使用茶油作為油鏡觀察媒介的研究

鄧毛子，包永芬，梁瑩，寧志豐

（1.湖北科技學院基礎醫(yī)學院醫(yī)學微生物學教研室，湖北咸寧 437100；2.湖北科技學院基礎醫(yī)學院病原學實驗室，湖北咸寧 437100；3.湖北科技學院基礎醫(yī)學實驗示范中心，湖北咸寧 437100）

油茶籽油為野山茶果提煉而成的食用油，別名山茶油、茶油。它主要含有油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，其脂肪酸含量、比例與橄欖油極為相似，素有“東方橄欖油”的稱號，甚至有些營養(yǎng)成分的指標還要高于橄欖油[1]。除了作為食用油使用的這一用途外，其還在醫(yī)藥、化妝品、化工等行業(yè)具有廣闊的市場前景[1-10]。在生物學、醫(yī)學實驗教學中，顯微鏡是一種最基本的教學儀器，在觀察細菌、原蟲等微小的生物標本時，需要用到油鏡，通常使用香柏油作為其觀察媒介，由于香柏油的價格較高，不易購買，且在使用的過程中因清洗劑的揮發(fā)而對環(huán)境造成污染，對使用者，尤其是對長期使用者的健康會造成不利影響，因此人們對現(xiàn)有的油鏡組成和使用進行改進，武連生、孫明山、趙春娥、唐開紅、魏納新等在油鏡觀察介質及清洗劑方面做出了一定的改進[11-15]。茶油在物理性狀方面與香柏油較為相近，其價格相對較低，且易于購買，因此對目前市場上常見的茶油進行了折光率的測定，并就標本在茶油介質中的鏡下觀察效果及其清洗劑等方面與香柏油進行了對比研究，以期找到另一種更為經(jīng)濟安全的能有效替代香柏油的油鏡觀察介質，進一步拓展茶油的實際用途。

1 材料與方法

1.1 材料

擦鏡紙；95%酒精；介質油A：香柏油；介質油B：金龍魚茶油；介質油C：金浩茶油；介質油D：高氏茶油；標本片；潔凈載玻片；竹簽；二甲苯；清洗劑A：立白洗潔精；清洗劑B：雕牌全效加濃洗潔精；清洗劑C：白貓洗潔精；清洗劑D：威猛先生廚房重油污凈；清洗劑E：綠傘油煙凈。

1.2 主要設備及儀器

2W/2WAJ阿貝折光儀：上海明茲精密儀器有限公司；奧林巴斯顯微成像系統(tǒng)（XPTW-50）；Eppendorf單道可調量程移液器。

1.3 檢測方法

1.3.1 介質油A及幾種茶油的折光率測定

按2W/2WAJ阿貝折光儀使用說明書進行。

1.3.2 幾種樣本在分別用介質油A、介質油B作為觀察介質的油鏡下的觀察效果對比觀察

按奧林巴斯顯微成像系統(tǒng)（XPTW-50）使用說明書進行。

1.3.3 介質油A、幾種茶油室溫下凝固干結時間測定

將介質油A以及不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分別滴于不同的潔凈載玻片上，置于25℃室溫下，每天以竹簽劃動及擦鏡紙擦拭的方式檢測其是否變稠凝固，并記錄其凝固干結時間。

1.3.4 不同清洗劑對凝固干結茶油的清洗效果觀察

1.3.4.1 不同品牌茶油玻片凝固干結物的制取

取不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分別滴于不同的潔凈載玻片上，置于25℃室溫下使其自然凝結。

1.3.4.2 不同清洗劑對凝固干結茶油的清洗效果觀察

向不同品牌的茶油在玻片上形成的凝固干結物中分別加入 50 μL 的二甲苯、清洗劑 A（原液，1 ∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 B（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 C（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 D（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 E（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液），觀察實驗現(xiàn)象，并每隔10 s用擦鏡紙擦拭，觀察其清洗效果。

2 結果

2.1 介質油A及幾種茶油的折光率測定結果

介質油A及幾種茶油的折光率測定結果，結果見表1。

2.2 幾種樣本在分別用介質油A、介質油B作為觀察介質的油鏡下的觀察效果對比觀察

幾種樣本在分別用介質油A、介質油B作為觀察介質的油鏡下的觀察效果對比觀察，結果見圖1～圖4。

表1 介質油A及幾種茶油的折光率Table 1 The refractive index of median oil A and several kinds of camellia oil

2.3 介質油A、幾種常見茶油室溫下凝固干結時間測定結果

圖1 大腸桿菌革蘭染色標本片鏡下觀（1×1 000）Fig.1 The observation results of Escherichia.coli gram stain specimen under oil immersion lens

圖2 金黃色葡萄球菌革蘭染色標本片鏡下觀（1×1 000）Fig.2 The observation results of Staphylococcus aureus gram stain specimen under oil immersion lens

圖3 鉤體鍍銀染色標本片鏡下觀（1×1 000）Fig.3 The observation results of Leptospira silvered stain specimen under oil immersion lens

介質油A在室溫下第2天液體變稠，擦拭時黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能完全清除，第3天完全凝固干結。3種品牌茶油保持易清除的液體狀態(tài)的時間均超過10 d，介質油B和介質油D為12d，介質油C為11d；介質油B和介質油D自第13天起，明顯變稠，用擦鏡紙擦拭時黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能有效從玻片上清除，介質油C自第12天起明顯變稠，用擦鏡紙擦拭時黏度大，易將擦鏡紙黏附在玻片上，用擦鏡紙不能有效從玻片上清除。上述三種品牌茶油均于第28天完全凝固干結。

圖4 青霉標本片鏡下觀（1×1 000）Fig.4 The observation results of Blue mould specimen under oil immersion lens

2.4 不同清洗劑對凝固干結茶油的清洗效果觀察結果

二甲苯作用10 s后，即能將凝固干結物完全溶解，用擦鏡紙能有效將其自玻片上清除。用清洗劑A（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 B（原液，1 ∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 C（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸餾水稀釋液）這三種清洗劑作用10 s后，干結物表面均出現(xiàn)白色乳化物，但用擦鏡紙不能有效將其自玻片上完全清除，仍有干結物存留（稀釋度越大，殘留越多），用擦鏡紙擦拭時玻片上黏度較大，延長作用時間至1 min，仍不能完全清除。用清洗劑 D（原液，1∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸餾水稀釋液）、清洗劑 E（原液，1 ∶2，1∶4，1∶8，1 ∶16倍蒸餾水稀釋液）清洗10 s后，其原液能使茶油干結物乳化，可有效將玻片上的干結物完全清除，用擦鏡紙擦拭，與未變稠的茶油一樣，無明顯黏度；其1∶2，1∶4稀釋液需作用至30 s后才能有效將玻片上的干結物完全清除，用擦鏡紙擦拭，與未變稠的茶油一樣，無明顯黏度；其1∶8，1∶16稀釋液，延長作用時間至1 min，仍有少許干結物殘留，不能完全清除。

3 結論與討論

茶油作為一種營養(yǎng)豐富的植物油，在中國很早就用作食用，有著豐富的營養(yǎng)價值。與介質油A同為油脂類，其物理學性狀較為相似，魏納新等發(fā)現(xiàn)常用色拉油可以作為介質油A的替代品[15]，與常用色拉油相似的茶油理應可以有效代替介質油A作為油鏡觀察媒介。本研究的結果表明，幾種不同品牌的茶油的折光率（介質油B、介質油D為1.467 0，介質油C為1.466 5）與介質油A（1.510 0）近似，標本片在介質油B介質下的鏡下觀察效果見圖1～圖4，其視野亮度較之介質油A下的視野亮度稍暗，但不影響標本片的有效觀察，其物像的分辨率與介質油A相當，對標本片中常見色彩的展現(xiàn)效果與介質油A無明顯差別（見圖1～圖4），因此其可有效代替介質油A作為油鏡觀察介質。同時常規(guī)的油鏡清洗劑為二甲苯，有的實驗室也使用酒精乙醚混合液（3∶2）作為清洗劑，二甲苯具有揮發(fā)性，易污染空氣，尤其是大量學生同時進行油鏡操作時，對實驗室的污染更加嚴重，其被吸入后不僅對人的神經(jīng)系統(tǒng)有損傷，還會對造血系統(tǒng)造成損害，此外乙醚和酒精的揮發(fā)也會影響神經(jīng)系統(tǒng)。使用茶油作為油鏡觀察介質，從本研究可以看出，與介質油A比較，其在室溫下保持較易清除的液體狀態(tài)的時間較介質油A更長，即使使用二甲苯進行清洗，也可減少二甲苯使用頻次，同時它也可用不易揮發(fā)的油污凈等日用油污清洗劑進行有效清洗，從而更為安全，但由于油污凈等清洗劑與二甲苯比較起來，不易揮發(fā)，因此在使用其作為油鏡清洗劑時，需用擦鏡紙多次擦拭鏡頭，減少清洗劑的少量殘留，以免殘留的清洗劑影響觀察效果。此外介質油A價格較貴（目前一般約為0.3元/mL～0.4元/mL），而常見食用茶油目前市場價格一般約為0.05元/mL～0.1元/mL，因此茶油成本更為低廉，且較介質油A更易購置。

綜上所述，食用茶油價格低廉、易于購買，其折光率及標本片的鏡下觀察效果與介質油A無明顯差別，且可用多種危害性較小且易于購置和保存的清洗劑進行清洗，對實驗室環(huán)境污染較少，可有效替代介質油A作為油鏡的觀察介質。本研究進一步拓展了茶油的實際用途。

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