隔山消化學成分的研究

陳 艷，徐必學，曹佩雪，賀祝英，梁光義*

1貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室，貴陽550007;2貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴陽550002

隔山消為蘿藦科牛皮消屬植物耳葉牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥塊根。產于湖南、南京、江蘇、浙江、江西、貴州、四川、云南等地。味甘，具有補肝腎，強筋骨，益精血，烏須發，消積止痛等功效。貴州的民間用來治療肚脹，消化不良等癥。對其生物活性多有報道，對其化合物研究多是對其甾體類化合物的研究，但對其它成分的研究報道較少［1］。本論文對隔山消化學成分進行了分離研究，從石油醚部分離得到7個化合物，分別為:胡蘿卜苷(daucosterol)，β-香樹脂醇乙酸酯(βamyrin acetate)，β-谷甾醇(β-sitosterol)。白首烏二苯酮(baishouwubenzophenone)，甘油-1-棕櫚酸酯(glycerol 1-monopalmitate)，東莨菪內酯(scopoletin)，齊墩果酸(oleanolic acid)。

1 儀器和材料

核磁共振數據用INOVA-400 MHz型超導核磁共振儀測定，TMS作內標;質譜數據用HP-5973型質譜儀測定;柱色譜用硅膠(200～300目)、硅膠H和薄層色譜用硅膠GF254均為青島海洋化工產品;Sephadex LH-20為Sigma產品。植物樣品采自貴州貴陽，經貴州省、貴陽中醫學院陳德媛教授鑒定為蘿藦科牛皮消屬植物耳葉牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥塊根。

2 提取與分離

隔山消干燥塊根50 kg，粉碎后依次用體積分數為95%、75%乙醇滲漉，合并濾液，濃縮得浸膏。浸膏加適量的水分散，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取并濃縮。得石油醚部分(161 g)，經硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯(10∶1 ～1∶1)，氯仿-甲醇(20∶1～1∶1)兩個系統梯度洗脫，收集得到15份。其中第1份(2 g)經硅膠柱層析，石油醚洗脫，得化合物1(30 mg);第6份(約8 g)經硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(30∶1～10∶1)梯度洗脫，得化合物2(400mg)。第8份(約8 g)經硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(20∶1～10∶1)梯度洗脫，再經凝膠柱色譜得化合物3(20 mg)，第9份約2 g，反復經硅膠柱層析，凝膠柱層析得化合物4(30 mg)。第10份約10g，反復經硅膠柱色譜，氯仿-甲醇(20∶1 ～5∶1)梯度洗脫得化合物5(30 mg)。第12份約10 g經硅膠柱層析，氯仿-甲醇(10∶1～5∶2)梯度洗脫得化合物6(1 g)。氯仿部分經硅膠柱層析，氯仿-甲醇(20∶1-10∶1)梯度洗脫，每500 mL收集一瓶，其中第111～112瓶中分離得到化合物7(10 mg)

3 結構鑒定

化合物1 白色的針晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293℃，易溶于石油醚、氯仿;碘蒸氣反應陽性，10%的硫酸乙醇液顯紫紅色。ESI-MSm/z:468(M+)，453，239，218(100)，203，189，175，161，135，119，85，71，57，43;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.80(3H，s，H-28)，0.87(12H，s，H-23，24，29，30)，0.97(3H，s，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，1.06(3H，s，H-27)，2.05(3H，s，COCH3)，4.51(1H，m，H-3)，5.12(1H，m，H-12)。根據以上理化性質及波譜數據，對照文獻［1］，鑒定化合物為 β-香樹脂醇乙酸酯(β-amyrin acetate)。

化合物2 白色針晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293 ℃。ESI-MSm/z:414(M+)，396，381，329，303，273，255，231，199，185，173，159，145，133，119，107，95，81，69，55，43(100)。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.678～ 1.01(6 × CH3)，3.49～3.56(1H，m，H-3)，5.35(1H，d，J=4.4 Hz，H-6)。與β-谷甾醇對照品經TLC檢測，用三種不同的展開系統展開，其Rf值均一致，綜合以上波普數據確定其結構為 β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物3 白色粉末(CHCl3/MeOH)。EI-MS m/z:456(M+，1)，248(100)，203(60)，189(30)，147(20)，133(50)，119，105，95，81，69;1H NMR(C5D5N)δ(ppm):0.91(3H，s，CH3)，0.97(3H，s，CH3)，1.03(3H，s，CH3)，1.05(6H，s，× 2CH3)，1.27(3H，s，CH3)，1.30(3H，s，CH3)，3.47(1H，m，H-3)，5.52(1H，s，H-12)。以上波譜數據與文獻［2］基本一致，且與對照品進行TLC檢測，結果Rf值一致，確定其結構為齊墩果酸。

化合物4 白色粉末(CHCl3)，EI-MSm/z:299，257，239，134，112，98，57，43(100);1H NMR(CDCl3，400 MHz):0.88(3H，t，J=6.8 Hz，CH3)，1.25(24H，brs，×12 CH2)，1.62(2H，m，H-3)，2.35(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，3.60(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-3)，3.94(1H，m，H-2)，4.15(1H，dd，J=11.6，6.0 Hz，H-1)，4.20(1H，dd，J=11.6，4.8 Hz，H-1)。綜合解析波譜數據并與文獻對照［3］，確定該化合物為甘油-1-棕櫚酸酯(glycerol 1-monopalmitate)。

化合物5 淡黃色針晶(CHCl3)，mp 200～202℃。易溶于氯仿、丙酮等有機溶劑，紫外燈254 nm下有暗斑，FeCl3溶液顯紅棕色，碘反應陽性。IR(KBr)cm-1:3488，3374，2925，1662，1608，1499，1455，1427，1370，1353，1311，1159，1050，893，805。ESI-MSm/z:302(M+)，284，269，266，256，245，227，171，147，137，127，137，115，105，95，77，55，43(100);1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):2.40(3H，s，10-CH3)，2.78(3H，s，9-CH3)，6.80(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-4')，7.25(1H，d，J=9.2 Hz，H-3')，7.63(1H，d，J=8.8 Hz，H-4)。以上波譜數據與理化性質與文獻4］基本一致，確定其結構為白首烏二苯酮(baishouwubenzophenone)。

化合物6 白色粉末(CHCl3/MeOH)。ESI-MS m/z:414(M+-Glc)，396(100)，382，288，275，255，213，163，145，109，95，69，57，43(100);1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ(ppm):0.67 ～ 0.98(s，6 ×CH3)，3.92 ～3.97(1H，m，H-3)，4.05(1H，m，Glc-H-2)，4.30(2H，m，Glc-H-3，Glc-H-4)，4.41(1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，Glc-H-6)，4.56(1H，dd，J=11.6，2.0 Hz，Glc-H-6)，5.05(1H，d，J=8.0 Hz，Glc-H-1)，5.34(1H，m，H-6)。與胡蘿卜苷對照品Rf值一致，以上波譜數據與文獻［5］基本一致，確定其為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物7 淺黃色針晶(Me2CO)，易溶于丙酮、氯仿;在365 nm下有很強的藍色熒光，碘蒸氣反應陽性，2%的磷鉬酸乙醇液不顯色。ESI-MSm/z:192(M+，100)，177，164，149，121，107，79，69，51;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):7.61(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.92(1H，s，H-5)，6.85(1H，s，H-8)，6.27(1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，6.23(1H，s，7-OH)，3.96(3H，s，-OCH3)，13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ(ppm):161.5(C-2)，107.4(C-3)，143.4(C-4)，113.3(C-5)，144.0(C-6)，150.2(C-7)，103.1(C-8)，149.7(C-9)，111.5(C-10)，56.4(-OCH3)。以上理化性質和波譜數據與文獻［6］一致，確定其結構為東莨菪內酯(scopoletin)。

4 討論

本文主要對該植物進行了化學成分的研究，這是首次對貴州產的隔山消進行化學成分的研究。本研究為制定該植物的質量標準打下一定基礎。

致謝:核磁和質譜數據分別由貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室張建新副研究員和王道平老師測定。

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