HPLC法對于小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的檢測結果分析

高瑞敏 王萍

·實驗研究·

HPLC法對于小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的檢測結果分析

高瑞敏 王萍

目的 建立用高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法, 色譜柱ZORBAX SB C18, 流動相：0.1 mol/L磷酸-乙腈(96：4, pH調節至6.0),流速1 ml/min ,控制柱溫為30℃,檢測波長為205nm,定量方法為峰面積外標法。結果 鹽酸麻黃堿線性范圍為4.263～42.63μg/ml(r=0.9998), 平均回收率為99.49%, RSD 為2.21%(n=10), 鹽酸偽麻黃堿線性范圍為5.135～51.35μg/ml(r=0.9997), 平均回收率96.97%, RSD為4.64%(n=10)。結論 高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿濃度簡單快捷、定量結果準確、靈敏度高、重復性好, 可作為該制劑的質量控制方法推廣。

鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；小兒清熱止咳口服液；高效液相色譜法

小兒清熱止咳口服液是由麻黃、苦杏仁、黃芩、甘草等7味藥材組成［1］, 具有清熱宣肺, 平喘, 利咽等功效。目前,主要的測量方法有分光光度計法、固相萃取和高效液相色譜法, 本文擬采取高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量, 探討此法的可行性及可靠程度。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 日本島津高效液相色譜儀LC-2010AHT。

1.2 試藥與試劑 鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號: 741-5231)。鹽酸偽麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號：535-4636)小兒清熱止咳口服液(10 ml×6支/盒, 國藥準字Z20054937, 生產企業：江西杏林白馬藥業有限公司)磷酸為分析純, 甲醇及乙腈均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜分析條件：采用高效液相色譜紫外檢測法, 色譜柱ZORBAX SB C18分析柱(250mm×4.6mm, 5μm),流動相：0.5%磷酸溶液, 乙腈(96:4), pH6.0), 流速1 ml/min, 控制柱溫為30℃,色譜可達到很好的分離, 對品峰進行紫外光譜 掃描, 并參照中國藥典中偽麻黃堿測定條件, 檢測波長為205nm, 定量方法為峰面積外標法。色譜柱的理論板數大于5000, 分離度大于1.5.

2.2 提取條件及對照組、供試品溶劑的制備［2］：研究中,本研究組實驗了甲醇-鹽酸和堿液蒸餾2種方法, 結果發現堿液蒸餾法的色譜中雜質峰干擾較大, 無法準確定量, 因此,

提取方法采用堿液蒸餾法。取對照品適量后精密稱量, 加0.1 mol/L鹽酸制成20 μg/ml的溶液。采用20NaOH對供試品進行蒸餾提取。

2.3 線性關系考察：稱取麻黃堿和偽麻黃堿對照品溶液(麻黃堿濃度42.63μg/ml, 偽麻黃堿濃度51.35μg/ml), 分別稀釋至1倍、2倍、3倍、4倍及5倍濃度, 進樣量20 μl注入色譜儀, 記錄麻黃堿及偽麻黃堿峰面積, 以濃度(μg/ml)為橫坐標,以相應的麻黃堿及偽麻黃堿峰面積為縱坐標進行回歸, 得到線性方程：鹽酸麻黃堿：Y=43.222X-23.42, r=0.998, 鹽酸偽麻黃堿：Y=46.52X-36.74, r=0.997, 表明鹽酸麻黃堿線性范圍4.263～42.63 μg/ml, 鹽酸偽麻黃堿線性范圍為5.135～51.35 μg/ ml。

2.4 精密度試驗［3］：取同一批樣品按相同方法制備所需溶液, 平行測定6次的含量結果：說得峰面積的RSD麻黃堿為0.9%, 鹽酸偽麻黃堿為1.1%。證明高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中麻黃堿及偽麻黃堿濃度的方法得到的測定結果精密度較高。

2.5 回收率試驗：方法同線性關系試驗, 以峰面積計算麻黃堿和偽麻黃堿含量, 根據含量結果計算回收率, 結果鹽酸麻黃堿平均回收率為99.49%, RSD 為2.21%(n=10), 鹽酸偽麻黃堿的平均回收率96.97%, RSD為4.64%(n=10)。證明高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中麻黃堿及偽麻黃堿濃度的方法得到的測定結果準確可靠。如表1, 表2所示。

表1 鹽酸麻黃堿回收率測定結果(n=10)

表2 鹽酸偽麻黃堿回收率測定結果(n=10)

3 討論

研究的結果顯示：采用高效液相色譜法, 色譜柱ZORBAX SB C18, 流動相：0.1mol/L磷酸-乙腈, 鹽酸麻黃堿線性范圍為4.263～42.63μg/ml(r=0.9998), 平均回收率為99.49%, RSD 為2.21%(n=10), 鹽酸偽麻黃堿線性范圍為5.135～51.35 μg/ml(r=0.9997), 平均回收率96.97%, RSD為4.64%(n=10)。通過利用麻黃堿和偽麻黃堿的性質, 采用蒸餾法處理樣品, 建立了專屬性強的的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量測定；前處理簡單方便, 方法重復性、準確度均滿足要求。

綜上所述, 高效液相色譜法測定小兒清熱止咳口服液中麻黃堿及偽麻黃堿濃度簡單快捷、結果準確、靈敏度高、重復性好, 樣品溶液穩定, 可作為該品中麻黃堿及偽麻黃堿濃度的質控標準。

［1］ 宋翠淼, 牛麗穎.小兒清肺止咳口服液的鎮咳, 祛痰及平喘作用的實驗研究.河北中醫藥學報, 1998, 13(2): 1-3.

［2］ 國家藥典委員會編.中國藥典.北京:中國醫藥科技出版社, 2010.

［3］ 葉應嫵, 王毓三, 申子瑜.檢驗操作規程.北京:中國科技出版社, 2010: 17.

831100 新疆昌吉州食品藥品檢驗所中藥室(高瑞敏)；新疆醫科大學附屬中醫院藥學部 (王萍)