轉錄活化因子和表皮生長因子受體在非小細胞肺癌中表達的相關性研究

許學亮，邵紅玲

（1.山東省臨沂市人民醫院呼吸內科 276000；2.山東省臨沂市交通醫院呼吸內科 276000）

肺癌是全世界癌癥死亡的常見病因之一，非小細胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）占原發性肺癌的80%，而其中55%的患者在診斷時就已經是局部晚期或遠處轉移［1］。信號轉導與轉錄活化因子5（signal transducer and activator of transcription 5，STAT5）是STATs蛋白家族的重要成員，具有信號轉導和激活轉錄雙重功能。該信號通路接受生長因子、細胞因子等細胞外信號刺激，作用于細胞核內特異的DNA片段，調控靶基因轉錄，影響細胞的增殖、分化和凋亡，參與腫瘤的發生和演進［2－4］。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）是癌基因c－erbB－2產物的同源物，其基因突變或表達異常與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關，在癌癥發展過程中（如血管生成及腫瘤細胞轉移、黏附和凋亡抑制等）起重要作用［5－6］?，F將STAT5和EGFR在NSCLC中表達的相關性報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2011年9月本院手術后經病理學檢查證實為NSCLC的患者68例為NSCLC組。其中，男43例，女25例，年齡45～78歲，平均56.33歲。按WHO組織學分類、分期，鱗癌36例，腺癌32例；有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移35例；Ⅰ～Ⅱ期者39例，Ⅲ～Ⅳ期者29例；高～中分化36例，低分化32例。同時選取癌旁正常肺組織26例作為對照組。患者術前均未接受任何化療及其他治療。

1.2 實驗方法

1.2.1 主要試劑 STAT5兔抗人多克隆抗體和羊抗兔二抗、SABC試劑盒、Poly－L－Lysine及DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。EGFR為鼠抗人單克隆抗體，購自福州邁新公司。

1.2.2 標本及處理 所有標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片，常規于60℃溫箱烘烤2～3h，撈片后置于60℃烤箱干燥24h，室溫下保存備用。

1.2.3 免疫組織化學SBC法 68例NSCLC和26例正常肺組織標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續切片，切片常規脫蠟水化后，高溫抗原修復，3%H2O2阻斷內源性過氧化物酶活性，并應用正常馬血清封閉交叉反應。采用EnVision法行免疫組織化學染色，再用DAB顯色、蘇木素復染，檢測STAT5、EGFR的表達情況。

1.2.4 陽性表達的判斷標準 以腫瘤細胞和正常肺組織上皮細胞的胞質或胞核內出現明顯的棕黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞，著色定位準確視為陽性結果。三者均采用半定量積分法判斷結果，根據細胞染色強度和染色細胞所占比例分別計分，兩積分之和來判斷最后結果。按染色強度記為0～3分：不著色為0分，輕度著色為1分，中度著色為2分，強著色為3分。按陽性細胞數記為0～4分：無著色為0分，＜25%為l分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。以上兩個積分相加：0分為（－），1～2分為弱陽性，3～4分為（＋），5～6分為（＋＋）；7分為（＋＋＋）。

1.3 統計學處理 應用SPSS15.0統計軟件進行數據分析。組間比較采用χ2檢驗和t檢驗，兩者采用Spearman進行相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

兩組STAT5、EGFR在NSCLC中的表達情況見表1。Spearman等級相關分析顯示，NSCLC組中STAT5與EGFR的表達呈明顯正相關（rs＝0.430，P＜0.05）。STAT5的陽性表達與NSCLC組織學類型有關，STAT5在腺癌組織中的表達明顯高于鱗癌（P＜0.05）。STAT5的陽性表達與NSCLC分化程度、有（無）淋巴結轉移及TNM分期無關（P＞0.05）。EGFR的陽性表達與NSCLC有（無）淋巴結轉移及TNM分期有關（P＜0.05）。伴有淋巴結轉移的NSCLC組EGFR的陽性表達率明顯高于不伴有淋巴結轉移的NSCLC組；EGFR的陽性表達在NSCLC中隨TNM分期的增加而增加，其在Ⅲ＋Ⅳ期中的陽性表達率明顯高于Ⅰ＋Ⅱ期。EGFR的陽性表達與NSCLC的分化程度和組織學分型無關（P＞0.05）。

表1 兩組STAT5、EGFR在NSCLC中的表達情況比較［n（%）］

3 討 論

STATs是影響細胞增殖、分化、凋亡的一類潛在的轉錄因子。迄今為止，在哺乳動物中發現STAT家族包括7個成員，其中STAT5和STAT3與腫瘤發生關系最為密切。STAT5是信號轉導及轉錄激活因子家族中的重要一員，被認為是細胞增殖促進因子和凋亡抑制因子。它的異常激活和過度表達能誘發腫瘤的形成。在人類的多種惡性腫瘤中均發現了STAT5的異常激活，如乳腺癌、前列腺癌、鼻咽癌、白血病、肺癌等［7－9］。本實驗結果顯示，STAT5在NSCLC組織中的陽性表達率為91.2%，明顯高于正常癌旁肺組織7.69%的陽性表達率，提示STAT5的過表達促進了NSCLC的發生、發展。本研究結果還發現，STAT5的陽性表達與組織學類型有關，在腺癌中的表達明顯高于鱗癌，而與分化程度、有（無）淋巴結轉移及TNM分期無關。這可能與腺癌的惡性程度高有關。

EGFR是腫瘤細胞增殖、分化和抗凋亡過程中的重要調節因子，其高表達可以促進腫瘤細胞增殖、黏附、侵襲和轉移，誘導腫瘤新生血管形成［6］。EGFR與配體結合后，發生二聚化，激活了受體中的酪氨酸激酶活性，導致其胞質區的酪氨酸殘基發生磷酸化作用，并暴露了酪氨酸激酶作用靶蛋白的結合位點，進而激活下游的多條信號途徑，并上調VEGF和EGF表達，最終影響細胞的增殖和分化［10］。已發現EGFR在很多惡性腫瘤中過表達，如胃癌、結直腸癌、頭頸鱗癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌和腦膠質母細胞瘤等［11－17］。本研究結果發現，EGFR在NSCLC中的陽性表達率明顯高于正常癌旁肺組織，且EGFR的陽性表達與NSCLC的分化程度、有（無）轉移及TNM分期有關，說明EGFR是NSCLC發生、發展、侵襲和轉移過程中的一個重要因子。Berghmans等［18］的研究結果也支持這一觀點。

肺癌是典型的血管依賴性腫瘤，腫瘤的生長離不開新生血管的形成，而新血管的生成又增加了腫瘤侵襲和轉移的機會。EGFR促進腫瘤的發展，加速腫瘤的侵襲和轉移［19］。本研究結果顯示，STAT5與EGFR的表達呈明顯正相關（rs＝0.430，P＜0.05）。這說明STAT5與EGFR在NSCLC發生、發展中相互作用，共同促進NSCLC的侵襲和轉移，STAT5蛋白的激活雖然不會直接導致細胞的惡性轉化，但它卻是腫瘤發生的關鍵因子。

腫瘤的發生是多種癌基因激活，抑癌基因缺失以及其他外在因素共同作用的結果，STAT5信號轉導通路過度激活后，上調EGFR表達，促進腫瘤細胞的增殖、血管形成、侵襲和轉移，抑制腫瘤細胞的凋亡，導致腫瘤發生早期轉移，易引起腫瘤細胞耐藥等。隨著JAKs／STATs信號途徑、EGFR的深入研究，在腫瘤發生、發展過程中所起的作用越來越受到重視。雖然STAT5和EGFR導致腫瘤的研究已經取得了很大的進展，但是深入探討STAT5和EGFR與各信號轉導通路間的相互作用機制及其與腫瘤發生發展的關系還需要進一步研究。

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