周圍型肺癌HRCT征象與骨橋蛋白水平的相關性研究

李春平，李 睿，郭丹丹

(川北醫學院附屬醫院放射科，四川南充 637000)

肺癌骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種約為32.5 kDa蛋白鏈，多達28個磷酸化位點及一個蛋白裂的多功能蛋白，OPN可與CD44v6和整聯蛋白結合介導一些信號轉通道來控制細胞骨架重塑、細胞存活、增生和浸潤等過程。Boldrinil等［1］不同方法研究中，OPN在不同肺癌中分布是不一致的。Schneider等［2］認為增高的OPN表達是一期非小細胞癌患者生存率預后不良的主要原因。肺癌患者癌組織內OPN的含量與腫瘤的影像學分期有無關系未見文獻報道。為了能更好的確定不同類型周圍型肺癌的OPN值的表達是否有差異以及肺癌患者癌組織內OPN與腫瘤的影像分期的關系，我們進行了相關的研究。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2008年3月至2011年3月經皮CT穿刺活檢并經病理確診的肺癌組織標本143例，年齡32 ～76歲，平均年齡(56.53±10.95)歲，其中男性85例，女性58例。

1.2 研究方法

1.2.1 活檢方法 采用TOSHIBA Xivision CT機，利用機架掃描光標在皮膚上標出穿刺點。測量穿刺點與病變的直線距離、進針深度和角度，使用巴德穿刺針穿刺，從不同方向切割組織1～2條，將標本固定送組織學檢查，選其肺癌陽性的病例做免疫組化檢查。

1.2.2 病理檢查 病理標本為病灶中央取材，常規4%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續切片厚約4 μm。采用SP免疫組織化學檢測OPN的表達。鼠抗人OPN單克隆抗體(邁新生物科技公司)，免疫組織化學染色試劑盒(邁新生物科技公司)。

1.2.3 抗原修復 采用檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓抗原修復法。石蠟切片脫蠟、水化后放入盛有檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)的容器中，高壓加熱1～2 min后，室溫冷卻。切片先用蒸餾水沖洗2次，過氧化酶阻滯劑50 mL 10 min，PBS沖洗。

1.2.4 免疫組化步驟 一抗(OPN 1∶50)(Santa-Cruz)4℃過夜，PBS沖洗3次;生物素化一抗加辣根過氧化物酶標記的親和素(1∶50)，室溫溫育1 h，PBS沖洗3次;非生物素化一抗加兔Envinsion試劑(Dako)，室溫溫育30 min，PBS沖洗3次;DAB(華美生物工程公司)顯色，顯微鏡下觀察5～10 min，在顯色最佳時用PBS沖洗，終止顯色;蘇木素復染細胞核，水洗，藍化，脫水，中性樹膠封片。

1.2.5 OPN陽性反應 采用雙盲法觀察，用低倍鏡和高倍鏡觀察切片。判斷標準:每張切片隨機選取5個高倍視野，每個視野計數100個細胞觀察陽性細胞染色強度，計數陽性細胞百分數。按著色細胞百分數計分:著色細胞＜10%為0分，10% ～40%為1分，40% ～70%為2分，≥70%為3分。按著色強度計分:無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分。將著色細胞百分數計分與著色強度計分相乘作為總計分。總計分為0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+)，4分以上為強陽性(+﹢)。統計時以(-)判定為陰性，(+)和(++)判定為陽性。

1.3 統計學分析

所有統計學分析采用SPSS11.5軟件進行。采用配對檢驗比較鱗癌與腺癌的OPN表達;利用方差分析比較分葉征、胸膜凹陷征、血管支氣管集束、胸膜浸潤等CT征像與OPN表達的陽性強度。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 OPN的表達情況及其相關性

OPN在肺癌組織中有較強的陽性表達率。陽性染色主要位于細胞膜上，胞漿中亦有少量表達。陽性染色呈棕色。143例肺癌標本，其中鱗癌83例(圖1)，腺癌60例(圖2)。肺癌組織中OPN的表達與腫瘤的分化程度和臨床分期相關(P＜0.05)，而與病理組織類型無關(P＞0.05)，見表1。

表1 肺癌OPN表達與臨床病理的關系

2.2 OPN的高表達與年齡、性別、腫塊大小的關系

143例患者中年齡小于50歲的30例，大于50歲的113例，年齡比較P=0.373(P＞0.05)，差異無統計學意義。男性85例，女性58例，性別比較P=0.923(P＞0.05)，差異無統計學意義。腫塊小于3 cm者62例，腫塊大于3 cm者81例，腫塊大小比較P=0.468(P＞0.05)，差異無統計學意義。

2.3 OPN的高表達與CT特征性的關系

分葉征與無分葉征比較P=0.036(P＜0.05)，OPN有較強的陽性表達(圖3、圖4)。胸膜凹陷征與無胸膜凹陷征比較P=0.000(P＜0.05)，胸膜凹陷征病例，在肺癌組織免疫標本中，OPN有強陽性表達(圖5、圖6)。血管支氣管集中征與無血管支氣管集中征比較P=0.001(P＜0.05)。結果表明肺癌影像特征表現與OPN表達差異有統計學意義，結果見表2。

表2 OPN的表達與CT特征性的聯系

2.4 OPN的表達與肺癌淋巴結轉移的關系

143例肺癌患者中有淋巴結轉移120例 (ⅡA:T1N1M012例;ⅡB:T2N1M013例，T3N0M021例，ⅢA:T3N1M014例，T1-3N2M020例;ⅢB:T4N0-2M05例，T1-4N3M05 例，Ⅳ:任何 T，任何 N，M130 例)，無轉移23例，120例已發生淋巴結轉移的肺癌組織中，OPN的陽性表達為(120/120)。OPN的表達與肺癌轉移有明顯一致性，見表3。

表3 肺癌OPN表達與肺癌淋巴結轉移的關系

2.5 OPN的表達與腫瘤臨床分期的關系

OPN的表達與肺癌轉移有一致性，隨著肺癌TNM分期的增加，P=0.000(P＜0.05)，差異有統計學意義。其中肺癌轉移至頭部9例，轉移至肝臟7例，轉移至肋骨6例，轉移至胸腰椎1例，OPN的表達量明顯增加，OPN的表達與肺癌TNM分期差異有統計學意義，見表4。

表4 OPN的表達與腫瘤臨床分期的關系

3 討論

腫瘤的影像學表現在本質上是由分子生物學因素所決定的宏觀病理形態改變的具體體現［3-4］，所以通過特定CT征象的形態學改變可以在某種程度上反映腫瘤的生物學信息，如惡性程度、侵襲轉移潛能等。研究發現，肺癌的影像學表現與分子生物學因素之間存在不同程度的聯系［5-6］，分葉征是瘤體向各部位生長速度不同、以及與周圍結構的制約等因素有關，深分葉征在肺癌中具有重要的診斷價值［7-8］。毛刺征是由于癌組織向鄰近肺實質延伸和浸潤的結果。本組試驗顯示具有深分葉征、毛刺征的肺癌OPN呈明顯的高表達，其原因可能由于OPN高表達使腫瘤細胞之間的黏附力降低，并且釋放蛋白酶降解細胞外基質，破壞基底膜從而使腫瘤細胞更易于向周圍浸潤性生長［9-10］。分葉征、毛刺征的肺癌有更高的侵襲轉移潛力，惡性程度更高，預后更差。胸膜侵犯和縱隔淋巴結轉移使腫瘤TNM分期增高，手術完全切除的難度增加，從而降低患者的生存率。本組試驗顯示腫瘤侵犯胸膜和縱隔淋巴結大時OPN表達明顯增高，與肺癌的侵襲轉移相關。本組實驗還顯示胸膜凹陷征、血管支氣管集束征、胸膜浸潤征的出現與OPN相關，表明此征與肺癌的惡性程度、侵襲轉移能力關系顯著(P＜0.05)。研究還顯示OPN蛋白的異常表達與患者年齡、性別、腫瘤的大小無明顯相關性(P＞0.05)，肺癌在CT影像TNM分期與骨橋蛋白成正相關。隨著肺癌TNM分期的增加骨橋蛋白表達更明顯，可能由于不同的生物學因素在腫瘤的不同階段所起的作用不同，所以聯合檢測多種基因更有利于客觀全面的評價腫瘤的惡性生物學行為，評估預后。通過研究骨橋蛋白與肺癌在CT影像分期的聯系，經穿刺取得病理學依據的肺癌患者，對其CT影像征象進行分期，通過對肺癌組織內骨橋蛋白與CT肺癌TNM分期相關性研究，從微觀與宏觀角度為肺癌早期診斷和預后提供方案。OPN參與了肺癌的發生、發展和轉移，TNM分期越高OPN表達越明顯，OPN可作為臨床TNM分期的主要生化指標，可作為判斷肺癌患者的預后及術后復發的參考指標，為臨床病人的治療提供更好的依據。

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