夜交藤片質量標準的研究

楊 寶 鄔偉魁

（廣東省梅州市食品藥品監督檢驗所，廣東 梅州 514071）

夜交藤片質量標準的研究

楊 寶 鄔偉魁

（廣東省梅州市食品藥品監督檢驗所，廣東 梅州 514071）

目的 建立夜交藤片的質量標準。方法 用TLC法對夜交藤片中首烏藤進行定性鑒別；用HPLC法對制劑中首烏藤的活性成分2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進行含量測定。色譜條件：色譜柱為SHIMADZUVP-ODS（4.6nm×250mm，5μm），流動相為乙腈∶水（28∶72），流速為1.0mL/min，檢測波長為320nm，柱溫為25℃。結果 薄層鑒別斑點清晰，陰性對照無干擾；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范圍內呈良好的線性關系，r＝0.9999，平均回收率為96.45%，RSD為1.84% （n=6）。結論 該方法靈敏準確、專屬性強，可用于夜交藤片的質量控制。

夜交藤片；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

夜交藤片源于梅州醫院的臨床經驗方，由首烏藤、合歡皮、遠志等中藥組成，具有祛痰開竅，滋陰健腦，安神益智的功效；臨床多用于肝腎陰虛引起的心悸怔仲，失眠多夢，虛煩不安，憂郁，健忘及工作后疲勞等所致的腦力損傷等癥。該制劑為醫院制劑，原質量標準較低，制定于上世紀90年代。由于本品臨床療效良好，需求量較大，成為該院醫院的主打品種。為更好地控制其質量，對本品進行質量標準研究。建立了君藥首烏藤的TLC定性鑒別方法及其有效成分2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

梅特勒AB204-N型電子分析天平；BP211D電子天平；Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ-250DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WFH-201B紫外透射反射儀（上海精科實業有限公司）。

1.2 材料

對照藥品有：大黃素（批號：110756-200110）、大黃素甲醚（批號：110758-200610）、2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（批號：111537-201103），首烏藤（批號：120939-200404中國藥品生物制品檢定所提供）；夜交藤片（批號110305，110314，110321梅州市第三人民醫院提供）；乙腈為色譜純（天津四友化工），水為超純水，其余試劑均為分析純。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）。

2 薄層色譜鑒別

取樣品10片，除去糖衣，研細，加乙醇10mL，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。取首烏藤對照藥材1g，研細，加乙醇10mL，超聲處理30min，濾過，濾液為對照品溶液。取大黃素、大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1mL含1mg的對照品溶液。首烏藤以外各藥材按處方比例稱取，按工藝提取，即得除首烏藤以外各藥材混合干浸膏粉，取混合干粉約10g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，各吸取5μL上述五種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視[1-3]。在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 首烏藤薄層色譜圖（1.供試品溶液；2.首烏藤對照藥材溶液；3.陰性對照溶液；4.大黃素對照品；5.大黃素甲醚對照品）

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統適用性試驗[1]

Agilent 1100高效液相色譜儀；色譜柱：SHIMADZU VP-ODS 250 ×4.6，SN:8022538；流動相：乙腈∶水（28∶72）；流速：1.0mL/ min；柱溫：25℃；進樣量：10μL；測波長為320nm[4-6]。

3.2 對照品溶液制備[1]

精密稱定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液制備[7，8]

10片本品，去除糖衣，研沫，取適量（約相當于首烏藤藥材0.5g）置25mL量瓶中，精密加入稀乙醇20mL，超聲30min，加稀乙醇至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

3.4 線性關系考察

把所得對照品溶液濃度為：20μg/mL、40μg/mL、60μg/ mL、80μg/mL、100μg/mL。分別精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。結果顯示，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范圍內線性關系良好。

3.5 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h，進樣10μL，測定峰面積。結果：供試品溶液的平均峰面積為2723.89，RSD為0.062%，表明其穩定性較好。

3.6 重復性試驗

取6份同一批號的樣品，制備方法同供試品溶液。結果顯示其重復性良好。

3.7 專屬性試驗

按色譜條件精密吸取上述制備的溶液10μL，測定峰面積。結果：陰性對照在對照品相同保留時間處無干擾峰，故認為其它藥味對2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定無干擾。

3.8 樣品含量測定

分別取3個批次的樣品（批號110305，110314，110321），按3.3項方法制備供試品溶液，測得樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量為64.158，60.156，61.921mg/片。

4 討 論

4.1 測定指標的考察

首烏藤為夜交藤片處方中君藥，其主要成分為大黃素、大黃素甲醚、2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。其中大黃素、大黃素甲醚為大黃、虎杖等藥材常見的成分，而2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是首烏藤中特有的成分，為更好控制藥品質量，體現首烏藤藥材中這一專屬性成分，因此本實驗最終以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為含量測定的指標。實驗結果表明：該含量測定方法簡便、準確、專屬性強。

4.2 陰性對照取樣量選擇

為體現陰性對照對2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷測定的影響，更具有代表性，故陰性對照溶液制備時取樣量約為供試品溶液制備時的4倍。

4.3 流動相的選擇

以不同比例的乙腈-水（28∶72、26∶74、20∶80、15∶85）作為流動相，考察流動相比例改變時，對樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分離效果的影響。結果顯示，乙腈比例變化對樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分離效果有較大的影響。由于以乙腈∶水（28∶72）為流動相時，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰時間約6min，分離效果較好，故本實驗采用乙腈：水為流動相。

4.4 供試品提取方法的選擇

對供試品提取方法進行了對比和篩選：①2010版《中國藥典》一部首烏藤含量測定項下方法，采用加熱回流的方法。②本文方法，采用超聲處理的方法。結果顯示，2種方法所得結果基本一致，因此采用超聲處理的方法，體現更方便、快捷的原則。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010: 164.

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[4] 廖海民,王玲麗.不同產地何首烏中二苯乙烯苷的測定[J].中草藥,2006,37(4):603.

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R9

B

1671-8194（2013）26-0067-02