虎杖蒽醌化合物的分離及抗氧化活性的研究

袁曉，舒楚金，龔二蘭，高俊飛，袁萍

（中國(guó)科學(xué)院武漢植物園，湖北武漢 430074）

虎杖為蓼科植物Polygonum CuspidatumSieb.et Zucc.的干燥根和根莖，為多年生草本植物，產(chǎn)于江蘇、浙江、江西、安徽、陜西、四川等地[1]。主要成分為蒽醌類(lèi)和芪類(lèi)化合物[2]。這類(lèi)蒽醌具有抗炎、抑菌[3]、抗病毒[4]及抗腫瘤[5]的作用，芪類(lèi)化合物主要有白藜蘆醇與白藜蘆醇苷，二者具有明顯的抗氧化活性[6]，總蒽醌類(lèi)也具有一定的DPPH抗氧化活性[7]，本文針對(duì)虎杖蒽醌類(lèi)化合物的分離及抗氧化活性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

虎杖藥材經(jīng)中科院武漢植物園李建強(qiáng)鑒定為蓼科植物虎杖，硅膠（安徽良辰），反相硅膠C18（20 μm），DPPH（二苯代苦味?；杂苫治黾儯毡緰|京化成工業(yè)株式會(huì)社），BHA（丁基羥基茴香醚，南京邁康化工），其它試劑均為分析純。

超聲波清洗器：合肥金尼克；日立液相色譜儀：Hitachi Pump L-2130，Hitachi Autosampler L-2200，HitachiColumn OvenL-2300，HitachiDiodeArray Detector L-2455；D-2000 Elite工作站。中低壓制備系統(tǒng)FLASH：上海利穗；分析天平電子分析天平（萬(wàn)分之一）：奧豪斯儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

虎杖脂溶性化合物的制備：取1 kg虎杖藥材用3倍量95%酒精超聲提取3次，每次30 min，所得流浸膏加用水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯層浸膏，用硅膠拌樣，經(jīng)過(guò)硅膠和反相硅膠C18的反復(fù)柱層析，等到化合物 I-VI，并用 IR，UV，NMR，MS 和 UV將其鑒定。

1.3 色譜條件：

色譜柱：YMC-ODS-AQC18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.2%磷酸水溶液，A∶B為15∶85（體積比）；流速 1.0 mL/min，溫度 25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。

1.4 抗氧化活性測(cè)定方法

采用DPPH法測(cè)定清除自由基活性[8-9]，以BHA作為參照。取一定量的DPPH用95%乙醇配成濃度為0.022 5 mg/mL的溶液，A試管中加入2.5 mL上述DPPH溶液，B試管為1 mL不同濃度的待測(cè)樣品或BHA，A與B混合放置30 min，然后用分光光度計(jì)測(cè)試吸光度，測(cè)試波長(zhǎng)517 nm，空白對(duì)照為95%乙醇溶液。用下列公式計(jì)算清除率（A0-A1）/A0×100%，式中：A0為A管中溶液的吸光度；A1是A與B管反應(yīng)后的吸光度。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 虎杖藥材的HPLC色譜分析

虎杖藥材的HPLC色譜分析，其分析結(jié)果見(jiàn)圖1。對(duì)照品的HPLC色譜分析，其分析結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1 虎杖藥材的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatography of Polygonum Cuspidatum

圖2 虎杖藥材對(duì)照品的HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatography of reference substances

2.2 化合物鑒定

EI-MS（m/z）：270；13CNMR158.4（C-1），124.3（C-2），147.6（C-3），122.5（C-4），108.6（C-5），164.6（C-6），108.2（C-7），164.7（C-8），186.4（C-9），12.1（C-10），134.1（C-4a），118.6（C-10a），110.3（C-8a），134.2（C-9a），22.1（-CH3），101.8（C1′），73.6（C2′），76.1（C3′），70.0（C4′），77.4（C5′），61.1（C6′），與文獻(xiàn)中的大黃素甲醚-1-β-D-glu數(shù)據(jù)一致，化合物I為大黃素-1-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：270；13CNMR 161.6（C-1），124.6（C-2），147.4（C-3），119.7（C-4），108.8（C-5），164.7（C-6），108.8（C-7），162.2（C-8），186.9（C-9），1816（C-10），132.6（C-4a），137.0（C-10a），114.9（C-8a），113.8（C-9a），21.9（-CH3），101.3（C1′），73.8（C2′），76.9（C3′），70.0（C4′），77.8（C5′），61.1（C6′），與文獻(xiàn)中的大黃素-8-β-D-glu數(shù)據(jù)一致，化合物II為大黃素-8-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：284（M-180）；13CNMR 161.8（C-1），124.3（C-2），147.2（C-3），119.5（C-4），107.4（C-5），164.8（C-6），106.6（C-7），160.7（C-8），186.5（C-9），182.0（C-10），136.4（C-4a），132.1（C-10a），114.5（C-8a），114.5（C-9a），21.5（-CH3），56.2（-OCH3），100.7（C1′），73.3（C2′），76.6（C3′），69.9（C4′），77.5（C5′），60.8（C6′），與文獻(xiàn)中的大黃素甲醚-8-β-D-glu 數(shù)據(jù)一致，化合物III為大黃素甲醚-8-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：260；13CNMR 179.4（C-1），160.3（C-2），109.5（C-3），188.2（C-4），160.8（C-5），125.4（C-6），146.2（C-7），121.3（C-8），137.5（C-9），113.0（C-10），134.1（C-4a），118.6（C-10a），18.9（-CH3），58.0（-OCH3）與文獻(xiàn)中的2-甲氧基-6-乙?；?7-甲基胡桃醌數(shù)據(jù)一致，化合物IV為2-甲氧基-6-乙?；?7-甲基胡桃醌。

EI-MS（m/z）：270；13CNMR 161.4（C-1），120.4（C-2），148.2（C-3），124.1（C-4），108.8（C-5），165.5（C-6），107.9（C-7），164.4（C-8），189.6（C-9），181.2（C-10），132.7（C-4a），135.0（C-10a），108.8（C-8a），113.3（C-9a），21.5（-CH3），與文獻(xiàn)中的大黃素?cái)?shù)據(jù)一致，化合物V為大黃素。

EI-MS（m/z）：284；13CNMR 165.2（C-1），121.3（C-2），148.4（C-3），124.5（C-4），108.2（C-5），162.5（C-6），106.8（C-7），166.5（C-8），190.8（C-9），180.1（C-10），13.2（C-4a），135.2（C-10a），110.2（C-8a），113.7（C-9a），22.2（-CH3），56.1（-OCH3），與文獻(xiàn)中的大黃素甲醚數(shù)據(jù)一致，化合物VI為大黃素甲醚。

2.3 抗氧化測(cè)試結(jié)果

表1為虎杖中分離得到的6個(gè)化合物的抗氧化活性，圖3為有抗氧化活性的物質(zhì)與BHA的對(duì)比圖。

綜合來(lái)看虎杖藥材蒽醌苷類(lèi)都具有一定的抗氧化活性，其中大黃素-8-β-D-glu與大黃素-1-β-D-glu抗氧化活性相當(dāng)，抗氧化比BHA強(qiáng)，大黃素甲醚-8-β-D-glu的活性與BHA接近，游離蒽醌則基本無(wú)明顯抗氧化活性。

表1 抗氧化測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果Table 1 Results of antioxidant test

圖3 抗氧化活性物質(zhì)與BHA對(duì)DPPH清除率對(duì)比圖Fig.3 Comparision the capability of components from Polygonum Cuspidatum and BHA of free DPPH radicals

3 討論

虎杖化合物及活性研究傳統(tǒng)上集中于芪類(lèi)和游離蒽醌，本文側(cè)重于虎杖中蒽醌類(lèi)化合物的分離，及初步的清除DPPH自由基的活性篩選，發(fā)現(xiàn)虎杖中結(jié)合蒽醌類(lèi)是其重要的一部分，具有借鑒意義。

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