糖尿病腎病早期測定同型半胱氨酸和高敏C反應蛋白的價值

陳 雨

（黑龍江省雞西市人民醫院輸血科 黑龍江 雞西 158100）

糖尿病腎臟病變包括感染性病變和血管性病變，感染性病變有腎盂腎炎和腎乳頭壞死。血管性病變分微血管和大血管病變，大血管病變包括腎動脈硬化和腎小動脈硬化。微血管病變是指腎小球硬化，分結節性、滲出性和彌漫性三種，三者可單獨可合并存在，上述改變中，最典型的是結節性腎小球硬化。我們通常說的糖尿病腎病是腎小球硬化。因此，早期診斷和腎臟微血管病變的判斷對于糖尿病腎病的治療具有重要意義。本文以尿蛋白／血肌酐值作為判斷糖尿病患者腎臟微血管病變情況的標準，分析血清同型半胱氨酸（Hcy）和高敏C反應蛋白（hs－CRP）水平在糖尿病腎病早期診斷中的價值。

1 一般資料

選擇2009年1月－2012年5月間我院住院糖尿病腎病患者58例病歷資料，男38例，女20例，年齡48－76歲，選擇同期在我院體檢健康人最為對照組。患者生命體征：腎小球濾過率增高，為最早出現的功能性改變；蛋白尿是糖尿病腎病最主要的表現；約10%%糖尿病腎病在病程的某一階段表現為腎病綜合征，尿蛋白＞3g／／24h，血清白蛋白降低，浮腫，高膽固醇血癥；明顯高血壓是糖尿病腎病晚期的表現；臨床糖尿病腎病多發生在糖尿病病程15年之后，一旦出現明顯蛋白尿，腎小球濾過率就逐步而恒定地下降，平均每月下降約lml／／min，進入終末期腎功能不全。

2 檢測方法

患者采血時間皆選在入院后第二日清晨，空腹12h于肘部取靜脈血5ml加入含有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）的試管中；對照組空腹12h于肘部取靜脈血5ml加入含有EDTA－K2的試管中。將上述含有抗凝血液樣品的試管分別以3 000r／min離心10min，靜置后取上層血清，稀釋10倍作待測樣品備用。ELISA法測定血清Hcy水平：試劑盒內標準品濃度為200μmol／L，按2倍比系列稀釋，稀釋后濃度為100，50，25，12.5，6.25，3.125μmol／L。設置一個空白孔加入待測樣品100μl，立刻加入終止液100μl，終止反應。取7種標準品和待測樣品各100μl加入酶標板反應孔底部，混勻、加蓋后于37℃下溫育120min；棄液，在酶標板反應孔底部加入100μl生物素標記抗體工作液，混勻、加蓋后于37℃溫育60min；棄液后洗板5次，向酶標板反應孔底部加入100μl辣根過氧化物酶標記親和素工作液，混勻、加蓋后于37℃溫育60min。棄液后洗板5次，在酶標板反應孔底部加入100μl TMB溶液，混勻、加蓋后于37℃溫育30min，加入50μl終止液終止反應。用酶標儀測出各孔在450nm處OD值，以標準品測定OD值繪制標準曲線，計算樣品血清Hcy水平。血清hs－CRP水平測定：采用ELISA法測定，詳細操作步驟參考血清Hcy水平測定。

3 結果

經過測定表明：糖尿病腎病患者血清Hcy和hs－CRP水平與患者性別、病程、體重指數、心血管疾病、抗生素使用情況有關；尿蛋白正常組、微量蛋白尿組和大量蛋白尿組血清同型半胱氨酸和高敏C反應蛋白都顯著高于健康人組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。大量蛋白尿組血清同型半胱氨酸和高敏C反應蛋白濃度都顯著高于微量蛋白尿組和尿蛋白正常組，微量蛋白尿組血清Hcy水平顯著高于尿蛋白正常組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。

4 討論

引起血清同型半胱氨酸升高的主要原因有遺傳和環境營養兩種因素：遺傳因素主要是一種命名為N5甲基四氫葉酸轉甲基酶及胱硫醚－β－合成酶的基因發生突變，引起酶的活性降低，從而導致同型半胱氨酸血癥。現在已經證明N5甲基四氫葉酸轉甲基酶的缺陷，在體內葉酸缺乏的情況下，可以引起同型半胱氨酸濃度的明顯升高。由遺傳缺陷引起的胱硫醚－β－合成酶的活性降低，可導致血漿中同型半胱氨酸的濃度超過正常值的十倍左右。環境營養因素指代謝輔助因子如葉酸、維生素B6、B12缺乏，這些因子在同型半胱氨酸代謝反應中為必需因子，均可導致高同型半胱氨酸血癥的發生。hs－CRP是一種由肝細胞合成和分泌的非糖基化聚合蛋白，作為一種急性損傷、感染或炎癥刺激的急性時相反應蛋白，hs－CRP是一種非特異性的炎癥血清生物標記因子。Jamaluddin MS等［1］在一個9年的前瞻性隨訪研究中，對328例糖尿病腎病患者的尿蛋白排泄率和血清hs－CRP水平進行了監測，發現二者具有相關性，進而提出糖尿病腎病是hs－CRP參與介導的長期慢性炎癥反應病理過程的理論。因此，推斷血清hs－CRP水平對于老年糖尿病早期腎臟微血管病變程度診斷的敏感性低于Hcy。分析認為可能與hs－CRP作為一種非特異性炎癥標記因子有關，老年患者本身具有多方面的致使血清hs－CRP水平升高的因素存在，如高齡、長期抽煙、感染、合并心血管疾病等，這些使得血清hs－CRP在判斷早期糖尿病腎臟微血管病變程度方面敏感性下降。因此，老年患者的血清hs－CRP水平升高與其病程、吸煙情況、體重指數、合并心血管疾病情況等密切相關。總之，血清同型半胱氨酸是人體內含硫氨基酸的一個重要的代謝中間產物，評價心腦血管風險的指標，價值等同于血糖、血脂、血壓，可能是動脈粥樣硬化等心血管疾病發病的一個獨立危險因子；血清同型半胱氨酸和高敏C反應蛋白水平與老年糖尿病腎病的發生和發展密切相關，二者檢測將有助于進一步了解糖尿病腎病患者的發病機制，并對糖尿病的診治提供新的線索。

［1］Jamaluddin MS，Yang X，Wang H.Hyperhomocysteinemia，DNA methylation and vascular disease〔J〕.Clin Chem Lab Med，2009；18：60