紫外-可見分光光度法測定不同產地山楂果實中總黃酮含量※

馬燕斌 曾建勛 張俊鵬 李瑞明 劉 怡 梁耀榮

紫外-可見分光光度法測定不同產地山楂果實中總黃酮含量※

馬燕斌 曾建勛 張俊鵬 李瑞明 劉 怡 梁耀榮

目的建立紫外-可見分光光度法測定不同產地山楂果實中總黃酮含量。方法采用超聲法提取山楂果實中的總黃酮，采用紫外-可見分光光度法測定不同產地山楂總黃酮含量，檢測波長為500nm。結果蘆丁在質量濃度20～120μg/mL（r=0.9993）范圍內與吸光度值線性關系良好，平均回收率為100.1%，RSD=0.3%（n=6），來自8個產地的總黃酮含量在3.53%～4.12%之間。結論本方法簡便、準確，重復性好，可快速測定山楂果實中總黃酮的含量；不同產地山楂總黃酮的含量存在一定差異，本實驗可為控制山楂的質量提供參考依據。

山楂；總黃酮；紫外-可見分光光度法

山楂為薔薇科山楂屬植物，主要分布在北半球溫帶亞洲、歐洲、美洲各州，目前已有1000多種山楂種屬被鑒定[1]。在亞洲、歐洲、美洲，人們廣泛食用山楂的提取物作為食品和膳食補充劑。在北美，尤其是加拿大，山楂提取物可能有助于與心臟相關疾病的治療[2]。許多研究表明，山楂的葉、花和果實的提取物對心血管系統產生有益的影響，具有保護心血管，舒張血管內皮依賴性血管[3]，改善冠脈循環[4]，降血脂的作用[5]。中國的山楂也具有舒張血管[6]和降血脂的作用[7-8]。

在中國和歐洲，山楂被廣泛用于食品和藥品生產中，如酒、果醬和大山楂[9]。目前，市場上銷售的山楂藥品已有七大類70余種，除用于消積化食、補脾健胃之外，也用于防治心血管疾病。山楂制劑的安全性研究發現，常見的不良反應有頭暈、胃腸道反應、心慌等，但并未有嚴重的影響[10-11]。而山楂中的主要活性成分為黃酮類化合物，如金絲桃苷、槲皮素、原花青素[12-13]。由于生長的環境不同，不同產地山楂的質量不同。因此，對山楂中總黃酮的含量進行研究是必要的，本研究對不同產地的山楂果實中總黃酮的含量進行研究，為綜合評價不同產地山楂的質量標準提供一定的依據。

1 實驗材料

1.1 儀器與試劑主要儀器：SB25-12D臺式超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UV/VIS916型紫外-可見分光光度計（島津公司）；SHZ-D循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）；電子分析天平（Sartorius公司）。

1.2 試劑與材料蘆丁標準品（批號100080-200707）；95%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均購自廣州化學試劑廠；山楂果實采自9～10月，產地分別為山東棗莊、安徽蕪湖、山西晉城、河南新鄉、河南林州、河南南陽、河北承德、廣西桂林、遼寧遼陽、云南昆明。

2 方法與結果

2.1 不同產地山楂果實中總黃酮的提取先將山楂粉碎后過10目篩，按十字交叉法取樣，精密稱取山楂粉末三份，每份5.0g，分別加入70%乙醇100mL，超聲提取40min，重復提取2次。提取完成后合并提取液，抽濾，并用少量相應濃度的乙醇洗滌濾渣。向濾液中加入適量體積的乙醇，使其體積與反應前保持一致，4℃保存，備用。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁對照品12.53mg，置25mL量瓶中，加適量無水乙醇溶解，加無水乙醇至刻度，搖勻，配制成每1mL中含無水蘆丁0.50mg的溶液。

2.3 檢測波長的確定吸取一定量的蘆丁標準品溶液和山楂總黃酮溶液，分別置于25mL容量瓶中，按“2.4.1”方法立即照紫外-可見分光光度法，在400～600nm的波長處測定吸光度，結果發現蘆丁標準品和樣品在500.0nm處有最大吸收峰，峰型較好，如圖1、圖2所示，故選擇500.0nm為檢測波長。

圖1 蘆丁標準品的紫外吸收圖譜

圖2 山楂總黃酮的紫外吸收圖譜

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系的考察精密量取對照品溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL，分別置25mL量瓶中，各加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，立即照紫外-可見分光光度法，在500nm的波長處測定吸光度。

以蘆丁濃度（mg/mL）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得蘆丁的線性回歸方程為A=19.716C-0.043，r=0.9993，表明蘆丁的質量濃度在20～120μg/mL范圍內與吸光度值線性關系良好。

2.4.2 精密度考察精密吸取六份3.00mL蘆丁對照品溶液，按“2.4.1”方法測定吸光度，計算RSD值。結果表明，相對標準偏差RSD為0.5%，精密度良好。

2.4.3 穩定性考察精密吸取3.00mL蘆丁對照品溶液和山楂總黃酮溶液，按“2.4.1”方法每隔5min記錄一次吸光度值，記錄6次。在30min內，兩份溶液吸光度值的相對標準偏差RSD分別為0.5%和0.4%，結果表明，30min內樣品的穩定性良好。

2.4.4 重現性考察精密稱取5.0g山楂六份，按“2.1”項下提取山楂總黃酮，精密量取0.20mL，分別置25mL量瓶中，各加水至6mL，以下按“2.4.1”方法操作，測定吸光度。六份樣品的標準偏差RSD為0.3%，表明重現性良好。

2.4.5 加樣回收率考察精密量取0.1mL山楂總黃酮溶液，取六份，分別加入一定量的蘆丁標準溶液，按“2.4.1”方法測定吸光度，計算其加樣回收率。含總黃酮以無水蘆丁（C27H30O16）計，結果見表1。

2.5 不同產地山楂總黃酮的測定精密量取0.20mL“2.1項”下提取所得山楂總黃酮提取液置于25mL容量瓶中，各加水至6mL，以下同“2.4.1項”操作，在500nm的波長處測定吸光度。含總黃酮以無水蘆丁（C27H30O16）計，不同產地（山東棗莊、安徽蕪湖、山西晉城、河南新鄉、河南林州、河南南陽、河北承德、廣西桂林、遼寧遼陽、云南昆明）的山楂總黃酮的測定結果，如表2所示。

表1 加樣回收率實驗結果

表2 不同產地山楂總黃酮的含量測定結果(n=3)

3 討論

中國山楂資源豐富，分布廣泛，種類繁多，如伏山楂、毛山楂、桔紅山楂、裂葉山楂等，多達18種，6個變種。山楂樹結果部位的光照條件對果實的質量影響較大，光照好的部位，其花果多，果實質量好。光照不好的部位結果少，質量差[1]。東北地區平均氣溫低，氣候干燥；華北地區全年平均氣溫10～16℃，降雨量適中，為我國山楂的主要栽培區，已有許多優良品種；華南地區年平均氣溫高，降雨豐富，且土壤多為紅壤，不宜山楂種植；西南地區分布有云南山楂，生長在海拔1400～3000m的向陽山地。

山楂的質量與其生長的周圍環境如光照時間、溫度、水分等有密切關系。本研究中，云南山楂中總黃酮的含量明顯高于其它產地，這與其自身的品種有直接關系，也與其生長在海拔高、光照時間長的山地有關。河南、河北、山東、安徽、山西所產山楂總黃酮含量在3.53%～4.12%之間，含量較為接近。廣西及遼寧所產山楂總黃酮含量最低，分別為3.33%和3.21%。

不同產地的山楂品種不同，生長的周圍環境不同，導致其山楂總黃酮含量有所差異。因此，對不同產地的山楂總黃酮進行研究，為其質量標準的進一步研究提供參考，是有必要的。更深入的對山楂的品種、生長環境等因素和山楂總黃酮含量之間相互關系的研究，將是我院下一步研究的重點。

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Analysis of Total Flavonoids inCrataegus Pinnatifida Bge. From Different Areas by UV-VIS Spectrophotometry

Ma Yanbin Zeng Jianxun Zhang Junpeng Li Ruiming Liu Yi Ling Yaorong

ObjectiveTo establish a UV-VIS spectrophotometry method to determine total flavonoids inCrataegus pinnatifida Bge.from different areas.MethodsTotal flavonoids ofCrataegus pinnatifida Bge.was extracted by ultrasonic method, and was determined by UV-VIS spectrophotometry at 500 nm.ResultsThe linearity of rutin was20～120μg/mL(r=0.9993), and the average recovery ratios was 100.1%. The RSD was 0.3%(n=6). The contents of total flavonoids ranged from 3.53% to 4.12%.ConclusionThe method was simple and accurate, and it could be used for the determination of total flavonoids quickly. The contents of total flavonoids was different from different areas.It provided some academic basis for quality standard ofCrataegus pinnatifida Bge..

Crataegus pinnatifida Bge.; Total flavonoids; UV-VIS spectrophotometry

R927.2

A

1673-5846(2013)06-0024-03

中山大學附屬第一醫院藥學部，廣東廣州 510080

廣東省重大科技專項項目（2011A080300004）；廣東省中醫藥局科研項目（20121145）；廣州市生物產業示范工程發展專項項目（2012-243）

馬燕斌（1977.6-），女，本科，主管藥師，主要研究方向為中藥和醫院藥學。E-mail：179621079@qq.com。

李瑞明（1974.7-），男，本科，主管藥師，主要研究方向為醫院制劑。E-mail：liruiming321@163.com。