免疫組化染色在體液細胞塊中的作用

吳才良，龍瓊先，劉欣雅，王平

（南充市中心醫院·川北醫學院第二臨床學院病理科，南充 637000）

在臨床實踐中，很多患者就診時已出現體液，為了明確形成體液的原因，常抽取體液做病理學分析。過去常用的檢測方法是標本離心后涂片法，此方法收集到的細胞較少，背景干擾因素多；目前廣泛應用于臨床的體液檢查方法是液基細胞學和離心沉淀物細胞塊檢查。本院對送檢的體液標本首先做液基細胞學檢查，如有疑問，則進一步做離心沉淀物細胞塊檢查。但僅用HE觀察切片，難以明確病變性質及組織來源，為此本文淺談免疫組化檢測在體液中的作用及價值，并探討免疫標記的選擇方法。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2009年1月～2012年10月臨床各科室送檢的體液標本148例，男86例，女62例；年齡20～85歲，平均年齡53歲；其中22例患者行手術切除病變。選用CK（pan）、CK7、CEA、TTF-1、NapsinA、P63、CD56、Syn、CDX-2、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PRVim、LCA 等抗體，均從北京中杉生物公司購買。

1.2 方法

將送檢的新鮮體液標本（放置時間＜2h）置于50mL離心試管內，2 000r/min，離心10min，棄去上清液，如沉淀物較少，再次中速離心5～10min棄上清液，沉淀物中加入10%中性甲醛50mL固定12h，收集所有固體物用包埋濾紙包裹，放入脫水機中脫水、透明、浸蠟，切片后脫蠟至水，進行常規HE染色。需要行免疫組化染色的病例按常規要求進行染色，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封固。顯微鏡下觀察HE及免疫組化染色結果，并將體液離心沉淀物細胞塊診斷與手術切除組織診斷進行比較。

2 結果

2.1 HE及免疫組化診斷

148例體液標本經觀察HE染色切片后，確定為良性病變78例，惡性病變56例，另有14例無法判斷其良惡性。14例無法判斷良惡性病例經免疫組化染色后診斷為惡性9例；65例惡性病例經免疫組化染色后能確定組織來源60例，無法確定組織來源5例。

2.2 體液中的腫瘤類型

148例體液標本中，經免疫組化染色診斷惡性腫瘤65例，確定組織類型60例，常見腫瘤有肺癌、卵巢癌、肝癌，其類型具體分布如下（見表1）。

表1 腫瘤在體液中分布類型（n）

2.3 離心沉淀物細胞塊診斷與手術切除組織診斷的比較

具有體液表現的148例患者中22例進行了手術切除，術后組織均診斷為惡性腫瘤；體液離心沉淀物細胞塊檢查漏診病例1例，符合率為95.5%。

3 討論

1853年Downe率先從體液中發現惡性腫瘤，開創了漿膜腔積液脫落細胞學診斷的先河。而積液細胞學診斷最重要的是鑒別良性或惡性，其次識別組織類型，同時探討原發部位［1］。常規使用的離心涂片法，陽性細胞的檢出率較低，主要原因是：1）常規涂片法中所收集的細胞數量少，標本中大量細胞隨殘液棄去。2）制出的涂片厚薄不均，細胞重疊堆積，常常造成診斷困難而出現假陰性。3）常規涂片中高分化腺癌細胞與間皮細胞鑒別困難，又無法進行免疫組織化學染色，不能做出肯定的診斷。制備離心沉淀細胞塊切片及免疫組化聯合多抗體檢測明顯減少了人為主觀因素的影響，使結果更具科學性。據文獻［2］報道細胞塊切片檢查較傳統的細胞學涂片診斷陽性率高10倍。奉孝榮等［3］回顧性分析85例組織學證實的胸腹腔腫瘤所致的胸腹水沉積物，離心沉淀細胞塊檢查全部為陽性，而傳統的細胞學涂片陽性為49例。

免疫組化是腫瘤病理診斷中常用的技術，其結果有助于確定腫瘤的良惡性、組織亞型及組織來源。就體液細胞學的病理診斷聯合應用多種抗體的免疫組化有助于鑒別間皮細胞和惡性上皮細胞，有助于確定轉移性腫瘤的組織來源［4－6］。本研究應用免疫組化檢測14例HE染色無法確定性質的病例發現有9例為惡性，應用免疫組化染色確定組織類型有60例。免疫組織化學可提高陽性檢出率，由常規HE染色的37.8%提高到47.3%。在本研究中，我們認為應結合臨床病史、其他相關檢查及HE鏡下特點選擇合適的標記。首先要確定體液中細胞是增生的間皮細胞還是癌細胞，常選用的標記是 MC、D2-40、EMA、CEA；其次是針對不同體液確定腫瘤細胞的組織來源。胸水病例主要考慮肺癌相關免疫標記，如TTF-1、P63、NapsinA及CK14；腹水病例主要考慮胃腸癌、肝癌、女性卵巢癌及男性前列腺癌等相關免疫標記，如CDX-2、MUC-2、AFP、CA125、PSA 等。Westfall等［7］研究認為對男性患者的體液細胞宜選用calretinin、TTF-1、P504S、PSA 和 CDX-2，女性患者宜選用calretinin、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PR和CA125。

本研究顯示免疫組化檢測體液細胞的病理診斷與手術切除組織的病理診斷符合率為95.5%，僅有1例因腫瘤組織為混合性組織類型，體液細胞有限，未能做出準確的診斷。由此可見，結合臨床病史及HE鏡下特點，選擇恰當的免疫標記，可以準確地診斷體液細胞的性質，協助判斷組織來源。對無手術指征的晚期腫瘤患者，檢測體液細胞的免疫表型能確定腫瘤的性質及組織來源，有助于晚期腫瘤患者的治療。

［1］馬正中，闞秀，劉樹范，等.診斷細胞病理學［M］.鄭州：河南科技出版社，2000：249-250.

［2］劉福川，程繼榮，王小兵，等.細胞學中細胞塊的應用價值［J］.實用醫技雜志，2004，11（5）：681-683.

［3］奉孝榮，陳莉，梁輝，等.胸腹水沉渣切片在脫落細胞學中的作用［J］.西部醫學，2010，22（7）：1230-1231.

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［7］Westfall DE，Fan X， Marchevsky AM.Evidence-based guidelines to optimize the selection of antibody panels in cytopathology：pleural effusions with malignant epithelioid cells［J］.Diagnostic Cytopathology，2010，38（1）：9-14.