阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑（14∶1）的含量均勻度測定和有關物質檢查

李靜玲 李瑞明 馮 鵬 胡建楣 林小鳳 范佩冰

1.廣東省廣州市番禺區中心醫院藥學部，廣東廣州 511400；2.中山大學附屬第一醫院藥學部，廣東廣州 510080

阿莫西林（Amoxicillin）（C16H19N3O5S）是一種最常用的青霉素類廣譜β-內酰胺類抗生素，半衰期約為61.3 min。阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞膜的能力也強，是目前應用較為廣泛的口服青霉素之一，其制劑有膠囊、片劑、顆粒劑、分散片等。單獨用阿莫西林時容易產生耐藥性而降低藥物的療效；克拉維酸鉀（C8H9NO5）僅有微弱的抗菌活性，但可與多數的β-內酰胺酶牢固結合，生成不可逆的結合物，具有強力而廣譜的抑制β-內酰胺酶作用。阿莫西林制劑配合克拉維酸鉀使用時能有效穩定阿莫西林，使其降解減少而療效增強，且對革蘭陽性及革蘭陰性細菌均有效[1-3]。有關物質是藥物中主要療效成分在儲存中產生或在原料制備中引進的，說明了藥物對溫度、濕度、光等外在因素的穩定度及藥物本身使用中的安全性。含量均勻度是藥物有效成分含量較小和比例較低時，在制劑的制備中可能引起分布不均勻而影響藥物的質量。本文主要針對制備的三批阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑（14∶1）的含量均勻度和有關物質進行測定，根據測定結果從而確定阿莫西林和克拉維酸含量均勻度和有關物質符合制劑的控制指標[4-5]，從而說明其安全性和制劑工藝的可靠合理。

1 儀器與試劑

1.1 試驗方法

方法參照《中國藥典》2010年版二部。島津LC-10AT型高效液相色譜儀，SPD-10A 紫外檢測器，浙江大學N2000 色譜管理系統， 色譜柱：Diamonsil C18，5 μm，4.6 mm×200 mm，北京迪馬公司，柱溫：室溫；pHS-10A 數字酸度計。

1.2 色譜條件與系統適應性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉7.8 g，加水900 mL 溶解，用磷酸或10 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH 值至（4.4±0.1），加水稀釋至1 000 mL）－甲醇（95∶5）為流動相；流速：1.0 mL/min；檢測波長為 220 nm。阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應大于3.5，理論板數按阿莫西林及克拉維酸計算均應不低于2 000。

1.3 樣品來源

本品所含的兩種組分阿莫西林和克拉維酸鉀均由江西制藥有限責任公司提供，批號：200101003，含量：阿莫西林（C16H19N3O5S）為 77.32%；克拉維酸鉀（C8H9NO5K）以克拉維酸計為5.50%。經按《中國藥典》2010年版二部檢驗符合規定。阿莫西林600 mg（以無水物計）：克拉維酸鉀42.9 mg（以克拉維酸計），樣品批號：010506、010508、010510。阿莫西林對照品，批號：0409-9907，含量84.5%；克拉維酸對照品，批號：0429-9902，含量：91.3%，均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結果

2.1 樣品含量均勻度

本品為口服干混懸劑，每小包裝量為2 g，每小包中克拉維酸鉀（以克拉維酸計）僅含42.9 mg，約占裝量的2.15%，按要求，需做含量均勻度檢查，參考《中國藥典》2010年版二部阿莫西林克拉維酸鉀片含量測定方法，制定本品克拉維酸鉀含量均勻度檢查方法如下：

2.1.1 測定法 取本品1 小包，照含量均勻度測定法（《中國藥典》2010年版二部附錄Х E），置于500 mL 量瓶中，加水使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。濾過，精密量取續濾液20 mL置25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。取10 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取克拉維酸對照品適量，加水溶解，制成每毫升中約含克拉維酸0.07 mg 的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算供試品中C5H9NO5的含量。三批樣品中克拉維酸鉀的含量均勻度[6-10]，結果見表1。

表1 三批克拉維酸鉀含量均勻度測定結果

2.2 有關物質

2.2.1 試驗方法 參照《中國藥典》2010年版二部收載品種阿莫西林克拉維酸鉀片的含量測定方法——高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅴ D），確定本品有關物質測定法為高效液相色譜法，其有關物質的考察采用自身對照法，各種色譜條件同前述。

2.2.2 測定法 精密吸取對照溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使阿莫西林峰高約為滿量程的20%～25%。再精密吸取供試品溶液與對照溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍，供試品溶液的色譜圖中各雜質峰面積之和與對照溶液（1%）主峰面積之和相比，計算出有關物質的量。采用自身對照法計算樣品中有關物質的含量，計算結果見表2。

表2 阿莫西林克拉維酸鉀（14∶1）干混懸劑有關物質測定結果

結果顯示，三批阿莫西林克拉維酸鉀（14∶1）干混懸劑的有關物質測定結果均小于1%，符合要求。

2.2.2 最低檢出量 取對照品溶液，逐級稀釋后，依上述有關物質測定方法檢測，記錄色譜圖，以主峰響應信號為噪聲3倍作為最小可檢測的信號（S/N≈3），當對照品溶液中的克拉維酸稀釋至3.5 ng/mL 時，得克拉維酸最低檢測量為0.035 ng。繼續稀釋，當對照品溶液中的阿莫西林稀釋至5 ng/mL 時，得阿莫西林最低檢測量為0.05 ng。色譜見圖1、2。

圖1 克拉維酸最低檢出量HPLC圖譜

圖2 阿莫西林最低檢出量HPLC圖譜

3 討論

干混懸劑是難溶性藥物與適宜輔料制成，并以干粉形式貯存，使用時加入溶液后則以混懸液形式供口服，因此特別適于對水、濕不穩定的藥物。在臨床上干混懸劑對兒童和部分有吞咽困難的成人是值得研發的一種新劑型，同時是不穩定的藥物在制劑中提高穩定性的有效方法[11-12]。干混懸劑中有關物質對制劑質量影響重大，是藥品質量穩定性的一個重要指標。多數有關物質有確定的物質來源和途徑，因此可以佐證制劑中的其他主要成分的變化。同時由于其含量微小，檢測方法必須選擇專屬性強、靈敏度高、重復性好的方法，本文選擇公認的HPLC 方法對阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑有關物質進行監測。阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑是為了應對阿莫西林的不穩定性而制備的劑型，既有固體制劑（顆粒）的特點，如方便攜帶，運輸方便，穩定性好等，又有液體制劑的優勢，方便服用。本研究制劑是采用阿莫西林和克拉維酸鉀（14∶1）比例做成的干混懸劑，通過對其含量均勻度測定和有關物質進行的研究，可以確定本品在制備、貯藏及使用過程中其含量均勻度和有關物質質量合格標準，確保本品有效性和安全性。本文中所用方法對阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑（14∶1）中阿莫西林、克拉維酸鉀的含量均勻度和有關物質測定結果表面制劑質量合格，所以在制劑使用中阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑能確保它的有效性和安全性。此外，需要注意本文中干混懸劑放置2 h 后克拉維酸含量會有下降，所以測定中應在樣品配制后2 h 內完成。干混懸劑使用時，一經配置后也同樣應盡快服用，以免溶液中不穩定因素影響藥效而帶來不良反應[13]。

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