噪聲致聽力損傷豚鼠穴位注射神經(jīng)生長因子療效分析

蘇潔明 謝金城 歐滿燦 曾 斌 賴肖芬

廣州市番禺區(qū)何賢紀念醫(yī)院耳鼻喉科，廣東廣州 511400

噪聲能夠?qū)е侣犃p傷，耳蝸毛細胞對噪聲損害最敏感，也是噪聲損害是主要因素[1]。但是目前國內(nèi)外仍缺乏真正根治的方法，最近有報道外源性神經(jīng)生長因子（NGF）能夠減輕噪聲對其損害，從而對噪聲性聽力損傷具有較明顯的保護作用[2]。本文通過設(shè)計對比實驗，依據(jù)對照原則，在穴位處對有聽力損傷的豚鼠注射神經(jīng)生長因子，觀察其NGF對聽力損傷的修復(fù)作用，由畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE）針對聽力變化予以表示。

1 資料與方法

1.1 一般資料

體重在250～350 g（購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物中心）的健康雄性豚鼠48只，隨機分為4組，每組12只（24只耳），經(jīng)系統(tǒng)檢測，耳廓反射正常。將其分為對照組（正常組）、腹腔注射組、穴位注射組、模型組（聽力損傷），除對照組以外，剩下3組豚鼠均24小時放置在聲壓級100dB（A）的白噪聲中，共7 d；在暴露前、暴露后、治療后3個時間區(qū)域內(nèi)，用畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射觀察每組豚鼠于噪聲中三個階段的幅值和信噪比。

1.2 聽力損傷模型制作

白噪聲經(jīng)由純音聽力計發(fā)出，在聲場揚聲器作用下，向動物箱內(nèi)發(fā)出暴露聲壓級100 dB（A）的噪聲，聲場不均勻度為±1 dB（A）。 每天 24 h，連續(xù) 7 d。

1.3 治療方法

（1）模型組：每天1次腹腔注射1 mL0.9%NaCl溶液；（2）腹腔注射組：按3000 U/kg凍干粉針NGF加1 mL 0.9%NaCl溶液稀釋腹腔注射，每天1次；（3）穴位注射組：按3 000 U/kg凍干粉針NGF（廈門北大之路生產(chǎn) “恩經(jīng)復(fù)”，衛(wèi)藥試字S20020116）加1 mL注射用水稀釋，分別以劑量0.5 mL雙耳隔日交替注射翳風(fēng)、完骨二穴；（4）對照組：無治療動作。治療時間均為28 d。

1.3.1 測試儀器 儀器：丹麥Madsen Capella型耳聲發(fā)射儀；檢測環(huán)境：環(huán)境噪聲≤20dB（A）的聲屏蔽室，上海康德聽力技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3.2 DPOAE測試 測試內(nèi)容為DP-gram幅值，疊加平均次數(shù)為200次，確認標(biāo)準(zhǔn)為高于本底噪聲6 dBSPL，f0為0.75~8.0 KHz， f2/f1=1.220，L1=70 dB SPL，L2=60 dB SPL。測試前，在無菌條件下用苯妥英鈉殺菌后，校準(zhǔn)探頭，去除外耳道內(nèi)耵聹，經(jīng)適宜耳塞后，將探頭放入外耳道內(nèi)密封，測1 000～8 000 Hz七個頻譜。判斷標(biāo)準(zhǔn)：有兩個頻率引出的DPOAE波形的重復(fù)性>65%為正常。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件作數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組數(shù)據(jù)采用方差分析進行比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組信噪比測試結(jié)果

4組DPOAE信噪比測試結(jié)果提示說明各組DPOAE信噪比測試結(jié)果均差異有統(tǒng)計學(xué)意義，模型組DPOAE信噪比測值明顯降低，穴位注射組僅次于對照組，對照組最好。見表1。

2.2 4組幅值測試結(jié)果

對照組、模型組、腹腔注射組、穴位注射組DPOAE幅值測試結(jié)果提示除f0為0.25 Hz處P>0.05外，其余頻區(qū)P<0.01，說明各組DPOAE幅值測試結(jié)果差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義，同樣的，穴位注射組改善最明顯，腹腔注射組和穴位注射組聽力有一定程度的改善，模型組聽力效果最差。見表2。

2.3 穴位注射神經(jīng)生長因子對各組豚鼠的耳蝸聽覺通路上GJB2基因、SLC26A4基因表達的影響結(jié)果

GJB2基因、SLC26A4基因在聽力損傷下充分表達，注射過NGF的兩組豚鼠耳蝸聽覺通路上兩組基因表達明顯降低，并且穴位注射組下降更加顯著，詳見表3。

3 討論

噪聲所致聽力損傷是由于長期接觸噪聲而發(fā)生的一種緩慢進行的以高頻聽力下降為主的感應(yīng)神經(jīng)性聾，是在基底膜振蕩的基礎(chǔ)上，伴有內(nèi)耳機械性損傷和功能代謝障礙[3]。增加血氧供量，提高對噪聲的耐受力等方法是噪聲聽力損傷防護的主要研究內(nèi)容[4]。研究表明NGF家族成員可使殘留神經(jīng)元復(fù)活，并對其功能進行重塑[5]。中醫(yī)認為針刺腧穴可激發(fā)經(jīng)氣抵抗疾病，調(diào)節(jié)氣血，通經(jīng)活絡(luò)，在耳部疾患中如耳聾耳鳴的治療中已經(jīng)應(yīng)用廣泛，在天宗穴注射維生素B族、利多卡因、川芎嗪等藥物可取的良好療效[6-7]。

表1 4組信噪比測試結(jié)果（x±s）

表2 4組幅值測試結(jié)果（x±s）

表3 穴位注射神經(jīng)生長因子對各組豚鼠的耳蝸聽覺通路上GJB2基因、SLC26A4基因表達的影響結(jié)果

耳聲發(fā)射（OAE）檢測可了解和分析耳蝸的功能狀態(tài)，主要反應(yīng)耳蝸外毛細胞的功能狀態(tài)，檢測值與耳蝸整體功能和損傷程度成負相關(guān)[8]。DPOAE是OAE的一種，絕大多數(shù)正常耳均能引出，是耳蝸主動機制的表現(xiàn)[9]，穩(wěn)定性好，在臨床上已作為一種客觀聽覺生理測聽的方法，有臨床應(yīng)用價值[10]；當(dāng)由噪聲導(dǎo)致的耳蝸功能損害時，耳蝸基底膜上的聽覺感受器外毛細胞受損，相應(yīng)的DPOAE能量信號發(fā)射減少，因此，DPOAE主要反映了耳蝸外毛細胞功能狀態(tài)，其測值與耳蝸整體功能成正比；經(jīng)過研究表面，未受噪聲損傷的對照組聽力最好，受噪聲損傷，但經(jīng)治療的穴位注射組和腹腔注射組，聽力有明顯改善，而受噪聲損傷，又未給予治療的模型組聽力最差。第二個實驗中，GJB2基因、SLC26A4基因在聽力損傷下充分表達，注射過NGF的兩組豚鼠耳蝸聽覺通路上兩組基因表達明顯降低，并且穴位注射組下降更加顯著，間接說明穴位注射對聽力損傷的修復(fù)作用更佳，具有發(fā)展推廣的意義。研究顯示，通過穴位注射的藥物，可進入內(nèi)耳外淋巴，作用時間明顯加長，對內(nèi)耳微環(huán)境和組織細胞缺血缺氧狀態(tài)有良好的改善作用，與本研究結(jié)果一致[11-13]。

綜上所述，從這次研究中不難發(fā)現(xiàn)，穴位注射組治療效果明顯優(yōu)于腹腔注射組，說明神經(jīng)生長因子穴位注射是一種治療噪聲性聽力損傷安全有效的新方法，可配合聽覺語言康復(fù)訓(xùn)練，可加速聽覺功能恢復(fù)[14-15]。但對藥物的作用機制和療效與病程之間的關(guān)系有待進一步做臨床驗證，從而使治療最優(yōu)化。

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