高效液相色譜法測(cè)定鹽酸西布曲明滴丸的含量

萬(wàn)維香，朱鵬祥

(江蘇省泰州市人民醫(yī)院，江蘇 泰州 225300)

鹽酸西布曲明為作用于中樞的口服體重調(diào)節(jié)劑，藥理作用為抑制去甲腎上腺素和5－羥色胺的再攝取，增強(qiáng)生理性飽腹感，從而減少能量的攝入，并通過(guò)生熱作用增加能量消耗[1]。該藥物在臨床上已得到廣泛應(yīng)用，但尚無(wú)滴丸劑上市，亦無(wú)滴丸劑研究的相關(guān)報(bào)道。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法[2]對(duì)鹽酸西布曲明滴丸的含量進(jìn)行了研究，為質(zhì)量控制提供快速、有效的分析手段，該法準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便易行，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－10ATvp型高效液相色譜儀，島津LC－10Avp型紫外檢測(cè)器，島津CLASS－VP色譜工作站，CP124S型電子分析天平(Sartorius，德國(guó))。甲醇為色譜純，水為重蒸水;鹽酸西布曲明對(duì)照品(南京長(zhǎng)澳制藥有限公司，批號(hào)080103，純度99.4%);鹽酸西布曲明滴丸(正大清江制藥有限公司，批號(hào)分別為20080302，20080303，20080304);鹽酸西布曲明空白滴丸(正大清江制藥有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:DiamonsilTMODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5μm)，奧泰alltima ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，大連依利特 ODS2柱(250mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH=3.0) － 甲醇(3 ∶7);檢測(cè)波長(zhǎng):223 nm;流速:1.0mL/min;進(jìn)樣量:20μL。

2.2 溶液制備

取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸西布曲明對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取樣品20丸，精密稱定質(zhì)量，計(jì)算平均丸重，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸西布曲明10mg)，置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取鹽酸西布曲明空白滴丸細(xì)粉51.0 mg，置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):在擬訂的色譜條件下，分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜相對(duì)應(yīng)的位置上無(wú)吸收峰，該法的專屬性良好。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液(0.998 g/L)，制成質(zhì)量濃度分別為 10.0，49.9，99.8，199.6，499.0 μg/mL 的對(duì)照品溶液。各精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以峰面積值(A)對(duì)質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=49971C－355，r=0.99998(n=5)，結(jié)果表明，鹽酸西布曲明質(zhì)量濃度在10.0～499.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密量取鹽酸西布曲明對(duì)照品溶液(100.0μg/mL)，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD=0.25%(n=6)，表明方法的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，6，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖峰面積的 RSD=0.37%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，研細(xì)，精密稱取6份，依法測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為0.73%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):分別精密稱取原料藥，加入處方量輔料，分別配制低(80%)、中(100%)、高(120%)3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品，置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度配制3份，共9份，各精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸西布曲明加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

隨機(jī)取樣品20丸，依法制備供試品溶液。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算結(jié)果乘以1.057，即得。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

耐用性試驗(yàn)考察了流動(dòng)相、色譜柱、流速的輕微變動(dòng)，對(duì)分離度等結(jié)果的影響。結(jié)果表明，在測(cè)定條件下，流動(dòng)相、色譜柱、流速和柱溫的輕微變動(dòng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響不大，系統(tǒng)耐用性良好。

鹽酸西布曲明為叔胺類化合物，為新型減肥藥，具有療效確切、副作用小等特點(diǎn)。現(xiàn)參照有機(jī)胺類藥物的分析方法，建立了鹽酸西布曲明滴丸的高效液相色譜含量測(cè)定方法，可作為鹽酸西布曲明滴丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

本試驗(yàn)先用223 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，且考慮本品的溶解性和檢測(cè)波長(zhǎng)，選用磷酸二氫鉀溶液－甲醇(3∶7)作為流動(dòng)相。為改善峰形，本試驗(yàn)對(duì)緩沖液的pH及緩沖鹽的濃度進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，以磷酸二氫鉀2.72 g，加水900mL溶解，加三乙胺10mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0，加水稀釋至1 000mL時(shí)峰形較好。

本試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便、專屬性好、靈敏度高，可用于鹽酸西布曲明滴丸的含量測(cè)定。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

[1]WS－240(X －207)－2000，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄 29.