UPLC測定黃連中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量

譚鐳，詹雁，阮佳，徐超群

（1.四川大學華西藥學院，四川成都 610041；2.四川省中醫藥科學院，四川成都 610041）

UPLC測定黃連中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量

譚鐳1，2，詹雁2，阮佳2，徐超群2

（1.四川大學華西藥學院，四川成都 610041；2.四川省中醫藥科學院，四川成都 610041）

建立UPLC測定黃連中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀含量的方法。采用ACQUITY UPLC BEH-C18色譜柱（2.1mm×50mm×1.7μm），以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.2mL/min，檢測波長為350nm。結果表明鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀分別在0.0372～0.2976μg/mL，0.0082～0.0656μg/mL的濃度范圍內均有良好的線性關系（r=0.9999），回收率均大于95%，RSD均小于2%。該方法快速、準確、重現性好，可用于測定黃連中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量。

黃連；鹽酸小檗堿；鹽酸巴馬汀；超高效液相色譜法（UPLC）

0 引言

黃連是常用的中藥材，鹽酸小檗堿通常作為有黃連參與的單方制劑或者大復方制劑中的指標成分，快速準確測定鹽酸小檗堿含量的UPLC法可以為生產和檢測提供參考。目前，檢測黃連的生物堿類化合物常用方法主要有分光光度法、高效液相色譜法[1-3]。黃連中的鹽酸小檗堿和巴馬汀的HPLC法測定時保留時間非常接近[4]，通常為了達到較好的分離效果，不得不延長分析時間，再加上中藥材成分復雜，為避開雜質峰對樣品的干擾，分析時間多在20～30min以上；UPLC方法與分光光度法相比，穩定性、靈敏度、準確度和重現性更好，與高效液相色譜法相比，分析時間更短，耗費溶劑更少，需要的樣品也更少。為此，本文建立了超高效液相色譜法（UPLC），優化梯度洗脫程序，6min內可分離黃連中難分離的鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

ACQUITY UPLC（美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower2色譜工作站）；BP210S電子天平（德國Sartorius公司）；AB135-S 1/10萬天平（METTLER TOLEDO儀器有限公司）。

乙腈（色譜純，美國Sigma公司）；水（樂百氏純凈水）；磷酸、甲醇、鹽酸、三氯甲烷（分析純，成都市科龍化工試劑廠）。

黃連藥材（四川利民中藥飲片有限公司，成都中藥材大市場）；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200609）；鹽酸巴馬汀對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110732-200506）。

1.2 色譜條件

色譜柱為ACQUITY UPLC BEH-C18（2.1mm× 50mm×1.7μm，美國Waters公司）；以乙腈為流動相A，0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH調為3.0）為流動相B，按表1進行梯度洗脫；檢測波長為350 nm；柱溫為35℃；流速為0.2mL/min，進樣量為2μL[5]。

表1 梯度洗脫程序

1.3 樣品制備

精密稱取橙鹽酸小檗堿，鹽酸巴馬汀對照品適量，用1%鹽酸甲醇制成含鹽酸小檗堿0.186mg/mL、鹽酸巴馬汀0.164mg/mL的標準品儲備液。分析測試中所用標準溶液由標準品儲備液逐步稀釋得到。

取黃連藥材粉末過四號篩約0.100 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液100mL，稱定重量，冷浸1 h后超聲30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液[6-7]。

2 結果與討論

2.1 標準工作曲線

分別精密移取混合標準液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，進樣測定，以各成分峰面積為縱坐標y，質量體積濃度（μg/mL）為橫坐標x，繪制標準曲線，如表2所示。結果顯示各標準曲線線性關系良好。

表2 標準工作曲線

2.2 精密度

取含鹽酸小檗堿0.074 4mg/mL、鹽酸巴馬汀0.0164mg/mL的混合標準品溶液，重復進樣5次，計算鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀峰面積的RSD分別為1.68%、1.73%，說明本UPLC方法下儀器精密度良好（見圖1）。

圖1 混標圖譜

2.3 重復性

取同一批號的黃連藥材6份，按1.3方法制備樣品溶液，測定并計算鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀含量的RSD分別為1.77%、1.89%，重復性良好（見圖2）。

2.4 穩定性

取同一樣品溶液，于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24h分別進行測定，以峰面積為指標計算鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的RSD分別為1.24%、1.29%，說明樣液在24h內穩定。

2.5 回收率

稱取已測定含量的黃連藥材粉末（過四號篩）約0.10 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入混合標準品儲備液0.1mL，精密加入1%鹽酸甲醇100mL，按1.3方法制備樣品溶液，測定，回收率較好，結果見表3。

表3 回收率試驗

2.6 樣品測定

圖2為樣品溶液的色譜圖，在本色譜條件下，兩種被測成分與其他化合物色譜峰分離度均良好。對10批次黃連藥材進行測定，結果見表4。

圖2 樣品圖譜

表4 10批藥材含量

3 結束語

UPLC目前在單一成分化合物以及多成分體內樣品中應用較為廣泛，在中藥材的含量測定以及大復方中指標成分測定方面應用較少，UPLC與傳統HPLC相比，能更加快速地分離分析樣品，同時也能大量節省溶劑的使用量。而本文將UPLC應用到黃連的含測中，與其他采用UPLC測定黃連中生物堿的方法相較，色譜條件直接由藥典優化而來，在保證分離度的同時色譜流速更低，樣品制樣方法更加簡單，樣品進樣量也更少，在大批量分析樣品時可以大量節約溶劑和制樣時間[8-9]。本文所建立的UPLC法能有效地把黃連中兩種生物堿類成分的分析時間縮短至6min以內，并且分離度大于1.5，峰形尖銳，為其他中藥材建立UPLC快速分析方法提供了參考。

[1]曹玲，王志剛，王蓮芝.色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應用[J].中國當代醫藥，2012，19（1）：16-17.

[2]李盛青，劉明平.左金丸藥理與應用[J].時珍國醫國藥，2000，11（5）：471-472.

[3]田志勇，李振國.黃連研究新進展[J].時珍國醫國藥，2004，15（10）：704-706.

[4]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：285-286.

[5]王克英，方玲芬.酒黃連中小檗堿HPLC含量測定[J].中國中藥雜志，2007，32（22）：2443-2444.

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[7]曹玲，王志剛，王蓮芝.色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應用[J].中國當代醫藥，2012，19（1）：16-17.

[8]蔡巧玲，王瑩，袁瑾，等.半夏瀉心湯及不同配伍組對黃連生物堿大鼠體外肝代謝的影響[J].中成藥，2012，34（2）：212-216.

[9]侯藝輝，張貴君，徐蓓蕾.用鹽酸小檗堿作為黃連等中藥質量評價指標探討臨床用藥的安全性和有效性[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（18）：129-132.

UPLC simultaneous determ ination of berberine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Coptis

TAN Lei1，2，ZHAN Yan2，RUAN Jia2，XU Chao-qun2
（1.West China School of pharmacy，Sichuan University，Chengdu 610041，China；
2.Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu 610041，China）

A method was established for simultaneously determining berberine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Coptis by UPLC.The optimal conditions of separation and detection were achieved on an ACQUITY UPLC BEH-C18 column（2.1mm×50mm×1.7μm）eluted with a gradient acetonitrile and 0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution at a flow rate of 0.2mL/min，and detected at 350 nm.The results showed that there were good linear relationships（r=0.999 9）when the concentration of berberine hydrochloride and palmatine hydrochloride were in the range of 0.0372-0.2976μg/mL and 0.0082-0.0656μg/mL respectively，the recovery rates were more than 95%，and RSDs were less than 2%.This method was simple，rapid，accurate，and reproducible，and it can be used for determining the concentration of berberine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Coptis.

Coptis；berberine hydrochloride；palmatine hydrochloride；UPLC；

S567.5+2；TQ462+.12；R284.1；O657.31

A

1674-5124（2013）03-0054-03

2012-10-20；

：2012-12-18

譚鐳（1984-），男，四川成都市人，助理研究員，主要從事藥劑學研究工作。