藏藥超微粉與普通粉顯微觀察及薄層色譜對比研究

韓成芳 馬文俊 李寶文

(青海阿如拉藏醫藥研究開發有限公司，青海 西寧 810003)

超微粉技術又叫細胞級粉碎技術，是近幾年新興的中藏藥加工高新技術，它是以打破動植物類藥材細胞壁(膜)，使藥材細粉粒徑達到5～10μm(傳統加工的藥粉粒徑在150～200μm)，超微粉技術是一種純物理過程，粉碎過程中藏藥材不發生任何化學變化，不改變藥材本身的藥效物質基礎，傳統粉碎技術由于藥粉粒徑較大，有效成分釋放率較低，超微粉碎后，由于細胞完整性被打破，細胞內的有效成分能夠充分釋放出來，使藥物起效更加迅速。傳統粉碎工藝藥材細粉粒徑分布范圍廣，均勻性差，影響療效的穩定發揮;超微粉的藥材粉碎粒度分布范圍小，粒度更均勻，提高了產品質量和療效的穩定性。藏藥80%都是生藥粉直接入藥，用超微粉制成的藏藥制劑不但可達提高其有效性，還可以減少服用量和吸收速率，意義重大。本文分別利用顯微技術和薄層層析技術研究超微粉和普通粉的細胞破碎和化學成分溶出情況，直觀了解超微粉的優點和推廣的必要性。

1 藥品、儀器與試劑

1．1 藥品:六味安消片的普通粉和超微粉樣品，由本所制劑實驗室提供;山柰對照藥材、大黃酚、大黃素對照品、土木香內酯、沒食子酸對照品(121504－200401、110796－200514、110756 －200110、110760 －200507、110831 －200302中國藥品生物制品檢定所提供)。硅膠G、硅膠GF254、硅膠H由青島海洋化工廠生產。

1．2 設備儀器:MZ30型超微粉碎機、XSP－EMED雙目生物顯微鏡、三用紫外分析儀、超聲儀(功率:220V，50kHz)

1．3 試劑:水合氯醛、乙醚、石油醚、乙酸乙酯等均為分析純、水為純化水。

2 方法與結果

2．1 組織形態的顯微觀察

分別取樣品超微粉、普通粉粉末適量，粉末制片，置顯40倍微鏡下觀察發現，兩種粉體的顯微特征，在同樣放大倍數下有很大差異，原藥粉在顯微鏡下能明顯觀察到完整的薄壁細胞，長圓形或長多角形，含扇形菊糖塊。淀粉粒圓形、橢圓形或類三角形，直徑10～30μm，臍點及層紋不明顯，偶見復粒，由2～3分粒組成。草酸鈣簇晶及碎塊，直徑60～140μm。內果皮石細胞長～200μm，直徑～80μm．內果皮纖維束，纖維長150～320μm。網紋導管較多，具有緣紋溝，菊糖結晶多見。木栓細胞壁薄，呈長方形。油細胞呈長圓形，含黃棕色油狀物。(見圖1)

圖一

經超微粉碎后，粉末顆粒大小均勻，不見原藥材形貌特征，顯微鏡下鑒別觀察已經看不到完整的組織細胞，變現為不規則的小顆粒充滿視野，呈淡黃色，并可見網紋導管碎片散在，偶見淀粉粒、草酸鈣簇晶。(見圖2)

圖二

2．2 超微粉和普通粉的薄層色譜對比:

2．2．1 取超微粉與普通粉各5．0g，各加乙醚50mL，加熱回流30min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加2m L甲醇溶解，分別作為供試品溶液。另取山奈對照藥材粉末0．5g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，［1］吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60－90℃)－甲苯 －乙酸乙酯 －甲酸(15:4:2:0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。超微粉斑點明顯比普通粉斑點清晰。陰性對照無干擾，(見圖3)

圖3 六味安消片中山柰超微粉與普通粉TLC對比

2．2．2 取超微粉與普通粉各2．5g，加甲醇20mL，浸漬1h，濾過，取濾液10mL，蒸干，殘渣加水10m L使溶解，再加1mL鹽酸，水浴加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿2mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0．1g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品、大黃酚對照品，分別加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各8μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠H板上，以石油醚(60－90℃)－甲酸乙酯－甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光主斑點;在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點;置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。超微粉斑點明顯比普通粉斑點清晰。陰性對照無干擾。(見圖4)。

圖4 六味安消片中大黃超微粉與普通粉TLC對比

2．2．3 取超微粉與普通粉各5．0g，加乙醚50mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加2mL甲醇溶解，作為供試品溶液。取土木香內脂對照品，加甲醇制成1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，［1］吸取供試品溶液和上述對照品溶液各5μL，分別點于用0．25%硝酸銀制備的硅膠G薄層板上，以石油醚(60－90℃)－甲苯－乙酸乙酯－甲醇(15:2:2:0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%茴香醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。超微粉斑點明顯比普通粉斑點清晰。陰性對照無干擾。(見圖5)。

圖5 六味安消片中藏木香超微粉與普通粉TLC對比

2．2．4 取超微粉與普通粉各3．5g，加乙醇10mL，超聲處理20min，上清液作為供試品溶液。另沒食子酸對照品，加乙醇制成1mL含0．5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，［1］吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一以甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸(6:4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。超微粉斑點明顯比原藥粉斑點清晰。陰性對照無干擾。(見圖6)。

圖6 六味安消片中訶子超微粉與普通粉TLC對比

3 結果討論

一般情況下藥用有效成分主要存在于細胞內，在細胞完整無損的狀態下，有效成分只能透過細胞壁和細胞膜釋放出后才能被利用。完整的細胞壁和細胞膜對有效成分的釋出形成阻力，這種阻力隨細胞團內細胞數量的增多而增大。為消除這種阻力需要對藥材采用超微粉碎工藝將細胞打破，以使細胞壁與成分分離，細胞內的有效成分可直接接觸溶媒而溶出，而不再需要通過以往的透壁釋放過程(本實驗顯微圖譜很清楚)。一方面使其粒度更加細微均勻，比表面積增加，孔隙率增大，提高藥物的溶出速度，有利于藥物的吸收;另一方面95%以上的細胞破壁率使藥物細胞中的有效成分直接暴露出來并進入體液，從而達到用藥劑量更小，生物利用度更高，藥物發揮作用更迅速，藥效更強之目的。

在薄層色譜鑒別中，超微粉的供試品溶液比普通粉的供試品溶液的斑點清晰，可見在樣品前處理方法、點樣量、展開劑等完全相同的條件下超微粉的提取效率明顯優于普通粉。

藏藥工業生產從作坊式生產，逐步向機械化、工業化、現代化過渡，超微粉碎工藝技術為積極發展起來的中藏藥現代化制劑的研制指引了一個方向，必將呈現出強大的生命力。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)［S］．2005年版．北京:化學工業出版社，2005:1．