三酰甘油對酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒螺旋體抗體的影響

張光永，許 艷（四川省宜賓市中心血站 644000）

梅毒是由蒼白密螺旋體引起的一種性傳播疾病，具有較強的傳染性。梅毒螺旋體（TP）對人的黏膜及皮膚有很強的親和性，主要通過性接觸傳播，輸血也是重要傳播途徑，為我國無償獻血必查血清學項目。近年來，無償獻血者中感染梅毒的情況愈來愈多，給輸血安全帶來了嚴重挑戰。目前國內血站最常用的TP檢測方法為TP-酶聯免疫吸附試驗（ELISA），該方法簡單快速、靈敏度高、特異性好，適合于儀器自動化大批量血液樣本檢測。但ELISA影響因素多，標本中內源性干擾因素（包括類風濕因子、補體、高濃度非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等）和外源性干擾因素（如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全等）均會導致檢測結果的假陽性［1］。國內對導致假陽性的干擾因素探討較多，容易忽略導致假陰性的干擾因素。無償獻血檢測的樣本是在采集血液時同步留取，血液采集時間跨度較大，采集到脂血樣本的現象較嚴重。本研究隨機收集不同滴度的TP抗體陽性樣本，以蒸餾水和不同濃度乳糜血漿做稀釋，探討三酰甘油（TG）對ELISA檢測TP抗體的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集經TP-ELISA檢測的高、中和低滴度TP抗體陽性的無償獻血者血漿樣本各1例，TG在正常參考值范圍，陽性樣本均經過梅毒螺旋體明膠凝聚試驗（TPPA）確認；同時隨機收集TP抗體陰性且TG濃度為高、中、低不同的脂血漿各1份，TPPA確認陰性。

1.2 試劑與儀器 以北京萬泰生物藥業股份有限公司TPELISA二步法檢測試劑盒，瑞士TECAN公司RSP150型全自動樣品處理系統，瑞士哈美頓公司FAME24／20全自動酶免儀進行TP檢測，操作步驟和結果判讀按說明書要求進行。以日本東芝公司TBA40-FRAccute全自動生化分析儀及配套試劑檢測TG。

1.3 方法 將收集的3例TP抗體陽性樣本用蒸餾水做1∶10倍稀釋，作為實驗對照組，同時將3例TP抗體陽性樣本均用3份不同TG濃度的脂血漿做1∶10倍稀釋，為高、中、低濃度TG實驗組。對照組和實驗組樣本進行TP抗體和TG檢測，每例樣本平行檢測5次，記錄A值和TG濃度。TP抗體檢測陰性對照A值的均值為0.006，樣本A值大于或等于0.186為陽性；TG正常參考值范圍為0.40～1.69mmol／L。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行數據統計學分析；計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

用不同TG濃度的脂血漿10倍稀釋樣本后與相應對照組相比，實驗組樣本TP抗體的A值均降低，不同滴度TP抗體陽性樣本各實驗組A值與相應對照組之間的差異有統計學意義（P＜0.05），高、中滴度TP抗體陽性樣本實驗組之間A值差異無統計學意義（P＞0.05），低滴度TP抗體弱陽性樣本實驗組之間A值差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組和實驗組TP-ELISA檢測A值結果見表1。高、中滴度TP抗體陽性樣本實驗組定性判讀結果與對照組一致，均為陽性；低滴度TP抗體弱陽性樣本實驗組定性判讀結果與對照組不一致，對照組為陽性，低滴度TP抗體弱陽性樣本定性結果為陰性，見表1。

表1 對照組和實驗檢測A值和TP定性判讀結果

3 討 論

從1998年起我國實行無償獻血制度，血液全部來源于健康公民自愿無償獻血，為了滿足臨床用血需求，血站加大采血力度，延長流動采血車街頭采血時間，獻血者也方便在街頭流動獻血車參加獻血。流動采血由于條件限制只能操作簡單快速的篩查，采集前未能進行TG檢測，采集到高脂血液比例在增加，脂血離心后血漿呈明顯乳白色渾濁不透明，嚴重影響血液檢測和血液質量，主要的影響物質就是內源性TG。

近年來，我國各地獻血者梅毒陽性率的報道均呈逐年上升趨勢［2-3］。據衛生部發布的全國法定傳染病疫情概況，最近幾年梅毒一直是處在報告發病數第3位。血液在4℃條件儲存24～72hTP失去活性，經輸血感染的危險性小，但由于濃縮血小板等儲存時間短，要求在24h內輸注，儲存條件也不是4℃，輸入含有TP的此類血液可導致TP的感染，我國規定獻血者必須進行TP檢測。TP常用的檢測方法有非特異性的方法包括快速血漿反應素環狀卡片試驗和甲苯胺紅不加熱血清反應素試驗，特異性的方法包括TP血球凝集試驗、TPPA和ELISA［4］。ELISA具有敏感性高、特異性強、操作簡單、便于自動化檢測以及標本量大等優點，非常適合血站對血液的篩查［5-6］。

本實驗結果表明，高濃度TG明顯影響ELISA檢測TP抗體，與對照組相比，實驗組TP抗體的A值明顯降低，其差異有統計學意義（P＜0.05）。高、中滴度TP抗體陽性樣本實驗組之間A值差異無統計學意義，高濃度TG對高、中滴度陽性樣本TP抗體檢測有影響，但A值并不隨TG濃度的增加而顯著下降。高、中滴度TP抗體陽性樣本實驗組定性判讀均為陽性，與對照組一致。低滴度TP抗體弱陽性樣本實驗組之間A值差異有統計學意義（P＜0.05），隨著TG濃度的增加A值顯著下降，定性判讀對照組結果為陽性，實驗組結果為假陰性，且TG濃度越高對TP抗體的A值和定性判讀影響越大。

脂濁血漿樣本為渾濁外觀，血漿黏度加大，主要為含有大量TG的脂蛋白引起。含有大量TG的脂蛋白體積比TP抗體大，在孵育過程中具有屏蔽效應，阻礙了TP抗體與固相的充分結合，從而導致A值降低，弱陽性樣本甚至出現假陰性結果。振蕩孵育加速了反應杯中物質的運動，有利于梅毒抗體和固相的結合，能夠提高檢測靈敏度，但是現在缺乏專用的設備和標準。為了加強血液質量，防止經輸血傳染疾病，我國部分血站已采取核酸聯合檢測輸血傳染病指標，核酸檢測不受脂血、溶血等影響，但由于投入高，對人員和試驗條件要求嚴格，在基層血站還不能很快推廣，也有報道核酸檢測不適合梅毒的血清學診斷［7-8］，我國血站主要還是采用ELISA檢測梅毒。

健康成人空腹12～14h后TG就恢復正常，無償獻血者均要求為健康成人。TG是血漿中固有的成分，不能完全從血液中清除，只要控制在正常水平就不會影響血液檢測。健康成人最好的控制方式就是注意飲食的合理搭配，減少高脂高蛋白過量攝入。全國采供血機構應該加大無償獻血宣傳力度，獻血者減少獻血前高脂高蛋白的攝入，做好固定定時獻血準備，減少高脂高蛋白餐后街頭流動不規則獻血，增加定期獻血，有利于減少脂血比例。

［1］李金明.感染性疾病血清學檢測中應重視對弱反應性標本的確認［J］.中華檢驗醫學雜志，2006，29（7）：577-580.

［2］劉天堯，杜艷麗，鄭偉.哈爾濱地區285 052名獻血者梅毒感染情況調查［J］.中國輸血雜志，2008，21（11）：877-878.

［3］黃臘梅.巴中市2006～2007年無償獻血者血液檢測結果分析［J］.檢驗醫學與臨床，2008，5（16）：969-970.

［4］蒙在楊.梅毒檢測技術進展［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（21）：2627-2628.

［5］歐陽玲，謝秀華，黃守民，等.幾種梅毒螺旋體檢測方法在獻血者血液篩查中的效果評價［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7（4）：312-313，315.

［6］阮光強，陳衛.梅毒檢測方法的比較分析［J］.檢驗醫學與臨床，2011，08（20）：2470-2471.

［7］王珍光，郭建巍，馬驄，等.梅毒檢測方法的臨床應用研究［J］.現代檢驗醫學雜志，2011，26（1）：152-155.

［8］鄭王平，張杰，嚴佳斌.梅毒螺旋體抗體篩查及其臨床意義［J］.臨床和實驗醫學雜志，2012，11（23）：1878-1879.