川芎嗪聚乳酸納米粒的制備和質量研究

曾 莉， 毛春芹， 陸兔林， 錢 麗， 李爭艷， 蘇 桃

(1.南京中醫藥大學圖書館，江蘇南京 210046;2.南京中醫藥大學藥學院，江蘇南京 210046;3.南京中醫藥大學科技處，江蘇南京 210046)

川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根莖。具有活血行氣，祛風止痛之功效［1-2］。川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，臨床多用于缺血性心、腦血管疾病的治療［3-4］。由于川芎嗪為脂溶性藥物，水中溶解度小，口服吸收較差且生物利用度低，影響了其臨床療效。納米粒載藥系統具有增加藥物的吸收和生物利用度，控制藥物的釋放，提高藥物的穩定性等優點［5-7］。腹部手術后腹腔黏連、尤其是黏連性腸梗阻的問題，長期以來困擾著腹部外科醫生。據資料顯示，腹部手術后發生腹腔黏連者達90%以上［8-10］。川芎為活血化瘀類中藥，近來實驗研究發現，川芎嗪在抗術后腹腔黏連方面有顯著而獨特的作用［11］。聚乳酸作為載體材料的納米控釋系統的研究越來越受到廣泛關注［12-13］，本實驗選用具有良好生物相容性的可降解材料聚乳酸作為載體，采用自乳化法制備川芎嗪聚乳酸納米粒，優化了其制備工藝，為開發臨床可供選擇的川芎嗪新型給藥系統提供參考。在后續研究中采用噴霧劑的形式術后腹腔內一次性靶向給藥，最大限度減輕或者消滅術后可能存在的點狀、成角、索帶樣病理性黏連。

1 儀器與材料

電子分析天平 (FA1104N)(上海精密科學儀器有限公司)，電子天平 (Mettler Toledo AG285)，Agilent1100高效液相色譜儀 (美國安捷倫科技有限公司)，GC—14B氣相色譜儀 (日本島津公司)，UV—2401紫外掃描分光光度儀 (日本島津公司)，KQ—500E型醫用超聲清洗器 (昆山超聲儀器有限公司)，85—2型恒溫磁力攪拌器 (江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)，HITACHI—55P—7高速冷凍離心機 (日本日立公司)，H—600型透射電鏡 (日本Hiacthi公司)，Zeta sizer納米激光粒度分析儀 (Nano-ZS90，馬爾文)，自動雙重純水蒸餾器，透析袋(8 000～10 000，上海博亞生物科技有限公司)。

川芎嗪對照品 (經歸一化法測得純度為98.64%，可用于定量測定，南京澤郎醫藥科技有限公司)，泊洛沙姆188(美國Sigma公司)，聚乳酸 (MW=20 000，濟南岱罡生物科技有限公司)，甲醇為色譜純，水為重蒸水 (自制)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 納米粒的制備

以投料比1∶4的比例取川芎嗪和聚乳酸溶于丙酮溶液，使得丙酮溶液中聚乳酸的質量濃度為20 mg/mL，此溶液作為油相;取體積為油相體積4倍量的0.25%泊洛沙姆溶液作為水相，將油相在高速磁力攪拌的條件下注入水相之中，在恒溫30℃的條件下繼續高速攪拌70 min，揮盡丙酮，即得。

2.2 形態觀察

取川芎嗪聚乳酸納米粒混懸液適量，在透射電鏡 (transmission electron microscopy，TEM)下進行形態觀察并拍照，從TEM照片可見，納米粒呈圓整球形，表面圓滑，粒徑均一性良好，納米粒之間未見黏連，分散性良好。其透射電子顯微鏡照片見圖1。

圖1 川芎嗪納米粒電鏡圖Fig.1 Transmission electron micrograph of TMP-NP

2.3 粒徑分布

室溫條件下，取少量川芎嗪聚乳酸納米粒混懸液用適量蒸餾水稀釋后置于納米激光粒度分析儀的樣品管中，測定納米粒的粒徑及分布。由測定結果可知，納米粒的平均粒徑為210 nm，分散系數(PDI)為0.09左右。結果見圖2。

圖2 川芎嗪納米粒粒徑分布Fig.2 Size distribution graph of TMP-NP

2.4 包封率和載藥量

取適量川芎嗪聚乳酸納米粒溶液，在4℃的溫度下，以25 000 r/min的速度離心60 min，對川芎嗪納米粒溶液進行游離藥物和納米粒的分離，精密量取上清液0.2 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得，將溶液注入液相色譜儀中進行測定，測得上清液中藥物的含量。

精密量取0.2 mL川芎嗪聚乳酸納米粒溶液，置于5 mL量瓶中，加入0.5 mLN，N-二甲基甲酰胺，振搖2 min，加甲醇稀釋至刻度，即得，將溶液在注入液相色譜儀中進行測定，測得納米粒溶液中總藥物的含量。

按照以下公式進行計算，得出包封率和載藥量，結果見表1。

表1 3批川芎嗪納米粒包封率和載藥量Tab.1 Encapsulation efficiency and drug loadings of TMP-NP

包封率 (EE%)=(W藥-W游)/W藥×100%

載藥量 (DL%)=(W藥-W游)/W總×100%

式中W藥表示總藥物量，W游表示未包封于納米粒中游離的藥量，W總表示含藥納米粒的總質量。

2.5 藥物滲漏率測定

根據《中國藥典》2010版二部附錄ⅩⅨE“微囊、微球與脂質體制劑指導原則”中規定，進行滲漏率的檢查，由以下公式計算:

滲漏率=產品在貯藏一定時間后滲漏到介質中的藥量/產品在貯藏前包封的藥量×100%

每隔10 d測定一次滲漏率，共測定了60 d內的川芎嗪納米粒的滲漏率，第60天的平均滲漏率為4.80%。

2.6 體外釋藥性

2.6.1 釋放介質 在研究納米粒體外釋放時，為了模擬體內環境，選擇生理鹽水或磷酸鹽緩沖液作為釋放介質。川芎嗪為脂溶性藥物，水中溶解度小。根據文獻報道和川芎嗪溶解性試驗，采用pH7.4的磷酸緩沖液 (取磷酸二氫鉀1.36 g，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液79 mL，用水稀釋至200 mL，即得)+0.25%泊洛沙姆溶液作為釋放介質。

2.6.2 釋放介質體積 根據川芎嗪在0.25%泊洛沙姆溶液的溶解度，選擇30 mL的釋放介質。

2.6.3 體外釋藥方法 采用動態透析法測定川芎嗪納米粒的釋放度。首先將透析袋預先置于釋放介質中浸泡12 h，將透析袋一端扎緊，備用。分別精密量取川芎嗪原料藥溶液和川芎嗪納米粒溶液1 mL裝入預先處理好的透析袋中，扎緊另一端，置于30 mL釋放介質中，溫度為37℃，轉速適當，分別在不同時間點取樣1 mL，同時補充等溫等體積的釋放介質。分別測定川芎嗪原料藥與川芎嗪納米粒藥物釋放量，計算累積釋放度。以時間 (min)為X軸，累積釋放率 (%)為Y軸繪制釋放曲線，結果見圖3。

圖3 川芎嗪和納米粒溶液釋藥曲線Fig.3 Curve of TMP-NP drug release

3 討論

3.1 川芎嗪納米粒的各項評價指標均顯示該納米粒的質量良好。工藝簡便，體外釋藥緩慢，穩定性好。包封率為41%左右，不及藥典規定的80%，出現此現象是由于本研究中未將溶液中的川芎嗪納米粒單獨分離之后計算納米粒固體的包封率，而計算的是整個川芎嗪納米粒溶液的包封率。

3.2 川芎嗪在30 min內即釋放完全 (累積釋放率＞90%)，納米粒在1 000 min時釋放完全。比較川芎嗪溶液和川芎嗪納米粒溶液的釋藥結果可以看出，川芎嗪納米粒溶液相比川芎嗪原料藥具有明顯的緩釋作用。

3.3 由于未將游離藥物分離，所以在考察納米粒體外釋藥性的時候，在最初的一段時間內藥物釋放的速率比較快，但是在之后的考察時間里納米粒表現出明顯的緩釋性。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京:中國醫藥科技出版社，2010:38.

［2］李新瑩，蘭先秋，付 超，等.川芎中主要有效成分的綜合提取分離工藝研究［J］.中成藥，2009，31(2):217-220.

［3］Abeezar I，SarelaN S，Jane Ret al.Immuno histo chemical detection of the anti-apoptosis protein，survivin，predicts survival after curative resection of stage II colorectal carcinomas［J］.Ann Surg Oncol，2001，8(4):305-310.

［4］Kwak C，Ku J H，Park J Y，et al.Initial tumor stage and grade as a predictive factor for recurrence in patients with stage T1 grade 3 bladder cancer［J］.J Urol，2004，171(1):149-152.

［5］王汝興，劉翠哲，劉喜綱，等.納米技術及其在藥學研究中的應用［J］.承德醫學院學報，2005，22(3):248-249.

［6］柳 琳，蔡鑫君，柴國寶，等.自組裝納米粒及其作為藥物載體的研究進展［J］.中草藥，2009，40(3):479-483.

［7］桂 卉，范學工.控釋納米粒的研究進展［J］.中成藥，2004，26(11):938-940.

［8］蔣立新，趙 郁，凌立君.活血化瘀中藥對小鼠術后腹腔粘連組織中膠原含量影響的研究［J］.中國血液流變學雜志，2006，16(1):46.

［9］陳志新.腹腔粘連的形成及術后預防［J］.中國普外基礎與臨床雜志，2003，10(5):509-510.

［10］曾 莉，凌立君，周玉春，等.活血通腑方對大鼠術后腹腔粘連的實驗研究［J］.中國中西醫結合外科雜志，2005，21(2):135.

［11］楊瓊瓊，葉任高，陽 曉，等.川芎嗪對慢性腹膜透析大鼠腹膜功能及細胞形態的影響［J］.中華腎臟病雜志，2000，16(3):143-146.

［12］李幼林，潘江華，童曉春，等.聚乳酸凝膠預防腹腔粘連的實驗研究［J］.江西醫藥，2008，43(5):427-429.

［13］李幼林，潘江華，童曉春，等.聚乳酸凝膠和透明質酸鈉凝膠預防腹腔粘連的對照研究［J］.海峽藥業，2008，20(7):48-50.