml，置于25 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。測定時精密量取對照品溶液5 ml，置于20 ml頂空進樣瓶中，密封，搖勻。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取供試品約0.1 g，置于20 ml頂空進樣瓶中，精密加入DMSO 5 ml，密封，振搖使溶解，即得。

2.4 系統適用性試驗

取“2.2”、“2.3”項下的對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，記錄色譜。結果，4種溶劑分離良好，理論板數均不低于5000，詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；1.甲醇；2.丙酮；3.三氯甲烷；4.甲苯Fig 1 GC chromatogramsA.reference substances solution；B.sample solution；1.methanol；2.acetone；3.chloroform；4.methylbenzene

2.5 線性關系考察

精密稱取甲醇300mg、丙酮250mg、三氯甲烷30mg、甲苯44.5 mg，置于同一個50 ml量瓶中，用DMSO溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為標準曲線貯備溶液。精密量取10 ml，置于50ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻；再分別精密量取0.5、1.0、2.5、7.5、12.5、10.0 ml分別置于50、50、50、50、50、10 ml量瓶中，分別用DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，得標準工作溶液a、b、c、d、e、f。

分別精密量取5 ml上述不同質量濃度的標準工作溶液，分別置于20 ml頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，記錄色譜圖，通過積分確定峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，以各溶劑相應質量濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程及檢測質量濃度線性范圍，結果見表1。

表1 各溶劑回歸方程及檢測質量濃度線性范圍（n＝6）Tab 1 Regression equation and linear range of each solvent（n＝6）

2.6 精密度試驗

分別精密量取對照品溶液5 ml，置于6個20 ml頂空進樣瓶中，依次進樣，結果4種溶劑峰面積值的RSD均小于4.5%，表明本方法精密度良好。

2.7 回收率試驗

精密稱取同一批號原料藥（批號:101201）各約0.1 g，置于9個20 ml頂空進樣瓶中，分為低、中、高水平3組（n＝3），每組分別精密加入標準工作溶液b、d、f各5 ml，進樣測定，計算平均回收率。結果平均方法回收率為94.7%～97.5%，RSD＜2.1%（n＝3），詳見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝3）Tab 2 Results of recovery rate tests（n＝3）

2.8 檢測限試驗

用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為3時計算檢出限。結果甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯的檢測限分別為10.93、0.788、0.355、0.0216 μg/ml。

2.9 樣品中有機溶劑殘留量測定

取5批樣品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，以外標法計算4種有機溶劑的含量。結果5批樣品中均未檢出甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯。

3 討論

非那甾胺易溶于DMSO、丙酮等有機溶劑，而在水中難以溶解。基于此，在選擇溶劑時，N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和DMSO都可作為溶劑。但DMF穩定性較差，易產生雜質，故選擇DMSO為溶劑，效果較好，能滿足試驗要求。

ICH[3]和2010年版《中國藥典》[4]都規定，在藥品中甲醇、三氯甲烷、甲苯均屬于第2類限制性殘留溶劑，限度分別為0.3%、0.06%、0.089%；丙酮屬于第3類低毒性殘留溶劑，應控制其殘留量，限度為0.5%。本試驗5批樣品中甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯均未檢出，符合規定。

一般對含鹵素的溶劑采用電子捕獲檢測器（ECD）進行檢測，以獲得更高的響應值，周妍等[7]建立的測定非那雄胺中的二氯甲烷和三氯甲烷2種有機溶劑殘留量的方法中就是使用ECD。但因為三氯甲烷的限度為0.06%，FID的靈敏度已能滿足檢測要求；另外從生產工藝控制上來說，同時完成甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯這4種溶劑的檢測，僅采用FID的方法更簡便、經濟，因此，本方法選擇FID。

由于合成工藝的不同、所用溶劑不同，非那甾胺原料藥中可能殘留的有機溶劑不同。劉繼華等[8]綜合5家藥廠的合成工藝，建立了同時測定非那雄胺中11種有機溶劑殘留量的方法。本研究中需要檢測的非那甾胺原料藥在合成過程中主要使用了甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯等這4種有機溶劑，因此建立了檢測非那甾胺原料藥中這4種有機溶劑殘留量的方法。

本方法4種有機溶劑的檢測限為0.0216～10.93 μg/ml，靈敏度可以滿足非那甾胺原料藥中有機溶劑殘留量測定的需要。

[1]Gormley GJ.Finasteride:a clinical review[J].Biomed Pharmacother，1995，49（7/8）:319.

[2]Keith D，Kaufman MD，Elise A，et al.Finasteride in the treatment of men with androgeneticalopecia[J].J Am Acad Dermatol，1998，39（4）:578.

[3]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求:質量部分[M].北京:人民衛生出版社，2001:343.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄204-206.

[5]吳春麗，張俊霞，史云濤，等.頂空毛細管氣相色譜法測定來曲唑原料藥中有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2010，21（17）:1601.

[6]姜建國，宋更申，張西如，等.頂空氣相色譜法測定洛伐他汀原料藥中的有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2011，22（17）:1607.

[7]周妍，劉波平，羅香，等.頂空毛細管氣相色譜法測定非那雄胺中有機溶劑的殘留量[J].分析測試學報，2007，26（1）:131.

[8]劉繼華，劉屹，李慧義，等.氣相色譜法測定非那雄胺中11種有機溶劑殘留量[J].藥物分析雜志，2009，29（3）:475.