非小細(xì)胞肺癌組織中ERCC1和RRM1表達(dá)與抗腫瘤治療的療效及預(yù)后關(guān)系

李竟長(zhǎng),倪秉強(qiáng),陳日新,朱 州

(廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院腫瘤科,廣西柳州,545006)

重組人血管內(nèi)皮抑制素(恩度)為中國(guó)自主研發(fā)的血管生成抑制劑,可特異性作用于內(nèi)皮細(xì)胞,尤其是抑制微血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移,誘導(dǎo)凋亡。恩度聯(lián)合化療已經(jīng)被美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)推薦為晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的一線用藥[1]。分子生物學(xué)角度研究[2]證實(shí),影響細(xì)胞DNA合成、修復(fù)的相關(guān)基因與化療敏感性相關(guān)。核苷酸還原酶亞單位M1(RRM1)和核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)是影響NSCLC治療效果及預(yù)后的耐藥性基因。本研究旨在探討NSCLC組織中ERCC1和RRM1表達(dá)與恩度聯(lián)合吉西他濱/奈達(dá)鉑療效及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

選取2007年1月—2011年3月在本院經(jīng)組織學(xué)確診的ⅢB和進(jìn)展期NSCLC患者51例,其中男38例,女 13例,年齡 42～84歲,中位年齡60.4歲,體力活動(dòng)狀態(tài)評(píng)分(PS評(píng)分)0～2分。取患者組織標(biāo)本,入選標(biāo)準(zhǔn):每例患者至少有1個(gè)可測(cè)量的病灶,且化療前未接受其他藥物治療。

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ERCC1和RRM1在病理標(biāo)本中的表達(dá):蠟塊標(biāo)本連續(xù)切成4 cm厚切片 4張,常規(guī)脫蠟、水化后,磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH=7.4)沖洗 ,以3%H2O250μ L孵育10 min,PBS沖洗2 min×3次,蒸餾水沖洗3次,正常山羊血清封閉,室溫孵育10 min后:其中2張滴加1∶50稀釋的鼠抗人 ERCC1單克隆抗體,另外2張滴加 50 μ L的鼠抗人 RRM1一抗,室溫下孵育10 min,PBS沖洗2 min×3次,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,乙醇梯度脫水。免疫組化結(jié)果判定:ERCC1陽(yáng)性染色標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤細(xì)胞核呈棕黃色,RRM1陽(yáng)性染色標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤細(xì)胞核、胞漿均呈棕黃色。光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,根據(jù)著色陽(yáng)性細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分比評(píng)分,<50%為RRM1(-)低表達(dá),≥50%RRM1(+)高表達(dá)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%為 ERCC1(+)高表達(dá),<10%為 ERCC1(-)低表達(dá)。

患者采用吉西他濱(商品名:健擇,法國(guó)禮來有限公司生產(chǎn))1 000 mg/m2,靜脈滴注,第1天和第8天給藥;奈達(dá)鉑(商品名:奧先達(dá),江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司)80 mg/m2,靜脈滴注,第1天給藥;恩度(YH-16,山東先聲麥得津生物制藥有限公司生產(chǎn))7.5 mg/m2,第1～14天連續(xù)給藥。28 d為1周期,4個(gè)療程后評(píng)價(jià)療效。

采用RECIST評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)[3],分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)和疾病進(jìn)展(PD)。近期客觀有效率(RR)為CR+PR。觀察患者生存期,若末次隨訪仍然存活則定為截尾數(shù)據(jù)。隨訪至2012年10月,隨訪率為100%。收集手術(shù)或活檢病理標(biāo)本。

2 結(jié) 果

在51例NSCLC患者中,ERCC1陽(yáng)性表達(dá)者22例,陽(yáng)性表達(dá)率43.1%;RRM 1陽(yáng)性表達(dá)者32例,陽(yáng)性表達(dá)率62.7%。經(jīng)相關(guān)性分析顯示,RRM1與ERCC1表達(dá)呈一定正相關(guān)(P<0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 NSCLC組織中RRM1與ERC C1表達(dá)的相關(guān)性

51例患者均可評(píng)價(jià)療效及不良反應(yīng),CR 1例,PR 23例,總有效率RR為47.1%,中位生存期11.1個(gè)月,1年生存率51.7%。患者按照RRM1、ERCC1的表達(dá)高低分組,對(duì) 18例 RRM1和ERCC1均為(-)患者獲有效13例(72.2%),21例RRM1和ERCC1均(+)患者獲有效4例(19.0%),12例任一陽(yáng)性表達(dá)患者獲有效7例(58.3%),3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表 2。

表2 RRM1、ERCC1表達(dá)與化療療效的相關(guān)性

ERCC1、RRM1表達(dá)為(-)組的疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)、中位生存時(shí)間(MST)均優(yōu)于ERCC1、RRM1表達(dá)為(+)組,而二者任一(+)組的TTP、MST位于上述2組之間,3組之間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 NSCLC組織中不同RRMl、ERCCl表達(dá)的生存情況

3 討 論

化療是治療晚期NSCLC的主要手段,在腫瘤的治療中發(fā)揮重要作用[4]。相同的化療方案和化療劑量,因患者的情況不同,化療效果也有差異,影響化療效果的一個(gè)重要因素即腫瘤對(duì)化療的耐藥性,DNA修復(fù)基因影響鉑類藥物的敏感性。對(duì)于正常人群,DNA修復(fù)基因可以有效降低肺癌的發(fā)病危險(xiǎn),而對(duì)于腫瘤患者,會(huì)導(dǎo)致化療藥物耐藥,化療療效降低[5]。研究[6]表明,RRM1的基因表達(dá)與吉西他濱耐藥有關(guān),ERCC1的表達(dá)與奈達(dá)鉑耐藥相關(guān)。ERCC1過表達(dá)可使停止在G2M期的損傷DNA迅速修復(fù),是核苷酸外切修復(fù)家族成員之一,其表達(dá)水平可以代表DNA修復(fù)機(jī)制的活性。不同個(gè)體腫瘤細(xì)胞中ERCC1表達(dá)水平差異很大,ERCC1的高表達(dá)通常伴隨肺癌發(fā)病率的增加[7]。在一項(xiàng)NSCLCⅢ期隨機(jī)臨床研究[8]中發(fā)現(xiàn),ERCC1和RRM1基因表達(dá)水平均影響吉西他濱單藥或吉西他濱聯(lián)合卡鉑用藥的化療效果,即ERCC1和 RRM1低表達(dá)者近期有效緩解率更高。ERCC1高表達(dá)和低表達(dá)者在早期和晚期NSCLC中起不同的作用,高表達(dá)者耐藥性增加,但術(shù)后生存期較長(zhǎng);晚期NSCLC低表達(dá)者對(duì)部分化療藥物更為敏感,預(yù)后較高表達(dá)者好。RRM1是RNA合成的重要前體,是DNA合成通路中的限速酶,逆轉(zhuǎn)二磷酸脫氧核苷酸的形成,促進(jìn)DNA損傷修復(fù)[3]。本研究結(jié)果表明,ERCC1和RRM1的高表達(dá)呈正相關(guān),根據(jù)癌變模型假設(shè),當(dāng) ERCC1、XPD、XPG 等修復(fù)基因?qū)NA鏈?zhǔn)軗p部分切除后,余下的空缺就將由RRM1提供填補(bǔ)。

重組人血管內(nèi)皮抑素最初是從鼠成血管細(xì)胞瘤株中提取到的一種內(nèi)源性糖蛋白[9],可以特異性的抑制腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與遷移,阻斷腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供給,最終抑制腫瘤增殖。重組人血管內(nèi)皮抑素與鉑類制劑聯(lián)用能增強(qiáng)化療效果。抗新生血管生成藥物與化療產(chǎn)生協(xié)同作用主要通過[10]:長(zhǎng)期使用化療藥物面臨細(xì)胞DNA的修復(fù)增加,使腫瘤需要更多的氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而抗血管生成類藥物可阻斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),降低腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的可能性,且血管內(nèi)皮細(xì)胞在遺傳上具有穩(wěn)定性,因此重組人血管內(nèi)皮抑素不易獲得耐藥性。

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