大理蒼山花甸壩飲用水源細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的檢測

張 發(fā)，周 婭，和東義，李小艷，楊曉燕

（大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南大理 671003）

飲用水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)是水質(zhì)檢測必不可少的檢測項(xiàng)目。細(xì)菌總數(shù)指的是1 mL水樣，在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)37℃培養(yǎng)24 h后所生長的細(xì)菌菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)在一定程度上反映了水被細(xì)菌污染的程度〔1〕。大腸菌群是以E.coli為代表的，需氧及兼性厭氧、在37℃培養(yǎng)24 h能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌（腸桿菌科中的埃希氏菌、檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬），是溫血動物腸道中的正常菌群，常隨動物糞便污染水源〔2-3〕，并與水中存在的腸道病原菌呈正相關(guān)性，因此，大腸菌群是飲用水質(zhì)檢測的重要指標(biāo)之一〔4-5〕。我國生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）規(guī)定生活飲用水中細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/mL，大腸菌群不得檢出〔6〕。

大理花甸壩由大、小花甸組成，位于蒼山十九峰中最北的云弄、滄浪兩峰之間。整個(gè)花甸地勢平坦，土質(zhì)肥沃，景色迷人，生物多樣性豐富，已經(jīng)成為眾多旅游者的目的地，同時(shí)也是大理學(xué)院最重要的學(xué)生野外實(shí)習(xí)基地。近幾年來隨著到這里旅游和實(shí)習(xí)人數(shù)的增加，飲用水源的安全性也越來越受到人們的關(guān)注，但到目前為止還未見有對這里的飲用水源進(jìn)行水質(zhì)檢測的報(bào)道。本研究擬采用平板菌落計(jì)數(shù)法和多試管發(fā)酵法對花甸壩3個(gè)飲用水源點(diǎn)的細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果可為該地飲用水源的選擇與保護(hù)提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 樣品 2013年6月7日分別于位于花甸壩農(nóng)場總部東北方向4 km的龍?zhí)端矗ㄋ畼?）、農(nóng)場總部西面3 km的西坡水源（水樣2）和農(nóng)場總部水源（水樣3）3個(gè)水源點(diǎn)以無菌操作方式采集水樣各500 mL，并標(biāo)明水樣采集時(shí)間、地點(diǎn)，記錄水樣周邊環(huán)境。水樣采集后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 培養(yǎng)基和試劑 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)有倒置小套管）培養(yǎng)基、3倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵瓶（內(nèi)有倒置小套管）培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基及革蘭氏染色液均按標(biāo)準(zhǔn)方法配制及滅菌〔7〕。

2 方法

采用平板菌落計(jì)數(shù)法和多管發(fā)酵法按規(guī)范進(jìn)行檢測〔8-10〕。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌總數(shù)的測定 1號水樣經(jīng)平板菌落計(jì)數(shù)，無細(xì)菌菌落生成；2號水樣菌落數(shù)＞300；3號水樣菌落數(shù)=189，見表1。

表1 細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果

3.2 總大腸菌群的測定 水樣1經(jīng)初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)后所有發(fā)酵管及發(fā)酵瓶都未產(chǎn)酸產(chǎn)氣；水樣2經(jīng)復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)后有2個(gè)發(fā)酵瓶及10只發(fā)酵管都產(chǎn)酸產(chǎn)氣；水樣3經(jīng)復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)后有2個(gè)發(fā)酵瓶及9只發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，1只試管未產(chǎn)酸產(chǎn)氣，詳細(xì)結(jié)果見表2和表3。根據(jù)初發(fā)酵試驗(yàn)的陽性管（瓶）數(shù)查總大腸菌群檢數(shù)表〔7〕，得到水樣1總大腸菌群數(shù)＜3；水樣2總大腸菌群數(shù)＞230；水樣3總大腸菌群數(shù)=230。

表2 總大腸菌群數(shù)檢測初發(fā)酵結(jié)果

表3 總大腸菌群數(shù)檢測初發(fā)酵結(jié)果

4 討論

根據(jù)檢測結(jié)果可知，除龍?zhí)端次礄z測到細(xì)菌和大腸菌群（大腸菌群數(shù)＜3）外，花甸壩西坡水源細(xì)菌總數(shù)＞300，大腸菌群數(shù)＞230，農(nóng)場總部水源細(xì)菌總數(shù)=189，大腸菌群數(shù)=230，均不符合我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）〔6〕。根據(jù)不同水源周邊環(huán)境分析，出現(xiàn)這種情況的原因可能是：龍?zhí)端吹靥幓ǖ閴伪泵妫荷江h(huán)抱、地勢險(xiǎn)峻，這里無耕地和牧場，人類活動極少，水源暫未受到污染。而西坡水源和農(nóng)場總部水源位于花甸壩壩區(qū)，地勢平坦，附近有大片的耕地和牧場，同時(shí)附近也是眾多旅游者和居民的住宅區(qū)，水源已經(jīng)受到人類及動物糞便污染，不再適宜作為飲用水源。雖然本次實(shí)驗(yàn)只對花甸壩3個(gè)水源點(diǎn)進(jìn)行了檢測，但其中兩個(gè)水源點(diǎn)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)都不合格，因此建議相關(guān)職能部門盡快采取相應(yīng)措施對花甸壩各水源點(diǎn)進(jìn)行綜合治理，建立適當(dāng)?shù)乃幢Ｗo(hù)區(qū)，以保證花甸壩飲用水安全。

〔1〕印士勇.水的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)綜述〔J〕.水系污染與保護(hù),1997（1）:64-72.

〔2〕趙菊香.水質(zhì)細(xì)菌學(xué)快速檢測方法簡介〔J〕.水資源保護(hù),1999（3）:24-35.

〔3〕韓文韓.淺談大腸菌群及其檢驗(yàn)〔J〕.航空航天醫(yī)藥,2009（8）:95.

〔4〕張濟(jì)龍,何吉明,何敏.水中糞大腸菌群檢測方法及其研究進(jìn)展〔J〕.青海環(huán)境,2012（2）:89-92.

〔5〕沈萍,陳向東.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)〔M〕.4版.北京:高等教育出版社,2007:204-210.

〔6〕中國疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所.GB5749-2006，生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)〔S〕.2006:3.

〔7〕張玲.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)〔M〕.北京:北京交通大學(xué)出版社,2007:218-230.

〔8〕黃友芳.水中細(xì)菌總數(shù)與大腸桿菌檢測方法的比較研究〔J〕.化學(xué)工程與裝備,2007,5(9):99-102.

〔9〕劉逸泠.菌落總數(shù)、大腸菌群檢測實(shí)驗(yàn)及思考〔J〕.中國科技信息,2010（19）:190-191.

〔10〕黃秀梨,辛明秀.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)〔M〕.2版.北京:高等教育出版社,2008:74-78.