眩暈定方對后循環缺血性眩暈家兔血脂水平及椎動脈粥樣硬化的影響1）

劉春華，顏 旭，鄧浩慶，王凈凈，彭逢春，馮 娜

后循環缺血性眩暈（posterior circulation ischemia vertigo，PCIV）的主要病因是動脈粥樣硬化，椎動脈起始段是后循環動脈發生粥樣硬化狹窄最常見的部位，是造成后循環缺血的主要原因之一［1］。長期的臨床實踐中總結了眩暈定方治療PCIV，取得了滿意療效［2，3］。為了進一步闡明眩暈定方可能的作用機制，復制了符合病證結合特征的家兔模型，觀察該方對家兔血脂水平及椎動脈粥樣硬化的影響。

1 材料與方法

1．1 實驗材料

1．1．1 動物及飼料 健康成年新西蘭白兔60只，由湖南中醫藥大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（湘）2009－0012。雌雄各半，清潔級，體重為（2．0±0．3）kg，兔齡在（3～4）個月，飼養環境室溫（10～20）℃，濕度65%～70%。高脂飼料（每100g高脂飼料含普通飼料79g）和普通飼料，由湖南中醫藥大學實驗動物中心提供；膽固醇，購自長沙麗欣生物（CAS號：57－88－5）；蛋黃粉，中國糧油食品廠（漯河）生產（批號：20120914）；豬油，自行購買豬板油煉制。

1．1．2 藥物與試劑 眩暈定方由黃芪、當歸、黨參、川芎、丹皮、地龍、葛根、丹參等藥組成，所有中藥飲片均購自湖南振興中藥飲片實業有限公司（GMP認證號：湘 M0415），由湖南中醫藥大學附屬中西醫結合醫院制劑室制備成濃縮液，無菌分裝（為方便實驗操作，分別制成濃度相當于原生藥1．0g／mL和2．0g／mL兩個規格）。養血清腦顆粒，由天津天士力制藥股份有限公司生產（批號：120923），每袋4g，15袋／盒。血清總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）和三酰甘油（TG）測定試劑盒，日本積水醫療科技有限公司產品。

1．1．3 儀器 C800全自動生化儀，美國雅培公司生產；DMLB型雙目顯微鏡，德國LEICA公司產；325型石蠟切片機，英國Shandon公司生產；LBY－N6B血液流變儀，北京普利生產品。

1．2 動物分組及處理 將60只兔子分籠安靜適應性喂養1周后，按體重由小到大編號，隨機選取8只為空白對照組，其余采用文獻方法造模［4，5］。空白組予自由飲水，進食普通家兔飼料；造模動物自由進水、限量普通飼料＋限量高脂飼料喂食。造模過程中，隨機選取8只為眩暈定預防組，于造模第4周末給予灌胃眩暈定方中劑量7．66g／（kg·d），以預防性干預直至實驗結束，且第4周末以后改為普通飼料喂養；其余44只造模至第6周結束時，實際成功32只，隨機分為模型對照組、養血清腦顆粒組0．575g／（kg·d）及眩暈定高劑量組15．32g／（kg·d）、眩暈定中劑量組7．66g／（kg·d），每組各8只，分別予以灌胃相應藥物干預，共給藥2周，給藥期間均以普通飼料喂養。

1．3 檢測項目與方法

1．3．1 血脂檢測 家兔空腹禁食、禁水8h后，抽取耳緣靜脈血（不加抗凝劑）2mL～3mL，由湖南中醫藥大學附屬中西醫結合醫院生化室采用酶聯分光光度法測定血清TC、TG、LDL－C。1．3．2 血液流變學指標的測定 動物空腹禁食、禁水8h后，抽取耳緣靜脈血2mL（加1．25×104U／mL，肝素0．2mL），經循環水浴（37℃），通過血液流變儀測定全血黏度，每次樣本量為1 mL，每個樣本測量2次，取其均值，黏度計轉速范圍為5／s（低切）、30／s（中切）、200／s（高切）。

1．3．3 椎動脈粥樣硬化形態學觀察 于實驗第8周末，完成以上檢測項目后，取實驗家兔椎動脈，石蠟切片染色，光學顯微鏡下觀測形態學改變。

2 結 果

2．1 動物存活情況 空白組第7周灌胃過程中死亡1只，實驗結束時存活7只；眩暈定預防組第5周、第7周灌胃過程中各死1只，實驗結束時存活6只；模型組、眩暈定中劑量組實驗結束時均存活；眩暈定高劑量組第7周灌胃過程中死亡1只、養血清腦顆粒組第8周灌胃過程中死亡1只，實驗結束時各存活7只。2．2 對家兔血脂水平的影響 與空白組相比，模型組血清TC、TG、LDL－C水平顯著增高，差異有統計學意義（P＜0．01）；與模型組相比，眩暈定高劑量組與預防組、養血清腦顆粒組血清TC、TG、LDL－C水平明顯下降（P＜0．05或P＜0．01），提示各組藥物干預后可以有效改善血脂水平。各藥物組間比較，眩暈定高劑量組與預防組無統計學意義（P＞0．05），而眩暈定高劑量組、預防組與眩暈定中劑量組、養血清腦顆粒組有統計學意義（P＜0．05），說明眩暈定方高劑量組及預防組對血脂水平的改善優于眩暈定方中劑量組及養血清腦顆粒組。詳見表1。

表1 各組家兔血清TC、TG、LDL－C水平比較（±s） mmol／L

表1 各組家兔血清TC、TG、LDL－C水平比較（±s） mmol／L

與空白組比較，1）P＜0．01；與模型組比較，2）P＜0．05，3）P＜0．01；與養血清腦顆粒組比較，4）P＜0．05，5）P＜0．01

組別 n TC TG LDL－C空白組 7 2．10±0．240．78±0．20 1．05±0．31模型組 8 14．94±0．701） 1．61±0．441） 13．80±0．381）眩暈定高劑量組 7 10．46±1．043）5） 0．84±0．323）4） 9．67±0．533）5）眩暈定中劑量組 8 14．20±0．872） 1．19±0．392） 13．22±0．552）養血清腦顆粒組 7 14．17±0．652） 1．20±0．362） 13．37±0．422）眩暈定預防組 6 10．35±0．963）5） 0．84±0．273）4） 9．16±0．573）5）

2．3 對家兔血液流變學指標的影響 與空白組比較，模型組全血黏度高、中、低切水平顯著增高（P＜0．01）；與模型組相比，各藥物干預組全血黏度高、中、低切水平均顯著降低（P＜0．01），表明均可改善實驗家兔血黏度。其中眩暈定方高、中劑量組及預防組間無統計學意義（P＞0．05），而眩暈定各組均低于養血清腦顆粒組（P＜0．05），提示眩暈定方在改善血黏度優于養血清腦顆粒。詳見表2。

表2 各組家兔血液流變學全血黏度水平比較（±s） mPa·s

表2 各組家兔血液流變學全血黏度水平比較（±s） mPa·s

與空白組比較，1）P＜0．01；與模型組比較，2）P＜0．01；與養血清腦顆粒組比較，3）P＜0．05

組別 n 高切 中切 低切空白組7 4．03±0．30 4．10±0．44 9．07±0．68模型組 8 4．60±0．271） 5．12±0．291） 12．18±0．641）眩暈定高劑量組 7 3．96±0．262）3） 4．02±0．352）3） 8．99±0．412）3）眩暈定中劑量組 8 3．99±0．262）3） 4．07±0．292）3） 9．06±0．372）3）養血清腦顆粒組 7 4．59±0．27 5．06±0．27 12．21±0．62眩暈定預防組 6 4．00±0．222）3） 4．03±0．302）3） 9．01±0．412）3）

2．4 對家兔椎動脈粥樣硬化的影響 光鏡下各組家兔椎動脈顯微形態學顯示，空白組：動脈管腔無狹窄，管壁光滑未增厚，動脈內膜連續，無脫落紊亂；模型組：動脈壁纖維組織增生、變厚，管腔重度狹窄；眩暈定高劑量組：動脈內膜增厚，平滑肌細胞排列紊亂、增生、變性；眩暈定中劑量組：動脈管壁增厚，管腔變窄；眩暈定預防組：平滑肌細胞排列稍紊亂，管壁輕度增生、增厚，管腔輕度狹窄；養血清腦顆粒組：動脈內膜增厚、不光滑、內皮細胞變性，平滑肌細胞排列異常，管壁增厚。結果提示，眩暈定高劑量組及預防組家兔椎動脈粥樣硬化的改善程度要優于中劑量組與養血清腦顆粒組。

3 討 論

腦血管疾病是人類特別是老年人嚴重致殘和死亡的重要原因之一，缺血性腦血管病是最常見的亞型［6，7］，后循環缺血（posterior circulation ischemia，PCI）約占其中的20%［8］。椎－基底動脈系統通過基底動脈和（或）小腦下前動脈的深穿支供應前庭神經核，通過迷路動脈供應半規管。由于前庭神經通路廣泛分布于腦干和小腦，前庭終末感受器也由椎－基底動脈系統供血，加之迷路沒有側支血管網供應，對缺血十分敏感。因此，PCI易影響前庭神經系統的血流供應，造成前庭神經核和半規管短暫性缺血發作，出現眩暈癥狀［9］，稱為后循環缺血性眩暈。PCIV的主要病因是動脈粥樣硬化，年齡＞55歲、男性、缺血性心臟病、既往腦卒中或短暫性腦缺血發作（TIA）病史、高血壓、糖尿病、血脂異常、吸煙、精神壓力等均屬于PCI性眩暈的危險因素［10］。椎動脈起始段是后循環動脈發生粥樣硬化狹窄最常見的部位，是造成后循環缺血的主要原因之一［1］。

眩暈定方是導師王凈凈教授的經驗方，在歸納、總結中醫學對“眩暈”病因病機和現代醫學對后循環缺血性眩暈病因病理的認識，結合了現代藥理學研究，在“補陽還五湯”基礎上，創制了該方。以“氣虛血瘀，腦失所養，故頭暈目眩”作為立論依據，以黃芪、歸尾、川芎、丹皮、丹參、地龍、防風、葛根等11味藥組成。方中以黃芪、葛根為君藥，黃芪培補脾肺之氣，令氣旺血行，瘀去則絡通；川芎活血行氣，上行頭目，為血中之氣藥，歸尾活血補血，兩者性溫，丹皮活血散瘀，丹參活血祛瘀、養血安神，兩藥味辛微寒，四藥寒溫中和，合而為臣，輔佐君藥，共達活血化瘀之效；配以熄風通絡之蟲類藥地龍，善散外風之防風為佐使，共奏益氣升清、活血化瘀、熄風定弦之功效。既往實驗研究，該方能有效增加血管性眩暈氣虛血瘀證模型家兔的腦血流量，降低血液黏度［11］，亦顯示該方對后循環缺血性眩暈氣虛血瘀證患者有良好的臨床療效［3］。本研究結果表明，眩暈定方有降低PCIV家兔模型血脂水平的趨勢（可能因干預時間只有14d，未能顯示其明顯降脂療效），降低家兔血黏度，改善椎動脈動脈粥樣硬化，這可能是其作用機制之一；而眩暈定方預防組的療效較之其他各組（甚至是眩暈定高劑量組）均有顯著性差異，提示我們在去除高脂飲食危險因素后，盡早預防性給以中等劑量的眩暈定方，可能通過逆轉動脈粥樣硬化，達到改善后循環缺血、防止后循環缺血性眩暈的發生。

［1］ 朱琳．后循環缺血患者腦主要供血動脈病變及危險因素分析［J］．腦與神經疾病雜志，2011，19（5）：368－371．

［2］ 王凈凈，潘向軍，黃云峰．眩暈定方治療氣虛血瘀型老年性眩暈30例臨床研究［J］．中醫藥導報，2006，12（3）：369－373．

［3］ 田麗君，肖磊，王凈凈．自擬眩暈定方治療氣虛血瘀型眩暈30例療效觀察［J］．中醫藥導報，2011，17（3）：21－23．

［4］ 劉春華，王凈凈，黃云峰．血管性眩暈癥氣虛血瘀型動物模型的建立［J］．中華現代中西醫結合雜志，2006，3（22）：2017－2022．

［5］ 王凈凈，黃云峰，劉春華．建立實驗性眩暈動物模型的方法與體會［J］．湖南中醫學院學報，2006，26（1）：50－51．

［6］ Zhang LF，Yang J，Hong Z，et al．Proportion of different subtypes of strokes in china［J］．Stroke，2003，34（4）：2091－2096．

［7］ Feigin VL，Lawes CMM，Bennett DA，et al．Stroke epidemiology：A review of population－based studies of incidence，prevalence and case－fatality in the late 20th century［J］．Lancet Neurol，2003，2（1）：43－53．

［8］ Savitz SI，Caplan LR．Vertebrobasilar disease［J］．N Engl J Med，2005，352（26）：18－26．

［9］ 中華醫學會神經病學分會中華神經病雜志編輯委員會．眩暈診治專家共識［J］．中華神經科雜志，2010，43（5）：369－373．

［10］ 中國后循環缺血專家共識組．中國后循環缺血的專家共識［J］．中華內科雜志，2006，45（9）：786－787．

［11］ 王凈凈，黃云峰，劉春華，等．眩暈定方對兔血管性眩暈氣虛血瘀證模型血液流變學和腦血流圖的影響［J］．湖南中醫藥大學學報，2007，27（4）：26－29．