對(duì)ELISA乙肝陽(yáng)性標(biāo)本做不同方法學(xué)對(duì)比及結(jié)果分析

常志娟 吳鴻燕 蔡定軍

(南京軍區(qū)杭州療養(yǎng)院海勤療養(yǎng)區(qū)檢驗(yàn)科，310002)

對(duì)ELISA乙肝陽(yáng)性標(biāo)本做不同方法學(xué)對(duì)比及結(jié)果分析

常志娟 吳鴻燕 蔡定軍

(南京軍區(qū)杭州療養(yǎng)院海勤療養(yǎng)區(qū)檢驗(yàn)科，310002)

目的 通過(guò)對(duì)100例乙肝陽(yáng)性標(biāo)本用不同方法學(xué)做對(duì)比來(lái)考察各個(gè)性能及差異性。方法 用ELISA法檢出的100例乙肝陽(yáng)性標(biāo)本作為對(duì)照，分別用兩種金標(biāo)法試劑復(fù)查作為對(duì)比。結(jié)果 HBsAg金標(biāo)試紙條與ELISA法符合率為100%，乙肝五項(xiàng)金標(biāo)反應(yīng)板與ELISA法比較陽(yáng)性符合率分別是HBsAg 95%，HBsAb 99%，HBeAg 100%，HBeAb 81%，HBcAb 98%，其中只有HBeAb的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 ELISA法、金標(biāo)法對(duì)檢測(cè)乙肝病毒均有較高的敏感性，本試驗(yàn)中兩種金標(biāo)試劑都可做為檢測(cè)乙肝病毒最快最便捷的途徑，只是乙肝五項(xiàng)金標(biāo)反應(yīng)板中HBeAb的檢出率較低，仍需改進(jìn)。

乙肝五項(xiàng)；ELISA；金標(biāo)法；符合率

乙肝五項(xiàng)又稱乙肝兩對(duì)半，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。乙肝五項(xiàng)指標(biāo)做為乙肝病毒感染的重要標(biāo)志，在臨床和流行病學(xué)調(diào)查及健康體檢中得到廣泛應(yīng)用。我國(guó)乙型肝炎病毒感染率很高，HBsAg攜帶者已經(jīng)超過(guò)15%，因此選擇敏感穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法極其重要，為此就將我們實(shí)驗(yàn)室常用的兩種方法做了比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選取本院體檢人員中用ELISA法檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性的標(biāo)本100例。

1.2 試劑與儀器 HBsAg診斷試劑盒膠體金法(后面簡(jiǎn)稱金標(biāo)試紙條)與乙肝五項(xiàng)檢測(cè)試劑盒膠體金法(后面簡(jiǎn)稱金標(biāo)反應(yīng)板)均由艾康生物技術(shù)有限公司提供。ELISA法試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司提供。洗板機(jī)使用匯松全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)PW-760。

1.3 檢測(cè)方法 選取的100例HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本用金標(biāo)法兩種試劑作對(duì)比，結(jié)果用SPSS 18.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果(表1～5)

表1 兩種方法3種試劑檢測(cè)HBsAg結(jié)果比較

表2 兩種方法檢測(cè)HBsAb結(jié)果比較

表3 兩種方法檢測(cè)HBeAg結(jié)果比較

表4 兩種方法檢測(cè)HBeAb結(jié)果比較

注：配對(duì)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05

表5 兩種方法檢測(cè)HBcAb結(jié)果比較

3 討論

HBsAg檢測(cè)以ELISA為標(biāo)準(zhǔn)，金標(biāo)試紙條符合率100%，金標(biāo)反應(yīng)板符合率95%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此兩種試劑均適用于急診的初步篩查和手術(shù)前的應(yīng)急檢測(cè)。

HBsAg檢測(cè)以ELISA為標(biāo)準(zhǔn)，金標(biāo)反應(yīng)板中HBsAb、HBeAg、HBcAb比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。只有HBeAb結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與相關(guān)報(bào)道相符[1]。考慮影響因素主要是ELISA法與金標(biāo)法檢測(cè)HBeAb、HBcAb采用競(jìng)爭(zhēng)法，結(jié)果顏色越深表示血清中HBeAb、HBcAb濃度越低，當(dāng)顏色較淺時(shí)，受操作者肉眼辨色差異的影響可能會(huì)出現(xiàn)假陰性或者假陽(yáng)性[2]，這個(gè)判斷分界點(diǎn)比較難控制。

酶標(biāo)技術(shù)的最大優(yōu)勢(shì)在于該法避免了對(duì)環(huán)境和人體的危害，ELISA法試劑成本低，更適合基層醫(yī)院使用，但由于該法酶的純度和反應(yīng)過(guò)程容易受環(huán)境因素影響導(dǎo)致其穩(wěn)定性不好，易造成漏檢和假陽(yáng)性[3]。金標(biāo)法檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單，快速，方便，實(shí)用，但成本也高于ELISA。用金標(biāo)法檢測(cè)時(shí)，加樣量應(yīng)足量，對(duì)陰性結(jié)果的觀察應(yīng)盡量延長(zhǎng)時(shí)間，因?yàn)闈舛鹊蜁r(shí)會(huì)出現(xiàn)先陰后陽(yáng)的現(xiàn)象[4]。

在日常檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了盡快出檢測(cè)結(jié)果，常在血液剛凝固時(shí)就強(qiáng)行離心分離血清，但在ELISA測(cè)定過(guò)程中殘留的纖維蛋白原及過(guò)氧化物酶的細(xì)胞成分易造成假陽(yáng)性結(jié)果[5]，所以血液采集后應(yīng)該使其充分凝固后再離心分離血清檢測(cè)。

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，我國(guó)的標(biāo)記免疫學(xué)經(jīng)歷了20世紀(jì)60年代的放射免疫技術(shù)(RIA)，70年代的酶標(biāo)技術(shù)(ELISA)，80年代的化學(xué)發(fā)光技術(shù)(CLIA)，90年代的時(shí)間分辨技術(shù)(TRFIA)以及現(xiàn)在正在科研中的生物芯片技術(shù)。不同的技術(shù)都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)結(jié)合實(shí)際需要選擇合適的技術(shù)。

[1]張志梅，包廣杰.金標(biāo)快速檢測(cè)板檢測(cè)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17(1)：77.

[2]蘭忠誠(chéng).ELISA法檢測(cè)血清HBV抗-HBc假陽(yáng)性的原因探討[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3(8)：105.

[3]賈印峰，高娟，賈東輝，等.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)不同檢測(cè)方法的比較研究[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，28(1)：51-52.

[4]鄧春艷，鄧海平.固相放射免疫法和膠體金法測(cè)定乙肝五項(xiàng)標(biāo)志物的比較[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18(11)：2193-2194.

[5]蔣福國(guó)，薛海斌.乙肝五項(xiàng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果常見(jiàn)影響因素分析[J].中國(guó)煤炭工業(yè)雜志，2007，10(9)：1057.

1005-619X(2013)06-0520-02

2013-04-08)