子宮內膜癌中抑癌基因P27蛋白與癌基因P185蛋白的表達及臨床意義

錢沁佳

（海南省第三人民醫院婦產科，海南三亞570000）

子宮內膜癌是婦科常見惡性疾病，臨床診斷除常規檢查外，基因檢測在臨床診斷中也起到積極作用。P27蛋白是細胞周期蛋白依賴激酶抑制劑因子，其在細胞周期調控中起重要作用，與腫瘤發生、發展的機制相關；P185蛋白是一種癌基因，臨床已應用于多種惡性腫瘤診斷［1］。作者為研究應用P27特異性單克隆抗體、P185特異性單克隆抗體聯合檢測在子宮內膜癌診斷及判斷預后的應用價值，對本院2008年1月至2010年3月收治的子宮內膜癌、子宮非典型增生病變及同期正常子宮內膜組織進行檢測，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2008年1月至2010年3月收治的子宮內膜癌患者66例（癌癥組），年齡42～82歲；子宮非典型增生病變患者29例（增生組），年齡41～83歲；正常子宮內膜組織31例（對照組），年齡39～81歲。

1.2 試劑 S－P免疫組化試劑盒，P27單克隆抗體、c－erbB－2單克隆抗體，均購自福州邁新公司。

1.3 方法

1.3.1 采用S－P免疫組化方法 步驟：（1）石蠟切片4μm厚，脫蠟水化后，用磷酸鹽緩沖液（PBS），pH＝7.4沖洗3次，每次5min；（2）加入50μL過氧化酶阻斷溶液，室溫孵育10min；（3）用PBS沖洗3次，每次5min；（4）加非免疫性動物血清50 μL，室溫孵育5min，后用PBS沖洗；（5）加第一抗體50μL（P27抗體或P185抗體），室溫孵育60min；（6）用PBS沖洗3次，每次5min；（7）加生物素標記的第二抗體50μL，室溫孵育10min；（8）用PBS沖洗3次，每次5min；（9）加鏈親和素－過氧化物酶溶液50μL，室溫孵育10min；（10）用PBS沖洗3次，每次5min；（11）加新鮮配制的DAB溶液2滴顯色；（12）自來水沖洗，蘇木素復染，中性樹膠封固。

1.3.2 結果判定 光鏡隨機觀察10個高倍視野，計數1 000個細胞，以細胞核／漿（P27）、細胞膜／漿（P185）陽性為棕黃色顆粒。計算陽性細胞百分率，陽性結果分級標準：＜10%為陰性，10%～50%（＋），＞50%（＋＋）。

1.4 統計學處理 采用SPSS12.0統計軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 子宮內膜癌組織中P27蛋白的表達 本組資料中癌癥組P27表達與增生組及子宮內膜對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），對照組與增生組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 P185蛋白在子宮內膜癌組織中的表達 癌癥組P185蛋白產物陽性表達率為83.3%，增生組陽性表達率為48.3%，對照組陽性表達率僅9.7%，且無強陽性表達。癌癥組P185的表達陽性率與增生組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；對照組與癌癥組及增生組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），見表2。

表1 3組P27蛋白的表達比較

表2 3組患者P185蛋白的表達比較

3 討 論

抑癌基因和癌基因在腫瘤在發生、發展過程中起到了極大的影響。P27蛋白是細胞G1期負向調節因子，是cdk2／cykclin E復合物的抑制劑，可使細胞周期停滯于G1期。有實驗證實，如P27缺失的小鼠易發生垂體腫瘤，表明P27與腫瘤發生有關［3］。近年來有報道稱 P27蛋白高表達預后較好［4－7］；本研究發現，P27蛋白陽性著色于細胞質及細胞核，正常子宮內膜亦呈陽性并可作為內對照，本組資料中子宮內膜癌組織P27陽性表達率53%，在非典型增生病變中陽性表達率為75.8%，組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），子宮內膜癌與正常子宮內膜對照組比較，兩者差異有統計學意義（P＜0.01），表明隨P27蛋白含量的減少或缺失，正常細胞向癌細胞轉化速度加快，其惡性度增高，預后不良，表明P27對腫瘤發生起著一定的調控作用。P185是編碼1255的氨基酸蛋白，其激活方式主要是擴增及產物的過度表達，現較多用于乳腺癌、卵巢癌判定預后的檢測，用于消化道癌［8］、甲狀腺癌［9］已有報道，本研究與報道相一致。本研究應用P185對子宮內膜癌進行檢測，其陽性率83.3%；在非典型病變中陽性率48.3%；對照組陽性率9.7%，這些結果表明隨著P185蛋白的擴增或表達過度增高時，惡性度增加，提示預后不良，說明P185對腫瘤發生和調控亦起一定作用。

本組資料中，子宮內膜疾病惡性程度越高，P27蛋白表達陽性水平越低；而子宮內膜疾病惡性程度越低，P185蛋白表達陽性率也越低，正常對照組P185蛋白無強陽性表達，表明子宮內膜癌中P185蛋白與P27蛋白表達表達呈負相關。他們從不同的角度為臨床提供了有價值的腫瘤標志物。P27蛋白作為抑癌基因、P185作為癌基因對腫瘤的發生與調控有重要作用，兩者的聯合檢測對子宮內膜疾病的鑒別診斷及治療起積極意義。

［1］ 張旭，李小毛.Survivin基因在子宮內膜癌中的表達及臨床意義［J］.重慶醫學，2011，40（19）：1954－1957.

［2］ 謝鳳云，謝梅青.GnRH受體在人類子宮內膜的表達及意義［J］.海南醫學，2012，23（7）：114－116.

［3］ Dellas A，Jundt G，Sartorius G，et al.Combined PTEN and p27kip1protein expression patterns are associated with obesity and prognosisin endometrial carcinomas［J］.Clin Cancer Res，2009，15（7）：2456－2462.

［4］ 張穎，陳海玲，梁艷紅.GLUT1與PCNA蛋白在子宮內膜樣腺癌組織中的表達及相關研究［J］.海南醫學，2011，22（6）：131－111.

［5］ Tantbirojn P，Triratanachat S，Trivijitsilp P，et al.Detection of PTEN immunoreactivity in endometrial hyperplasia and adenocarcinoma［J］.J Med Assoc Thai，2008，91（8）：1161－1165.

［6］ 徐丹.子宮內膜癌組織中鈣磷脂結合蛋白的表達及其意義［J］.重慶醫學，2010，39（4）：401－402.

［7］ 張穎，陳海玲，梁艷紅.GLUT1與PCNA蛋白在子宮內膜樣腺癌組織中的表達及相關研究［J］.海南醫學，2011，22（6）：169－171.