玉郎傘總黃酮對洛伐他汀降血脂的增效作用研究

陳 麗， 黃仁彬， 張緒東， 郭又嘉， 付書婕， 張士軍*

(1.廣西醫科大學藥理教研室，廣西 南寧530021;2.柳州醫學高等專科學校 藥學教研室，廣西 柳州545005)

目前，調脂降脂最有效并廣泛應用的西藥是他汀類，但費用高，在早期動物實驗和臨床研究中發現他汀類藥物有一定肝臟毒性［1-2］。玉郎傘 (又名龍眼參)為蝶形花科植物疏葉崖豆Millettia pulchra(Dunn)Kurz var．laxior(Dunn)Z．Wei的塊根，是廣西壯族習用藥材［3］。課題組研究了玉郎傘總黃酮、粗多糖及水提物對食餌性高脂血癥大鼠血脂及血流變學各項指標的影響，結果表明玉郎傘提取物能有效改善高脂血癥大鼠脂質代謝紊亂現象，并有保肝護肝作用，其中以玉郎傘總黃酮的效果最明顯［4-5］。本實驗對玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯合用藥是否能更有效調節血脂及減輕肝臟損傷進行了研究，現報道如下。

1 材料、對象與方法

1.1 藥品、試劑與儀器 洛伐他汀片 (揚子江藥業集團有限公司，批號06122401);丙基硫氧嘧啶片(上海復星朝暉藥業有限公司，批號:20070202);玉郎傘總黃酮，廣西醫科大學實驗室采用醇提水沉法自行提取制備;膽豬鹽、膽固醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號分別為F20061110、F20070517);天冬氧酸轉移酶 (AST)試劑盒、丙氨酸轉移酶 (ALT)試劑盒 (均由南京建成生物工程研究所提供，批號分別為20071128、20071120)。

AU600全自動生化分析儀 (日本Olympus公司);TS-12F生物組織自動脫水機 (孝感市電子儀器廠);NP-B型生物組織包埋機 (孝感市諾普電子科技有限公司);RM2235組織切片機 (德國徠卡);NP-P型生物組織攤片烤片機 (孝感市諾普電子科技有限公司);BX51顯微鏡 (日本Olympus公司)。

1.2 試驗動物 健康SD大鼠90只，體質量180～200 g，雌雄各半，清潔級，購至廣西醫科大學實驗動物中心 (試驗動物生產許可證:SCXK桂2003-0003，試驗動物使用許可證:SYXK桂2003-0005)。

1.3 高脂飼料的配制 將比例量的膽固醇(1%)、豬膽鹽 (0.2%)、丙基硫氧嘧啶(0.2%)、蛋黃粉 (3%)研碎混合后加入溫熱的豬油 (12%)中，再與基礎飼料 (83.6%)拌勻即可［6-8］。

1.4 模型建立與分組給藥 大鼠適應性飼養1周后，眼內眥取血測定血清血脂水平，然后按血清總膽固醇 (TC)水平從低到高排列，查隨機數字表，抽取10只作為空白組，雌雄各半，實驗全程給予基礎飼料。剩余80只大鼠為高脂造模型組，喂飼高脂飼料6周進行造模，6周后再次眼內眥取血1 mL左右檢測大鼠血脂水平并與空白組進行比較，結果高脂造模型組血脂水平顯著性升高，說明造模成功。

造模成功后將高脂造模型組大鼠按TC水平從低到高排列，查隨機數字表分成8組:高脂模型組、洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮高劑量組、玉郎傘總黃酮中劑量組、玉郎傘總黃酮低劑量組、玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮中劑量+洛伐他汀組、玉郎傘總黃酮低劑量+洛伐他汀組，每組10只，雌雄各半。空白組和高脂模型組均灌服空白溶劑15 mL/(kg·d);洛伐他汀組灌服洛伐他汀3 mg/(kg·d);玉郎傘總黃酮高、中、低劑量組分別灌服玉郎傘總黃酮100、50、25 mg/(kg·d);玉郎傘總黃酮高、中、低劑量+洛伐他汀組分別在灌服玉郎傘總黃酮高、中、低劑量的同時加服洛伐他汀3 mg/(kg·d);均連續用藥14 d。

1.5 統計學處理 采用統計學軟件SPSS 13.0對所有數據進行分析，結果以均數±標準差 (± s)表示。組間分析采用One-Way ANOVA兩兩比較得到相應的P值，P＜0.05或P＜0.01差異顯著，有統計學意義。

2 結果

表1 給藥2周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化 (n=10， ± s)Tab.1 Changes of serum TC，TG，HDL-C，LDL-C levels after 2-week treatment in each group(n=10， ± s)

表1 給藥2周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化 (n=10， ± s)Tab.1 Changes of serum TC，TG，HDL-C，LDL-C levels after 2-week treatment in each group(n=10， ± s)

注:與空白組比較，＊＊P ＜0.01;與高脂模型組比較，##P ＜0.01;與洛伐他汀組比較，△P＜0.05，△△P ＜0.01。

組 別 每日劑量TC/(mmol·L － 1)TG/(mmol·L －1)HDL-C/(mmol·L － 1)LDL-C/(mmol·L －1)空白組 15 mL/kg 1.62±0.35## 0.50±0.02## 1.47±0.22## 2.84±0.36##高脂模型組 15 mL/kg 3.32±0.51＊＊ 0.89±0.23＊＊△△ 0.55±0.25＊＊ 5.57±0.41＊＊△△洛伐他汀組 3 mg/kg 1.81 ±0.23＊＊## 0.55 ±0.02＊＊## 1.11 ±0.35＊＊## 3.46 ±0.16＊＊##玉郎傘總黃酮高劑量組 100 mg/kg 1.94 ±0.22＊＊##△△ 0.57 ±0.02＊＊## 1.04 ±0.21＊＊##△△ 3.22 ±0.07＊＊##△△玉郎傘總黃酮中劑量組 50 mg/kg 1.98 ±0.32＊＊##△△ 0.56 ±0.11＊＊## 1.00 ±0.14＊＊##△△ 3.41 ±0.23＊＊##玉郎傘總黃酮低劑量組 25 mg/kg 2.03 ±0.26＊＊##△△ 0.62 ±0.03＊＊##△△ 0.98 ±0.26＊＊##△△ 3.69 ±0.18＊＊##△△玉郎傘總黃酮高劑量 +洛伐他汀組 (100+3)mg/kg 1.74 ±0.14＊＊##△△ 0.52 ±0.07＊＊##△△ 1.24 ±0.12＊＊##△△ 3.20 ±0.34＊＊##△△玉郎傘總黃酮中劑量+洛伐他汀組 (50+3)mg/kg 1.80±0.51＊＊## 0.61±0.05＊＊##△△ 1.07±0.20＊＊##△ 3.35±0.22＊＊##△玉郎傘總黃酮低劑量+洛伐他汀組 (25+3)mg/kg 1.90±0.24＊＊##△△ 0.65±0.08＊＊##△△ 0.96±0.09＊＊##△△ 3.58±0.46＊＊##△△

表2 給藥2周后各組大鼠AST、ALT、AST/ALT、肝質量、肝臟系數的變化 (n=10)Tab.2 Changes of AST，ALT，AST/ALT，liver weight and liver coefficient after 2-week treatment in each group(n=10)

2.1 高脂血癥大鼠血清TC、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白 (HDL-C)和低密度脂蛋白 (LDL-C)的變化 給藥14 d后處死大鼠，處死前1 d晚8時起禁食不禁水，次日晨8時稱體質量，用20%烏拉坦溶液腹腔麻醉腹主動脈取血，裝入不加抗凝劑的離心管中，4℃靜置10min后分離血清，用全自動生化儀檢測血脂水平。與高脂模型組比較，各用藥組TC、TG、LDL-C均顯著降低、HDL-C顯著升高 (P＜0.01);玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯合用藥的效果更好，其中玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組的TC、TG、LDL-C下降和HDL-C升高比洛伐他汀組更明顯。結果見表1。

2.2 高脂血癥大鼠AST、ALT、AST/ALT、肝質量和肝臟系數的變化 將腹主動脈抽血后的大鼠迅速剝離肝臟，用4℃生理鹽水將肝臟漂洗干凈，吸干表面水分后稱質量，計算肝臟系數，肝臟系數=AST、ALT的測定嚴格按照試劑盒說明書進行。與高脂模型組比較，各用藥組AST、ALT、AST/ALT、肝質量和肝臟系數顯著降低 (P＜0.01);玉郎傘總黃酮高、中劑量+洛伐他汀組的降低幅度超過洛伐他汀組 (P＜0.01)，結果見表2。

2.3 肝組織病理學變化 剝離的肝臟比較色澤、外觀，稱質量后用HE染色法觀察肝組織病理學變化。肉眼觀察:空白組大鼠肝臟外觀呈鮮紅色，表面光滑，無異常變化;高脂模型組大鼠肝臟外觀呈黃褐色，體積明顯增大，表面不平，包膜緊張，質量增加，切面油膩，表現為典型肝臟脂肪變性;各用藥組大鼠肝臟外觀與高脂模型組比較有不同程度的改善，其中玉郎傘總黃酮高劑量+洛伐他汀組大鼠的肝臟色澤基本正常，呈暗紅色，形態接近空白組。光鏡觀察:空白組肝小葉結構完整，肝細胞索排列整齊，未見脂肪變性和壞死;高脂模型組肝臟病理學損傷明顯，表現為肝索排列紊亂，肝細胞體積增大，肝細胞腫脹，肝細胞脂肪變性，以小空泡脂肪變為主，肝竇受壓變窄甚至消失;各用藥組與高脂模型組比較脂變有不同程度的減輕，其中洛伐他汀組肝細胞脂肪變性程度雖有減輕，但肝小葉中央靜脈周圍仍有濁腫變性的肝細胞，肝細胞內可見細小脂肪滴;用藥組中以玉郎傘總黃酮高、中劑量+洛伐他汀組肝損害程度最輕，這兩組大鼠肝小葉的組織結構基本接近空白組，肝細胞索排列整齊，肝細胞內無明顯空泡及疏松，肝細胞內未見脂肪滴。

3 討論

他汀類 (statins)藥物是目前臨床上應用最為廣泛的降脂藥物，并具有抗氧化、抗炎、調節血管內皮功能、抑制血栓形成等重要的非調脂作用。其常見不良反應如皮疹、頭痛、胃腸不適等，相對輕微，多為一過性［9］;最嚴重的不良反應為肝損害和肌毒性，常見于開始用藥或增大劑量的2周內，絕大部分為孤立性無癥狀性ALT增高［10］。課題組前期研究了玉郎傘總黃酮、粗多糖及水提物對食餌性高脂血癥大鼠血脂及血流變學等各項指標的影響，結果表明玉郎傘提取物中的總黃酮改善高脂血癥大鼠脂質代謝紊亂現象最有效，并且還有保肝護肝的作用。本實驗對玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯合用藥是否能更有效的調節血脂及減輕肝臟損傷進行了探討，結果表明聯合用藥的效果比兩藥單獨使用的效果更好，不僅血脂紊亂現象得到明顯改善，而且對肝臟的損害程度也顯著下降。

ALT主要存于肝細胞漿中，肝病早期或急性病變時，肝臟輕度受損，肝細胞損傷主要是細胞膜通透性改變，而肝細胞線粒體保持相對完整，故胞漿酶釋放較多，使血液中ALT活力明顯升高，導致肝功能下降;當肝臟嚴重受損時，肝細胞線粒體進一步遭到破壞，肝中AST大量釋放進入血液，使血液AST活力明顯升高［11］。所以肝臟細胞受損時，血清AST和ALT升高，通過檢測血清ALT和AST活性可反映肝細胞損害的程度及肝細胞的修復情況［12］，在本實驗中，高脂血癥大鼠血清 AST和ALT顯著升高說明肝功能受到損傷。洛伐他汀組用藥14 d后，血清AST和ALT不僅沒有下降反而升高比高脂模型組顯著 (P＜0.01)，肝組織病理學顯示肝細胞仍有脂肪變性情況，肝細胞內有細小脂肪滴，這說明洛伐他汀在發揮降血脂作用的同時對肝臟具有一定的損傷作用。而玉郎傘總黃酮與洛伐他汀聯合使用不僅能有效改善脂質紊亂現象，而且能降低AST、ALT及AST/ALT比值，減輕肝細胞損傷，促進肝功能恢復，效果比單用洛伐他汀好。本實驗結果表明玉郎傘總黃酮與洛伐他汀合用對高脂血癥大鼠脂質代謝紊亂有顯著的減毒增效作用。

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