HPLC法測定生脈顆粒(黨參方)中五味子醇甲的含量

曹 陽，楊 眉，劉 燕，雷果平，李 敏，張 燕

(1.南充市食品藥品檢驗所，四川南充 637000;2.成都中醫藥大學藥學院，四川成都 611137;3.川北醫學院第二臨床醫院，南充市中心醫院中藥房，四川南充 637000)

生脈顆粒［1］(黨參方)是以黨參、麥冬、五味子三味中藥加工制成的復方中藥制劑，具有益氣復脈，養陰生津的功效。用以治療氣陰兩傷，心悸氣短，脈微虛汗病癥。本產品收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十一冊，沒有進行含量測定。本文采用HPLC法［2］測定本產品中主藥之一五味子中五味子醇甲的含量，方法簡單可靠，重現性好。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters2695型高效液相色譜儀;TU1901型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);電子天平(賽多利斯CP225D)。五味子醇甲對照品(中國藥品生物制品檢定所提供);水為超純水(自制);甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

1.2 對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲對照品10.20 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。制成每1 mL含0.2 mg的溶液，搖勻，即得。

1.3 五味子醇甲檢測波長的確定［3-4］

取五味子醇甲對照品溶液(10.20 mg定容于50 mL甲醇中)，在波長200～400 nm的范圍內作紫外光譜掃描，根據掃描結果及峰谷檢測值分析，選擇最大吸收波長250 nm作為檢測波長(圖1及表1)。

表1 五味子醇甲紫外光譜掃描峰谷檢測值

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取研細的樣品約0.5 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率150 W，頻率20 kHz)30 min，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1.5 色譜條件及系統適應性

1.5.1 色譜條件 色譜柱為十八烷基鍵合硅膠(Thermo BDS HYPERRSIL C18 250×4.6(Part28105-254630));流動相:甲醇-水(60∶40)，流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:250 nm;理論板數按五味子醇甲峰計算不低于2 000。

1.5.2 系統適應性試驗色譜圖 圖2為對照品五味子醇甲高效液相色譜圖;圖3為樣品五味子醇甲高效液相色譜圖;圖4為對照品與樣品五味子醇甲高效液相色譜重疊圖。可見保留時間為10.551 min處的五味子醇甲峰。

2 結果

2.1 線性關系考察結果

精密吸取1.2對照品溶液1 mL置于10 mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10.0 μL，8.0 μL，6.0 μL，4.0 μL，2.0 μL，1.0 μL 測定峰面積。以五味子醇甲的進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果五味子醇甲的回歸方程為:Y=2 000 000X-7 931.8(r=0.999 9，n=6)。結果表明，五味子醇甲進樣量在0.05～0.2 μg的范圍內與色譜峰面積呈良好線性關系，見圖5。

2.2 精密度試驗結果

取2.1項下的對照品溶液，重復進樣8次，測定五味子醇甲峰面積，并計算其相對標準偏差，結果RSD=1.1%(n=8)，表明儀器精密度良好(表2)。

表2 儀器精密度考察

2.3 重現性試驗結果

對同一批樣品重復取樣6次，按1.4供試品溶液的制備方法處理后按前述色譜條件測定五味子醇甲的峰面積，結果RSD=1.0%(n=6)，見表3。

表3 生脈顆粒重現性考察

2.4 回收率試驗結果

精密吸取1.2對照品溶液1 mL置于10 mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為已知含量的溶液。精密稱定6份已知五味子醇甲含量的生脈顆粒樣品，每份約0.5 g，置25 mL量瓶中。分別加入已知含量的溶液3 mL(含五味子醇甲為0.061 2 mg)，按1.4供試品溶液的制備方法操作，得加樣溶液，分別吸取10 μL進樣測定峰面積，結果見表4。

表4 五味子醇甲回收率考察

2.5 樣品測定結果

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀。測定峰面積，計算即得。測定4批樣品，結果見表5。

表5 樣品測定

3 討論

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實，含多種木酯素類成分，主要有五味子素(schizandrin)、去氧五味子素(de-oxyschizandrin)、新一味子素(neoschizan-drin)、五味子醇(schizan-drol)、五味子酯(schisantherin，gomisin)等。活性成分為五味子醇甲，故選用五味子醇甲為含量測定指標。從紫外光譜掃描圖譜中選取干擾性小的主峰即λ=250 nm為HPLC測定波長。

五味子醇甲可溶于甲醇，而其他成分較少溶解，因此可用甲醇來提取樣品，提取方法無需復雜的預處理，簡化實驗的操作過程。選用具有低粘度、與檢測器兼容性好、低毒性的甲醇與水進行試驗，得到液相色譜的分離結果，然后根據出峰情況調整甲醇的比例。調整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。直至各組的分離情況不再改變。最終確定流動相為甲醇-水(60∶40)。

本方法準確、快速、簡便、重現性好，可作為該產品中五味子醇甲的含量測定方法。

［1］ 中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準［S］.北京:中藥成方制劑第十一冊，1996.46

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.61

［3］ 張玉潔，黃海欣.生脈飲(黨參方)質量標準研究［J］.中國藥師，2005，8(7):37-39

［4］ 張朝民，黃海欣，張玉潔.五味子糖漿質量標準研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2005，11(6):18-19