高效液相色譜法快速測(cè)定染色大黃魚(yú)的案例分析

王曉韡

福建寧德市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所 352100

食用檸檬黃的外觀為橙黃色粉末，微溶于酒精，不溶于其他有機(jī)溶劑。其學(xué)名為3-羧-5-羥（對(duì)磺苯）-4-（對(duì)磺苯基偶氮）鄰氮茂三鈉，英文名為Tartrazine。其結(jié)構(gòu)式如下：

圖1 檸檬黃的分子結(jié)構(gòu)式

檸檬黃是一種偶氮型酸性染料。主要用于食品、飲料、藥品及化妝品的著色，也用于羊毛、蠶絲的染色及制造色淀。水溶性合成色素，鮮艷的嫩黃色，廣泛用于冰淇淋、雪糕、果凍、酸奶、飲料、罐頭、糖果包衣等的著色。檸檬黃之所以能用做食品藥品染色劑，是因?yàn)樗踩缺容^高，基本無(wú)毒，不在體內(nèi)貯積，絕大部分以原形排出體外，少量可經(jīng)代謝，其代謝產(chǎn)物對(duì)人無(wú)毒性作用。但人如果長(zhǎng)期或一次性大量食用檸檬黃、日落黃等色素含量超標(biāo)的食品，可能會(huì)引起過(guò)敏、腹瀉等癥狀，當(dāng)攝入量過(guò)大，超過(guò)肝臟負(fù)荷時(shí)，會(huì)在體內(nèi)蓄積，對(duì)腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害。

在寧德，溫州等地，近期內(nèi)接到多起舉報(bào)大黃魚(yú)染色案件，由于養(yǎng)殖大黃魚(yú)魚(yú)體顏色沒(méi)有野生鮮艷，不法商販?zhǔn)褂弥?qiáng)、色澤鮮明、不易褪色、穩(wěn)定性好的合成著色劑檸檬黃或日落黃給大黃魚(yú)染色[1]，染色后魚(yú)體與野生大黃魚(yú)顏色相近，迎合部分消費(fèi)者的不正確消費(fèi)理念，達(dá)到以次充好的目的。

目前，測(cè)定檸檬黃和日落黃的方法有高效液相色譜法[2]，高效液相質(zhì)譜法[3]， ELISA法[4]等。由于魚(yú)本身有大量的脂肪和油脂，對(duì)分析方法要求高。使用固萃方法前處理成本高且容易堵柱。采取前處理改進(jìn)，以達(dá)到高效快速檢測(cè)合成色素的方法，來(lái)為快速打擊不法商販提供有力依據(jù)。

圖2 合成著色劑檸檬黃，日落黃的等吸收?qǐng)D

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilengt1260 Infinity高效液相色譜儀配有二級(jí)陣列紫外檢測(cè)器，檸檬黃，日落黃，莧菜紅，胭脂紅購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心（儲(chǔ)備液濃度0.5mg/mL），甲醇（色譜純），乙酸銨（分析純），超純水，無(wú)水乙醇（分析純），氨水（分析純），舉報(bào)案件黃魚(yú)樣品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法與色譜條件

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法

由于著色大黃魚(yú)一般為體表著色，引入大量魚(yú)肉不利于樣品處理和結(jié)果的有效分析，只取體表部分，用超純水進(jìn)行超聲浸泡，使用石油醚萃取樣品中的脂肪后取水層過(guò)聚酰胺粉小柱，用甲醇-甲酸（6+4）混合液洗滌后，使用超純水洗至中性，用無(wú)水乙醇-氨水-水溶液洗脫合成色素，收集解析液，乙酸中和，濃縮近干，加水定容后過(guò)0.45μm濾膜上機(jī)測(cè)試。

1.2.2 色譜條件

色譜柱： Agilent Eclipse Plus C18,5μm,4.6×150mm

流動(dòng)相：甲醇-20mmol乙酸銨；

梯度洗脫：甲醇：10%~50%,5%/min;50%~90%，8%/min;90%~10%,20%/min

流速：1mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)： 428nm

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

從等吸收?qǐng)D圖2中可以看出，合成著色劑檸檬黃，日落黃的最高吸收峰在428nm,為了達(dá)到出峰完美，檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的目的。采用428nm檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相梯度洗脫的選擇

流動(dòng)相等度洗脫時(shí)，無(wú)法將幾種合成著色劑有效地完全分離開(kāi)，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例及使用梯度洗脫的方法，可以有效達(dá)到完全分離的效果如圖3，此分析方法中的流動(dòng)相梯度洗脫可有效地用于分析食品中合成著色劑。

圖3 檸檬黃，日落黃，胭脂紅，莧菜紅標(biāo)樣的HPLC測(cè)定譜圖

2.3 案件大黃魚(yú)測(cè)定結(jié)果

舉報(bào)抽取的樣品測(cè)定結(jié)果如圖4所示，從測(cè)定的結(jié)果來(lái)看，舉報(bào)大黃魚(yú)樣品存在染色的現(xiàn)象，其染色物質(zhì)為合成著色劑檸檬黃，加入量為0.003g/kg。

圖4 大黃魚(yú)樣品中合成著色劑的HPLC測(cè)定譜圖

3 小結(jié)

本次試驗(yàn)中的大黃魚(yú)樣品均檢測(cè)出含有檸檬黃色素，其被用來(lái)?yè)絺卧旒俅簏S魚(yú)，以達(dá)到“賣相好，銷路大”的不法目的，此類造假行為相當(dāng)普遍。由于合成色素對(duì)人體的危害大，故我們應(yīng)加大樣品抽查力度和執(zhí)法效率，希望業(yè)者買賣有良心，鼓勵(lì)市民舉報(bào)投訴，使不法行為無(wú)所遁形。

[1]陳建軍. 黃魚(yú)中摻有檸檬黃色素事件的調(diào)查.職業(yè)與健康，2002，18（5），43-44

[2]陳欣欣，謝婭黎，肖漢，楊彬. 現(xiàn)代食品科技， 2009，09

[3]黃曉雯. 超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定紅燒老抽中六種合成色素的方法.食品工業(yè)科技, 2012, 33(16)

[4]邱凱，馬國(guó)文，柳增善，任立松，沈慶豐. 檸檬黃的ELISA檢測(cè)方法的建立.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008,23（3），315-319