高效液相色譜法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷的含量

劉曉麗 周 清

遼寧省朝陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所，遼寧朝陽(yáng) 122000

香砂養(yǎng)胃丸主要由木香、砂仁、白術(shù)、陳皮、茯苓、半夏（制）、醋香附、枳實(shí)（炒）、豆蔻（去殼）、姜厚樸、廣藿香、甘草十二味中藥組成，具有溫中和胃的功效。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國(guó)藥典》（2010年版）一部中[1]，標(biāo)準(zhǔn)中僅有關(guān)于厚樸中厚樸酚的測(cè)定項(xiàng)目，無(wú)主藥陳皮中橙皮苷的含量測(cè)定。本文建立了高效液相色譜方法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中主藥陳皮中橙皮苷的含量測(cè)定，方法靈敏度高，重現(xiàn)性好、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，獲得了較好的分離效果，能夠更好地控制該藥品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀 （島津LC-20AT，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，DGU-20A3脫氣機(jī)，CTO-20A柱溫箱、SPD-20A紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器）。

1.2 試藥

橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-200512，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所），磷酸酸為分析純，水為重蒸餾水，乙腈為色譜純，樣品為江蘇平光信誼（焦作）中藥有限公司提供（批號(hào)：090526、090714、091025）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜注：Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸（20︰80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，峰形良好，理論板數(shù)不低于2 000，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品10 mg，甲醇溶解并稀釋至50 mL量瓶中，搖勻，制成對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0 mL，甲醇溶解并稀至25 mL量瓶中，搖勻，作為對(duì)照品溶液[2]。

2.2.2 供試品溶液 取香砂養(yǎng)胃丸樣品適量磨碎，稱(chēng)取1.0 g細(xì)粉，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇25 mL，置具塞錐形瓶中，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，減失重量用甲醇補(bǔ)足，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液[3-4]。

2.2.3 陰性樣品溶液 按香砂養(yǎng)胃丸中處方的組成比例及制備工藝，制備缺少陳皮的陰性樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，即得陰性樣品溶液。

2.3 陰性干擾試驗(yàn)

按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別取對(duì)陰性樣品溶液、照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入色譜儀，樣品色譜圖中，橙皮苷與其他峰分離較好，而陰性樣品在橙皮苷出峰處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，證明該方法可行，見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液 1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、10.0 mL，用甲醇分別稀釋至25 mL量瓶中，搖勻，進(jìn)樣量10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)作進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=6 870.34－5 765.45X，r=0.999 8（n=6），在 8～80 μg/mL 范圍內(nèi)顯示有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取批號(hào)為090526的供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，平均峰面積為692 545，RSD=1.12%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號(hào)為 090526 的供試品溶液 10μL，在 0、3、6、12、24 h分別測(cè)定峰面積，平均峰面積為691 247，RSD=1.05%，表明本溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖1 陰性干擾試驗(yàn)色譜圖

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為090714的供試品研細(xì)，稱(chēng)取約1.0g，精密稱(chēng)定，共取 6 份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備、按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為：平均每1 g含橙皮苷11.345 mg，RSD=1.24%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取已知含量的樣品1.0 g，批號(hào)091025，并精密稱(chēng)定，分別精密加入橙皮苷對(duì)照品適量按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成不同波度的溶液，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為 100.75%，RSD=1.10%（n=6）。見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)（n=6）

2.9 樣品測(cè)定

取三批樣品研細(xì)，稱(chēng)取約1.0 g細(xì)粉，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇25 mL，置具塞錐形瓶中，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，減失重量用甲醇補(bǔ)足，搖勻，濾過(guò)，濾液做為供試夜，分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μL注入色譜儀，計(jì)算含量。結(jié)果三批樣品中橙皮苷的含量分別為 12.46、11.71、13.65 mg/g；RSD值分別為0.84%、0.68%、0.62%。

3 討論

3.1 超聲時(shí)間的選擇

本試驗(yàn)分別考察了超聲15、30、45 min的效果，結(jié)果表明，超聲30 min提取含量較高，故確定甲醇超聲30 min為提取條件。

3.2 流動(dòng)相的選擇

通過(guò)參考文獻(xiàn)，選擇甲醇-醋酸-水[1]，乙腈-水[3]，甲醇-水[5-6]，乙腈-0.5%磷酸分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，最后確定乙腈-0.5%磷酸（20∶80）為流動(dòng)相，因其能獲得較好的峰形、分離效果和較高的柱效。

3.3 色譜柱的選擇

選擇了三種類(lèi)型色譜柱進(jìn)行測(cè)試[7-8]，CenturySIL C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）， 確 定 了Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱即能達(dá)到較高的柱效和很好的分離效果。

本文建立的HPLC法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷的方法重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，處理較簡(jiǎn)單，回收率較好，能夠較好的控制藥品質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：176-177，899.

[2]鄒浪，胡壽榮.反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方陳香胃膠囊中橙皮苷含量[J].江西中醫(yī)藥，2010，41（7）：73-74.

[3]汪金玉，陳康，徐小飛，等.高效液相色譜法測(cè)定橘核中橙皮苷的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26（5）：501-503.

[4]劉思曼，邊清泉，唐英，等.HPLC法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2008，20（9）：1196-1198.

[5]白麗杰，謝丹，陳曉艷.高效液相色譜法測(cè)定四季感冒片中橙皮苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（24）：25.

[6]張旭君.半夏糖漿含量測(cè)定研究[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2012，12（2）：69-72.

[7]周天紅.HPLC法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸（濃縮丸）中橙皮苷、厚樸酚及和厚樸酚含量[J].中國(guó)藥師，2011，14（1）：67-68.

[8]王海英，趙建澤.HPLC測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷的含量[J].中成藥，2005，27（9）：1115-1116.