高效液相色譜法測定三黃系列品種中鹽酸小檗堿的含量※

劉 輝劉永利

高效液相色譜法測定三黃系列品種中鹽酸小檗堿的含量※

劉 輝1劉永利2

目的建立三黃片、三黃膠囊等系列品種中鹽酸小檗堿的HPLC含量測定方法。方法C18柱（4.6×150mm，5μm，Capcell pak C18 MGⅡ），以乙腈-水（1：1）（每1000ml流動相中含磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動相，檢測波長為265nm，流速為1ml?min-1，柱溫為室溫。結果此方法線性關系良好，平均加樣回收率為99.54%。結論本方法分離度好，結果準確可靠。

HPLC；鹽酸小檗堿；三黃片；三黃膠囊

三黃系列品種包括三黃片（糖衣片、薄膜衣片）、三黃膠囊，均是由大黃、黃芩浸膏與鹽酸小檗堿等三味中藥組成的復方制劑，有清熱解毒、瀉火通便之功效，為中醫臨床常用中成藥。鹽酸小檗堿為方中主藥，關于其含量測定方法，文獻報道較多，以高效液相色譜法最為常見，另外還有液相色譜質譜聯用法、毛細管電泳法等[1-6]，為保證藥品質量，筆者利用HPLC法對此系列品種的鹽酸小檗堿進行了含量測定方法研究。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Shimadzu 2010、LC20A（四元泵、自動進樣器、二極管陣列檢測器），天平：Mettler AE240，鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110713-200609，105℃干燥5小時，按含（C20H18CINO4）為98.1%計算）。乙腈為色譜純，水為去離子水，其它試劑為分析純。

樣品來源見表2，陰性樣品自制。

2 色譜條件

C18柱（4.6×150mm，5μm，Capcell pak C18 MGⅡ），以乙腈-水（1：1）（每1000ml流動相中含磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動相，檢測波長為265nm，流速為1ml?min-1，柱溫為室溫。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算，應不低于7000。

3 方法與結果

3.1 溶液的制備

3.1.1 對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥5h的鹽酸小檗堿對照品0.01059g，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.1.2 供試品溶液的制備取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細（或取膠囊裝量差異項下的內容物，混勻），取0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2%鹽酸甲醇20ml（膠囊加50ml），密塞，稱定重量，超聲處理（功率 160W，頻率40MHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.1.3 陰性溶液的制備按處方量取除鹽酸小檗堿外的其它藥材，按制法項下方法制備陰性樣品，取陰性樣品0.1g，按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

3.2 線性關系考察精密吸取濃度為 0.1039mg/ml的對照品溶液1、2、5、10、15、20μl，進樣測定，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為：y=4481034.8x＋4175.5（r=0.9999），表明鹽酸小檗堿在0.1039～2.0778μg范圍內呈良好的線性關系。

3.3 專屬性試驗精密吸取對照品溶液、供試品溶液及不含鹽酸小檗堿的陰性溶液，按上述色譜條件測定，所得色譜峰峰形對稱，分離度良好，陰性溶液中在與鹽酸小檗堿相應保留時間處無色譜峰，表明陰性無干擾，專屬性好（見圖1、2）。

圖1 對照品、三黃片樣品、陰性樣品色譜圖

圖2 對照品、三黃膠囊樣品、陰性樣品色譜圖

3.4 重復性試驗取本品10片，除去糖衣，精密稱定，研細，分別取0.08、0.10、0.12g各3份，精密稱定，按3.1項下方法制備供試品溶液，進樣測定，結果平均含量為12.19mg/g，RSD為1.04%，表明本法重復性良好。

3.5 穩定性試驗取同一份供試品溶液，分別在0、1、3、6、8、13、18、21h測定，結果峰面積RSD為0.65%，表明供試品溶液至少在21h內穩定。

3.6 準確度試驗取3.4項下的樣品粉末（含量為12.1907mg/g），稱取9份，每份0.05g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三種不同濃度鹽酸小檗堿對照品的 0.2%鹽酸甲醇溶液（濃度分別為0.020778mg/ml、0.031166mg/ml、0.041555mg/ml）20ml，自3.1項下供試品溶液制備中“密塞，稱定重量”起同法制備供試品溶液，測定含量，結果見表1。

表1 準確度試驗結果(n=9)

3.7 樣品測定取不同廠家樣品，按3.1項下方法測定含量，結果見表2。

表2 樣品測定結果

4 討論

4.1 小檗堿為生物堿，在C18柱上保留較弱，而且峰形易拖尾，本文所用流動相PH值為5.5，大于其pKa（2.47）[7]，而且流動相中加入離子對試劑，所得色譜峰形對稱，保留時間穩定，經試驗，能適應多個廠家不同型號的色譜柱，具有廣泛的適用性。

4.2 目前三黃系列品種有 200多個批準文號，近100個生產廠家，其執行標準不一，特別是三黃膠囊未對鹽酸小檗堿含量進行控制，本文對多個廠家樣品測試均能得到滿意的結果，可為日后統一標準作參考。

4.3 分別考察了甲醇、鹽酸-甲醇（1：100）、0.2%鹽酸甲醇、流動相作提取溶劑，結果表明，用0.2%鹽酸甲醇為提取溶劑，超聲30min提取率高。

4.4 鹽酸小檗堿在265nm和348nm有兩個最大吸收峰，經試驗，兩個波長對色譜行為無甚影響，但265nm吸收較高，故選為檢測波長。

[1] 王西彬,陳暢,何希榮,等.RP-HPLC測定三黃片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(13)：128-130.

[2] 郭洛宏.HPLC法測定三黃片中鹽酸小檗堿、大黃素和大黃酚含量的結果分析[J].中國藥房,2011,22(40)：3824-3826.

[3] 余志剛,程培秀.金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測定[J].華西藥學雜志,2010,25(1)：90-92.

[4] 陳慧娟,付超美,李建利,等.蘞黃痔瘡栓的薄層鑒別及鹽酸小檗堿的測定[J].華西藥學雜志,2008,23(3)：348-350.

[5] 陳娟,莊波陽.HPLC-MS/MS法測定三黃片中小檗堿的含量[J].海峽藥學,2011,23(2)：35-37.

[6] 劉丹,毋福海,曾承輝.毛細管電泳法同時測定三黃片中7種有效成分的含量[J].中國藥房,2011,22(28)：2672-2675.

[7] 羅懿妮,賴宇紅,薛巧,等.鹽酸小檗堿RP-HPLC測定條件的比較[J].中藥材,2004,27(9)：647-649.

Determination of Berberine Hydrochloride in Sanhuang series by HPLC

Liu Hui Liu Yongli

ObjectiveTo establish the determination method of Berberine hydrochloride in Sanhuang tablet and Sanhuang capsule by HPLC.MethodsThe C18 column(4.6×150mm,5μm, Capcell pak C18 MGⅡ)was used in this method,and a mixture acetonitrile-water(1:1)(3.4g pltassium di hydrogen phosphate and 1.7g sodium dodecyl sulphate were in 1000ml mobile phase) as a mobile phase, detection wavelength 265nm.ResultsThis method showed a good linear relationship, the mean recovery was 99.54%.ConclusionThis method showed a good separating degree and reliable.

HPLC; Berberine hydrochloride; Sanhuang tablet; Sanhuang capsule

R927.2

A

1673-5846(2013)07-0026-03

1常州市武進中醫醫院，江蘇常州 213161

2河北省食品藥品檢驗院，河北石家莊 050011

河北省自然科學基金資助項目：中成藥質量標準模式創新研究（項目號：C2011320007）

劉輝（1971.10-），男，江蘇常州人，學士學位，副主任中藥師，主要從事中藥鑒定、制劑和臨床藥學等相關工作。Tel：0519-86582510，E-mail：liuhui71101@sina.com。