解脲脲原體不同生物群與輸卵管妊娠的相關(guān)性

劉巖麗 何桂兒

（廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 511400）

解脲脲原體不同生物群與輸卵管妊娠的相關(guān)性

劉巖麗 何桂兒

（廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 511400）

目的 探討解脲脲原體不同生物群感染與輸卵管妊娠的關(guān)系。方法 利用 PCR 技術(shù)，檢測(cè) 132 例輸卵管妊娠患者（觀察組）和同期門診68例早期正常妊娠婦女（對(duì)照組）的宮頸分泌物中的解脲脲原體，并對(duì)解脲脲原體陽(yáng)性者進(jìn)行不同生物群的檢測(cè)。觀察兩組解脲脲原體感染的陽(yáng)性率及不同生物群感染所占的比例，并進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 ①觀察組 56 例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體 DNA，陽(yáng)性率為 46.8%，對(duì)照組 10 例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體 DNA，陽(yáng)性率為 23.2%，兩組比較，差異有顯著性（P＜ 0.05）；②解脲脲原體陽(yáng)性者中，觀察組中 Uu 生物 1 群占 42.4%（25/59），生物 2 群占 52.5%（3l/59），生物 1 群和生物 2 群兩群混合感染占 5.1%（3/59）；而對(duì)照組中 Uu 生物 1 群占 66.7%（11/15），生物 2 群占 20%（3/15），生物 1 群和生物 2 群兩群混合感染占 6.7%（1/15）。患者組中生物 1 群的感染率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），患者組中生物 2 群的感染率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）；Uu 兩群混合感染在兩組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。結(jié)論 解脲支原體感染與輸卵管妊娠的發(fā)生有關(guān)，生物二群的感染與輸卵管妊娠的發(fā)生密切相關(guān)。

解脲脲原體；生物群；輸卵管妊娠

近年來(lái)，異位妊娠的發(fā)生率在不斷上升，其中輸卵管妊娠占異位妊娠的95%以上，輸卵管妊娠的主要原因?yàn)檩斅压苎装Y，故引起輸卵管炎癥的病原體是目前關(guān)注的焦點(diǎn)。有研究顯示解脲脲原體（Ureaplasma urealyticum，Uu）與異位妊娠有關(guān)。解脲脲原體是成人尤其是性成熟婦女泌尿生殖道常見的正常微生物之一，也是泌尿生殖道感染的重要原因。許多學(xué)者認(rèn)為Uu易寄居于性行為頻繁者的泌尿生殖道內(nèi)，寄居于下生殖道的Uu可通過(guò)淋巴播散到附件引起炎癥。而輸卵管炎、輸卵管粘連、狹窄、扭曲等均可導(dǎo)致孕卵在輸卵管中運(yùn)行的異常，孕卵阻滯在輸卵管內(nèi)，即發(fā)生就地著床。本研究采用PCR技術(shù)分別對(duì)輸卵管妊娠患者和同期門診早期正常妊娠婦女的宮頸分泌物進(jìn)行解脲脲原體檢測(cè)，并對(duì)解脲脲原體陽(yáng)性者進(jìn)行不同生物群的檢測(cè)。觀察解脲脲原體不同生物群感染與輸卵管妊娠的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇我院2009年1月至2010年6月因輸卵管妊娠行開腹手術(shù)或腹腔鏡手術(shù)的患者共132例（觀察組），術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為輸卵管妊娠患者。并選擇同期門診早期正常妊娠婦女68例作為對(duì)照組，兩組在年齡、經(jīng)濟(jì)及文化程度的分布、差別上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

輸卵管妊娠患者及對(duì)照組接受婦科檢查時(shí)，先上陰道窺器，用無(wú)菌棉拭除去宮頸口表面的黏液，用培養(yǎng)管內(nèi)無(wú)菌棉簽置宮頸管內(nèi)1～2cm處旋轉(zhuǎn)5周，將粘有宮頸分泌物的無(wú)菌棉簽置于1mL的生理鹽水中，充分懸浮，以15000r/min的速度離心5min，棄盡上清，在沉淀中加入50μL DNA提取液充分混勻，煮沸10min后再離心，取上清液行PCR檢測(cè)并同時(shí)將抽提DNA置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 Uu檢測(cè)

采用達(dá)安基因診斷中心提供的解脲支原體聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)試劑盒。取聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)管加入提取好的標(biāo)本DNA2μL，6000rpm/min離心，按93℃45s——55℃45s——72℃60s，共做35個(gè)循環(huán)，最后置72℃保溫5min。電泳檢測(cè)：直接從PCR擴(kuò)增后的反應(yīng)管中取10μL下層藍(lán)色液體加樣，經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠上電泳20～30min后于紫外儀上觀察。在459bp處出現(xiàn)橙黃色條帶為陽(yáng)性。

1.2.3 Uu生物群鑒定

引物序列來(lái)自于解脲脲原體MB基因，參照Teng等[1]的設(shè)計(jì)，由寶生物工程（大連）有限公司合成并進(jìn)行熒光標(biāo)記。具體序列如下：UMS-125 5’GTATTTGCAAT- CTTTATATGTTT，UMA-226 5’6-FAM-CAGCTGATGTAAGTGCAGCATTAAATTC。分別取TaKaRa Ex Taq HS 0.25μL，10×Ex Taq Bufer（Mg2+Plus）5μL，dNTPMixture 4μL，引物UMS-125（20μM），UMA-226（20μM）各1μL，DNA模板10μL，用雙蒸水補(bǔ)足至50μL。熱啟動(dòng)PCR反應(yīng)條件：變性（94℃，30s），退火（55℃，1min），延伸（72℃，1min），最后一次延伸（72℃，5min），共35個(gè)循環(huán)。其中生物1群（Parvo生物群）擴(kuò)增產(chǎn)物為403 bp，生物2群（T960生物群）為448 bp。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μL加入1.5%瓊脂糖凝膠樣品孔中（含1μg/mL溴化乙錠）電泳，于紫外分析儀下觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)SPSS12.0軟件包處理，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組56例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體DNA，陽(yáng)性率為46.8%；對(duì)照組10例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體DNA，陽(yáng)性率為23.2%；兩組比較，差異有顯著性（χ2=9.33，P＜0.01）。見表1。

表1 兩組人群宮頸分泌物中解脲脲原體檢測(cè)結(jié)果

2.2 解脲脲原體陽(yáng)性者中，觀察組中Uu生物1群占42.4%（25/59），生物2群占52.5%（3l/59），生物1群和生物2群兩群混合感染占5.1%（3/59）；而對(duì)照組中Uu生物1群占66.7%（11/15），生物2群占20%（3/15），生物1群和生物2群兩群混合感染占6.7%（1/15）。患者組中生物1群的感染率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），患者組中生物2群的感染率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Uu兩群混合感染在兩組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組人群宮頸分泌物中解脲脲原體生物群分類[例（%）]

3 討 論

近年來(lái)，異位妊娠的發(fā)生率在不斷上升，其中輸卵管妊娠占異位妊娠的95%以上，輸卵管妊娠的主要原因?yàn)檩斅压苎装Y，故引起輸卵管炎癥的病原體是目前關(guān)注的焦點(diǎn)。現(xiàn)已證實(shí)淋病雙球菌、沙眼衣原體以及解脲支原體等一些細(xì)菌感染與異位妊娠的發(fā)生密切相關(guān)[1]，并與盆腔炎及輸卵管炎的發(fā)病有關(guān)。許多研究結(jié)果證實(shí)Uu易寄居已婚婦女的泌尿生殖道內(nèi)，寄居于下生殖道的Uu可通過(guò)上行感染、淋巴播散到輸卵管引起炎癥，從而導(dǎo)致不育、異位妊娠或不良的妊娠結(jié)局[2,3]。鄧玉清等[4]應(yīng)用PCR技術(shù)，檢測(cè)128例輸卵管妊娠患者（觀察組）和50例行附件切除術(shù)、無(wú)輸卵管妊娠史的卵巢囊腫患者（對(duì)照組）的宮頸分泌物和輸卵管組織中解脲支原體，結(jié)果顯示觀察組56例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲支原體DNA，陽(yáng)性率為43.8%，對(duì)照組10例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲支原體DNA，陽(yáng)性率為20.0%；觀察組48例輸卵管組織檢測(cè)出解脲支原體DNA，陽(yáng)性率為37.5%，對(duì)照組5例輸卵管組織檢測(cè)出解脲支原體DNA，陽(yáng)性率為10.0%；兩組比較，差異有極顯著性（P＜0.01）。解脲支原體DNA陽(yáng)性者，盆腔粘連發(fā)生率為70.6%。本研究中，觀察組56例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體DNA，陽(yáng)性率為46.8%；對(duì)照組1O例宮頸分泌物檢測(cè)出解脲脲原體DNA，陽(yáng)性率為23.2%；兩組比較，差異有顯著性（χ2=9.33，P＜0.01）。

但是，解脲脲原體作為一種條件致病微生物，其致病性與多種因素有關(guān)，如宿主免疫力、性伴數(shù)、血清型別等。從表型和基因型上可將解脲脲原體分為2個(gè)生物群：微小脲原體（Ureaplasma Parvum，即傳統(tǒng)意義上的解脲脲原體生物群1，包括血清型1，3，6，14）和解脲脲原體（Ureaplasma Urealyticum，解脲脲原體生物群2，包括另外10個(gè)血清型）。研究發(fā)現(xiàn)，兩生物群致病性可能存在差異，即Parvo生物群是尿道/下生殖道的定植菌群，而T960生物群與致病性感染有關(guān)[5]。Domingues等[6]報(bào)道在94個(gè)無(wú)癥狀的計(jì)劃生育門診婦女中，40%陰道標(biāo)本中檢出解脲脲原體，其中生物群1占73%，生物群2占25%，2%為兩種混合感染。有學(xué)者研究提示生物1群可能在女性生殖道中屬于正常菌群，無(wú)致病作用或起協(xié)同致病的作用，在異位妊娠的病因中，生物2群的感染為比較重要的致病因素之一。Rar等[7]采用多重PCR方法對(duì)93例女性Uu臨床標(biāo)本進(jìn)行分群研究，生物一群的檢出率為85%，生物二群的檢出率為11%，兩群混合感染占4%，但是生物二群在有陰道異常分泌物的患者中檢出率（33%）顯著升高。Abele-Horn等[8]采用PCR方法研究254例有泌尿生殖道感染患者的Uu臨床標(biāo)本，其中生物一群的檢出率為81%（206/254），生物二群的檢出率為30%（76/254），兩群混合感染的檢出率為6%（14/254），特別是在盆腔炎和流產(chǎn)患者中生物二群的檢出率顯著升高，分別為57%和42%。本研究提示患者組中生物1群的感染率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），患者組中生物2群的感染率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Uu兩群混合感染在兩組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；本研究得出在輸卵管妊娠患者中生物二群的檢出率顯著升高，考慮生物二群的感染與輸卵管妊娠的發(fā)生密切相關(guān)。但是本研究取宮頸分泌物進(jìn)行檢測(cè)，未行輸卵管粘膜組織檢測(cè)，今后需進(jìn)一步行輸卵管粘膜組織不同生物群的檢測(cè)，進(jìn)一步了解不同生物群的感染與輸卵管妊娠的相關(guān)性。

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R714.22

：B

：1671-8194（2013）06-0071-03

廣州市番禺區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目[項(xiàng)目編號(hào)：2009-Z-102-1