規模化種豬場主要疫病病原學調查及其生物安全控制效果評價

文│劉英姿 王宏軍 董筱萍 程迪 周鐵忠（遼寧醫學院畜牧獸醫學院）

孟祥飛（遼寧省錦州義縣動物疫病預防控制中心）

于麗玲（遼寧省瓦房店市九龍動物衛生監督所）

近年來，我國養豬業發展迅速，已成為世界養豬大國。養豬模式也從散養向規模化、標準化轉變，規模化養豬模式便于集中實施生物安全措施，便于疫病控制。但由于規模化豬場在條件建設、育種和豬病防治等技術上還處于初級階段，豬場病原微生物污染和疫病發生還很嚴重，所以規模化養豬場應在各方面加強病原微生物的監測和控制，保證豬群健康水平，從而保證規模化豬場的經濟效益和穩定發展。為此，筆者在遼寧省多家規模化種豬場開展了豬主要疫病病原學調查，共調查17種主要疫病（病原），包括豬瘟（CSFV）、豬藍耳病（PRRSV）、豬圓環病毒病（PCV2）、豬偽狂犬病（PRV）、豬血凝性腦脊髓炎（HEV）、豬細小病毒病（PPV）、豬傳染性胃腸炎（TGEV）、豬流行性腹瀉（PEDV）、豬附紅細胞體病、豬鏈球菌病、豬副傷寒病、豬大腸桿菌病、豬巴氏桿菌病、副豬嗜血桿菌病（HPS）、豬傳染性胸膜肺炎、豬喘氣病、豬丹毒。在病原調查的基礎上，制定了相應生物安全控制措施，并對控制效果跟蹤評價。本文就遼寧省遼西某規模化種豬場實施案例報道如下。

一、材料與方法

1.材料。

（1）檢測樣品。采自遼寧省某規模化種豬場。該種豬場有后備種豬903頭，可繁母豬706頭，種公豬53頭，二元母豬1083頭，優良商品豬8870頭。采集不同生長階段豬血清共928份，其中仔豬血清218份、保育豬血清230份、育肥豬血清310份、后備母豬血清90份、種母豬血清70份、種公豬血清10份。仔豬為1～30日齡，保育豬為31～70日齡，育肥豬為71日齡～出欄，后備母豬為71日齡～首次配種。采集發病豬的肺臟、脾臟、淋巴結和肝臟等病料56例，采樣同時記錄所采病料的動物臨床特征資料。上述樣品采集時間為2012年1月至2013年3月。

（2）檢測試劑。PCR檢測試劑：RNA 提取試劑、RNA 酶抑制劑；PCR試劑；引物序列由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。細菌學檢驗試劑均由本實驗室配制。

（3）實驗動物。SPF級Balb/c小鼠，雄性，6～8周齡，體重（20±2）克，購于吉林大學基礎醫學院實驗動物中心，合格證號：SCXK（吉2003-0002）。

2.方法。

（1）病毒檢測。病毒核酸PCR檢測。豬藍耳病采用自主建立的可區分經典毒株和高致病性變異毒株的PCR診斷方法。抗原檢測。豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉應用豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉抗原檢測免疫金標試紙條進行檢測。

（2）病原菌檢測。PCR檢測。副豬嗜血桿菌，采集被檢豬血液，或心包液、胸腹腔滲出液、心血、肝臟、脾臟和淋巴結等病料經TSA培養基培養的菌落作為被檢病料，自行設計引物進行PCR方法檢測。細菌學檢驗。具體方法按細菌學檢驗常規方法進行，包括直接涂片染色鏡檢、分離培養和形態觀察、生化試驗和動物實驗。其中豬喘氣病運用ELISA診斷試劑盒檢測抗體。動物實驗。用待測細菌培養物接種小鼠，每種待測細菌培養物接種小鼠10只，每只腹腔接種0.1毫升（含菌量約為2.0×1010細菌群落總數/毫升），同時取2只小鼠作對照，腹腔接種0.1毫升生理鹽水，接種后觀察小鼠24～72小時發病死亡情況，剖取死亡小鼠組織涂片鏡檢觀察菌體。

3.生物安全管理措施。針對病原學調查結果，制定了規模化種豬場生物安全管理措施，包括豬場環境控制、飼料營養和飼養管理、衛生消毒、藥物保健、免疫接種和疫病監測技術規程。

4.統計學方法。所得數據采用SPSS13.0軟件進行卡方檢驗。

二、結果

1.豬血清樣品病原檢測結果。928份血清樣品進行17種病原檢測，共檢測檢出陽性的病原6種，其中陽性率最高的是大腸桿菌，陽性率達到23.7%，豬附紅細胞體次之，達到12.39%，豬瘟最低為1.3%。檢出的PRRSV為豬藍耳病美洲型經典毒株，陽性率達到6.5%，本場應用武漢科前動物生物制品有限公司生產的豬藍耳病經典株弱毒疫苗免疫接種，接種后的豬也可能檢出病原陽性。

2.病料樣品病原檢測結果。對病料樣品進行17種病原檢測，共檢出陽性的病原11種，包括5種病毒，6種細菌；其中陽性率最高的是豬鏈球菌，陽性率達到36.5%，其次是大腸桿菌，達35.4%，最低的是豬細小病毒，2.1%；豬瘟和豬藍耳病陽性率分別為3.1%和7.3%（見表1）。

表1 豬場病料樣品病原檢測結果統計

3.不同豬群病原分布情況。對不同豬群病原檢出情況統計結果顯示，仔豬群大腸桿菌陽性率所占比例最高，達到51.6%，未檢出豬瘟、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌。保育豬豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎、豬鏈球菌、沙門氏菌、肺炎支原體、附紅細胞體和豬藍耳病均較高，所占比例超過25%。育肥豬豬瘟、豬藍耳病、豬鏈球菌和肺炎支原體所占比例較高，超過10%。后備豬豬藍耳病和沙門氏菌所占比例超過了10%。豬瘟主要在育肥豬所占比例最高，豬細小病毒均在種豬群檢出，豬藍耳病在各階段均有檢出，其中保育豬、育肥豬檢出比例最高，種豬群檢出比例也較高（見表2）。

4.生物安全控制前后病原檢測結果。對該種豬場制定和嚴格執行生物安全管理控制措施，經過半年后按同樣比例和方法采集血清和病料樣品，檢測上述17種病原體。結果共檢出4種病原體，比控制前病原體種類減少了7種；檢出的4種病原體包括副豬嗜血桿菌、大腸桿菌、肺炎支原體和附紅細胞體，其陽性率大幅度降低，分別降低了83.7%、93.4%、88.1%和74.5%（見表3）。

三、討論

根據對該種豬場的病原學檢測結果，檢出了11種病原體，而且陽性率較高，說明該種豬場污染較重，與該場沒有制定和執行嚴格的生物安全管理控制措施有直接關系。如引入種豬缺乏病原檢測，平時也沒有病原學監測環節；免疫程序的制定比較盲目，如該豬場原免疫接種的疫病只有豬瘟、豬藍耳病、豬口蹄疫、豬偽狂犬病、豬肺疫和豬副傷寒。所以，豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體等病原體污染較重。

開展病原學監測后，根據檢出的病原種類，重新制定了免疫程序，增加了豬細小病毒、豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體、豬大腸桿菌的免疫接種。同時嚴格執行環境控制、衛生消毒、疫病監控等技術規程，結果使豬場污染的病原得到了逐步凈化，病原感染的種類和感染陽性率均大幅度降低，疫病病原感染控制效果十分顯著。

規模化養豬場養豬數量多，運行環節復雜，一旦發生病原微生物感染，經濟損失重大，而且有些病原微生物不易清除，會給養豬場帶來長久的危害。因此，必須制定完善可行的生物安全措施，嚴格執行管理，才能保證養豬場健康穩定發展。根據長期的實踐經驗和研究結果，制定了包括環境控制、飼料營養和飼養管理、衛生消毒、藥物保健、免疫接種和疫病監測技術規程的生物安全管理措施，并針對免疫抑制性疾病應用了自主開發的復合免疫增強劑，取得了顯著的效果。該生物安全綜合配套措施經過各地規模化豬場推廣應用，產生了顯著的經濟和社會效益。

表2 不同豬群病原分布情況統計

表3 生物安全控制前后病原檢測結果統計