氣相色譜法同時測定中藥糖漿劑中3種防腐劑含量*

趙培莉，吳靜明，張 毅，韓曉燕，吳麗平

防腐劑是能夠抑制微生物的生長和繁殖，防治保護對象腐敗變質的一類制劑，國家標準規定在食品和藥品中可以限量使用防腐劑。中藥液體制劑如糖漿劑、合劑、煎膏劑、口服液等，由于制劑方面的諸多原因及患者開瓶服藥可能造成的污染[1]，及其在平時貯存使用過程中，多次接觸外界，特別容易發霉變質，添加防腐劑是常見的防腐措施[2]。中國藥典2005年版對部分劑型中防腐劑的使用有部分規定，其中中藥糖漿劑的防腐劑含量檢測項目并沒有規定，僅規定最高限量，苯甲酸和山梨酸為0.3%，對羥基苯甲酸脂類為0.05%[3]。本文主要采用氣相色譜法（FID），建立了一種由樣品經甲醇萃取溶解及超聲提取，以鹽酸調節適當pH值，加入定量內標物，采用大口徑非極性毛細管色譜柱測定中藥合劑及糖漿劑中的3中常見防腐劑的檢測分析方法。

1 儀器與試藥

美國安捷倫公司GC-6820型氣相色譜儀、DB-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）大口徑非極性毛細管色譜柱、氫火焰離子化檢測器（FID）、GHL-500氫氣發生器、WYK-2型空氣壓縮機、Agilent Cerity QA-QC NDS化學工作站、超聲波清洗器、高速離心機等。

對苯二酚、山梨酸、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯均為分析純，甲醇為色譜純，檢測樣品隨機購買市售藥品，見表1。

表1 實際樣品品種及編號

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用美國Agilent公司的DB-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）大口徑非極性毛細管色譜柱，氫火焰離子化檢測器（FID），載氣：氮氣（純度≥99.999%），流量為25 mL/min；燃燒氣：氫氣（純度＞99.99%），流量為 30 mL/min，空氣流量 360 mL/min。進樣口溫度250℃，初始柱溫40℃，保持3 min后，以20℃/min升溫至200℃，保持2 min，檢測器溫度300℃；不分流進樣，進樣體積1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準溶液的配制 準確稱取對苯二酚、山梨酸、苯甲酸各0.10g，對羥基苯甲酸乙酯0.05g。將山梨酸、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯混合，用甲醇定容至50 mL容量瓶，作為標準溶液儲備液，質量濃度為山梨酸、苯甲酸各物質2g/L，對羥基苯甲酸乙酯質量濃度為1g/L；將對苯二酚用甲醇定容至50 mL容量瓶，作為內標液儲備液，質量濃度為2g/L。再用10 mL容量瓶定容稀釋標準溶液儲備液，同時每份加入對苯二酚內標液儲備液0.10 mL配制成含山梨酸、苯甲酸各物質質量濃度分別為10、20、30、50、100 μg/mL，含對羥基苯甲酸乙酯質量濃度分別為5、10、15、25、50 μg/mL 的混合標準品系列溶液（其中內標物對苯二酚濃度均為20 μg/mL）。

2.2.2 樣品溶液的前處理 稱取待測糖漿樣品1g左右置于10mL離心管中，加入5mL甲醇，用鹽酸酸化至pH2.5，混勻，超聲提取30min，然后以4 000r/min轉速離心15 min，將上清液轉置于25 mL容量瓶，加入對苯二酚內標儲備液0.25 mL，定容至25 mL，配制成含內標物對苯二酚質量濃度均為20 μg/mL的樣品待測溶液，備樣直接分析。

2.3 標準曲線的繪制 準確移取上述標準系列混合溶液，進樣1 μL，每一濃度重復測定3次，得到含3種防腐劑及內標物對苯二酚的氣相譜圖，利用內標物及各物質保留時間對各物質進行定性，以峰面積平均值為縱坐標，各物質濃度為橫坐標作標準曲線。得到3種防腐劑的工作曲線回歸方程、線性相關系數及線性范圍，見表2。

表2 3種防腐劑的工作曲線回歸方程和線性相關系數

2.4 精密度考察 取20和100 μg/mL的山梨酸、苯甲酸及10和50 μg/mL的對羥基苯甲酸乙酯的標準混合溶液1 μL樣品用上述氣相色譜條件進行分析，重復進樣6次，根據每次測定色譜峰面積，計算出所測得各防腐劑含量，并計算出相對標準偏差（RSD）。3種防腐劑高低兩種濃度其RSD為3.2%～3.9%，認為該方法有較好的精密度。結果見表3。

2.5 加樣回收率實驗 選取經過測定試樣中含有對羥基苯甲酸乙酯，山梨酸和苯甲酸兩種防腐劑低于檢出限的中藥糖漿劑樣品1.0g，各添加山梨酸、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯3種防腐劑標準品一定量，混勻，按照2.2.2節所述方法對樣品進行前處理，然后按照2.1所述檢測方法進行檢測分析，重復進樣3次，計算出回收率。測定結果表明，RSD分別為2.9%、3.0%、3.7%，回收率分別為95.4%、103.7%、97.8%，可以滿足常規分析方法的要求。見表4。

表3 中藥合劑及糖漿劑中3種防腐劑同時測定的氣相色譜法精密度實驗結果ng

表4 中藥合劑及糖漿劑中3種防腐劑加標回收率計算結果（n=3）

2.6 最低檢測限考察 對5個濃度的防腐劑標準品系列混合溶液進行分析，得到不同的色譜峰高和峰面積，以色譜峰高度是基線噪聲高度的3倍作為標準計算檢出限。山梨酸為1.2 μg/mL；苯甲酸為1.8 μg/mL；對羥基苯甲酸乙酯為 0.7 μg/mL。

2.7 樣品中防腐劑的含量測定 用上述色譜條件及實驗方法對以下6種中藥合劑及糖漿劑樣品（見表1）進行檢測分析，獲得結果，見表5。

表5 市售部分中藥合劑及糖漿劑中防腐劑的檢測結果

可見，樣品中所含防腐劑檢測出的種類和含量均符合現行國家藥品標準允許量。

3 討論

國內外有許多學者對食品中防腐劑山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸的檢測進行了研究，他們大都采用氣相色譜法和液相色譜法[4-9]。但這些方法操作復雜、時間長，不能適應食品藥品行業發展的需要[9]。

本實驗采用SE-54型高惰性交聯弱極性色譜柱（30 m×0.25 mm×0.32 μm）對 3種防腐劑標準品及內標物進行測試，結果顯示其能較好地分離各組分，但是拖尾比較嚴重。而采用DB-1型大口徑非極性毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）則較好地解決上述問題，同時還可以提高分析速度，減少固定相流失。氣相色譜法分析中柱溫的選擇和升溫程序設置是一個重要的因素。為縮短分析周期，并保證方法有較高的靈敏度和分離效果，對不同的初始柱溫進行了實驗，當初始柱溫在40～70℃時，單位進樣量峰高基本不變；當初始柱溫大于70℃時，甲醇峰高明顯降低。因此，選擇初始柱溫為40℃，保持3 min之后程序升溫，使樣品中山梨酸、苯甲酸色譜峰拖尾現象減少，并較好的分離了3種防腐劑。色譜峰通過對照保留時間、內標物的峰高及峰面積，并經過加標增加峰高的方法來定性，確保了該方法的準確性。

上述結果表明，該方法具有檢測時間短、消耗試劑少、前處理簡單、使用樣品量少、方法準確度高、重復性好及精密度高等優點，并可應用于合劑及糖漿劑的監測工作。

[1]李會軍，劉偉強.中藥液體制劑中防腐劑的應用[J].中國野生植物資源，2009，17（4）：46－48.

[2]江敏利，王春華.淺談防腐劑的功過是非[J].食品添加劑，2005，17（3）：12.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業出版社，2005：附錄8.

[4]何鳳云，顧衛東，朱子豐，等.毛細管氣相色譜法測定食品中的防腐劑[J].現代儀器，2008，14（2）：68－70.

[5]殷德榮.毛細管氣相色譜法同時測定食品中山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、尼泊金丙酯[J].中國衛生檢驗雜志，2004，14（4）：469－470.

[6]王莉麗，宋 宇.HPLC法快速測定軟飲料中苯甲酸、糖精鈉、山梨酸的含量[J].渤海大學學報（自然科學版），2007，28（2）：129－131.

[7]康紹英，張繼紅.二極管陣列—高效液相色譜同時檢測食品中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸[J].食品與機械，2007，23（5）：118－120.

[8]王詠梅，劉 愷，盧玉妹，等.毛細管區帶電泳法測定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精的含量[J].食品科技，2007，10（6）：227－229.

[9]李 林，汪書紅.3種食品防腐劑的氣相色譜法檢測研究[J].現代預防醫學，2009，36（17）：3343－3345.