當歸煮散臨床應用最佳粒度的研究

秦素紅，何瑤，羅妮妮，傅超美

中藥煮散是藥材粉碎為顆粒與水共煮，去渣取汁制成的液體劑型[1]。煮散的歷史悠久，漢代到宋代中藥煮散已在臨床上得到廣泛應用[2~3]，《金匱要略》記載煮散用藥量僅為原湯方的1/3。正如沈括在《夢溪筆談》中所說：“古方用湯最多，用丸散者殊少，近代用湯者殊少，應湯皆用煮散?！敝兴幹笊⒕哂杏盟幜可?、療效高、體積小、簡便易行等諸多優點。

中藥煮散與傳統飲片的區別主要在于原料藥大小的不同。單從擴散定律看，藥材顆粒越小煎出物質就越多；但藥材過細，相互吸附強，影響擴散速度；含淀粉、黏液質較多的藥材，入煎易糊化，影響成分溶出，且難過濾，難服用[4]。本文對當歸煮散臨床應用的最佳粒度進行研究，以當歸的主要藥效成分阿魏酸[5]和總煎出物為指標；對比研究不同粒度煮散不同時間點指標成分煎出量，根據多樣本兩兩對比H檢驗[6]，判斷顯著性差異，確定當歸煮散的適宜入煎粒徑范圍。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20A型液相色譜儀； Diamonsil TM C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm，美國迪馬公司）；Sartorius-BS110S分析天平（德國賽多利斯公司）；DFY-300搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；BSY-1-4電熱恒溫水浴鍋（浙江余姚工業儀表二廠）。

1.2 試藥

阿魏酸對照品（批號：111022），純度≥98%，由四川省維克奇生物有限公司提供。

當歸飲片（批號：1109094）由四川新荷花中藥飲片股份有限公司提供，經成都中醫藥大學盧先明教授鑒定為傘形科植物當歸(Angelica sinensis (Oliv.)Diels)的干燥根，符合《中國藥典》2010年版當歸項下各項規定。

乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 不同粒度當歸煮散的制備

根據當歸藥材的質地與粉碎性質，采用標準篩5目、10目、18目、35目、60目將當歸粉碎成4.0毫米、2.0毫米、1.0毫米、0.5毫米、0.25毫米以下，依次定為第二、三、四、五、六組，以原飲片為第一組。對五種規格粉末粒度進行考察。

2.2 供試品溶液制備

當歸原飲片：平行稱取當歸原飲片10 g置于錐形瓶，共6份；取3份樣品分別加9倍量水，不浸泡，大火煮沸小火微沸，分別煎煮10 min, 20 min, 30 min,濾過，減壓濃縮，定容至200 mL。另3份樣品，首煎5倍量水（50 mL），煎煮30 min，濾過；二煎濾渣加水4倍量水（40 mL），分別煎煮10 min, 20 min,30 min，濾過；合并2次濾液，減壓濃縮，定容至200 mL。即得當歸原飲片不同時間點水煎樣品溶液。搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液作含量測定供試液。

當歸第二、第三、第四、第五、第六組不同時間供試品溶液制備同上。

2.3 不同粒度當歸煮散不同時間點阿魏酸煎出率

2.3.1 色譜條件 流動相：乙腈-0.085%磷酸水（30︰70）；流速：1.0 mL﹒min-1；檢測波長：316 nm，柱溫：35 ℃；進樣量：15 μL。理論塔板數按阿魏酸峰計算應不低于5000。

2.3.2 對照品溶液制備 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含0.0478 mg的溶液。

2.3.3 方法學考察 ① 專屬性考察 分別取空白溶劑、對照品溶液、當歸原飲片樣品，按上述HPLC分析條件測定，進樣15 μL，如圖1，結果表明樣品專屬性良好。

② 線性關系考察 精密量取對照品溶液2 μL，5 μL，8 μL，10 μL，12 μL，15 μL，分別進樣分析。以峰面積為縱坐標，對照品含量為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為：Y=6268067.57X+8088.29 (R=1.00，n=6)。線性范圍為0.0956 μg～0.717 μg。

③ 精密度考察 取阿魏酸對照品溶液，連續進樣6次，每次10 μL，依法測定記錄峰面積，結果RSD為0.14%，表明儀器精密度良好。

④ 重復性考察 按照“2.2”項供試品制備方法，平行制備當歸原飲片30 min時間點供試液樣品6份，進樣15 μL，分別按含量測定項下方法測定，記錄峰面積，結果RSD值為1.03%，表明儀器重復性良好。

圖1 專屬性考察

表1 阿魏酸加樣回收率試驗結果(n=3)

結果表明，加樣回收率在95%～105%之間，平均回收率為98.46%，RSD為1.15%，表明該方法可靠，符合含量測定的要求。

2.3.4 樣品測定結果 參照《中國藥典》2010年版一部正文當歸項下“阿魏酸”方法測定，不同粒度當歸煮散顆粒阿魏酸含量隨煎煮時間變化結果見表2。

表2 阿魏酸含量對比(n=3)

30 0.2971 0.5216 0.5637 0.5839 0.5965 0.5972 30+10 0.3547 0.5780 0.5978 0.6147 0.6178 0.6213 30+20 0.4221 0.6836 0.6974 0.6998 0.7120 0.7324 30+30 0.4716 0.7183 0.7365 0.7387 0.7379 0.7396

結果可知，同一粒度煮散顆粒水煎液中阿魏酸含量隨煎煮時間延長而增加；同一時間點，煮散藥材入煎阿魏酸煎出率較原飲片高；其中，第六組最細規格粉在六個時間點阿魏酸的煎出率均最高。

2.3.5 結果分析比較[7~9]以原飲片阿魏酸含量為1，余樣品與之比較，結果見表3。用秩和檢驗(H檢驗)進行多個樣本比較及多個樣本間兩兩比較，結果見表4。

表3 粉碎度與阿魏酸測定值比較

表4 兩兩對比（H檢驗）結果

由表3可知，當藥物顆粒為最細粉時有最佳煎出率，有效成分阿魏酸的煎出量為原藥的1.5683～2.0101倍；由表4結果表明：五個規格粒度的當歸煮散在不同時間點的阿魏酸煎出率顯著高于原飲片，P值均小于0.01；各粒度規格間無顯著差異，P值均大于0.05。

2.4 不同粒度當歸煮散顆粒不同時間點總煎出物量

精密量取“2.2”項下當歸煮散水煎樣品溶液50 mL，分別置于已干燥恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，殘渣于105 ℃烘箱中干燥3 h，得干浸膏，稱定，按下式公式計算：總煎出物=(VW1/20W)×100%。式中，V為每份藥材提取液總體積；W1為50 mL提取液中干浸膏重量；W為每份藥材的重量。結果見表5，表6，表7。

表5 總煎出物量對比(n=3)

20 24.11% 41.28% 42.74% 43.38% 44.74% 44.77%30 25.42% 43.68% 45.58% 46.80% 48.05% 48.69%30+10 27.14% 47.68% 47.36% 47.95% 49.33% 49.46%30+20 30.32% 47.98% 50.51% 51.22% 52.05% 52.14%30+30 32.06% 48.40% 51.29% 51.99% 52.19% 52.27%

表6 粉碎度與總煎出物測定值比較

表7 兩兩對比（H檢驗）結果

由表5結果可知，同一粒度煮散總煎出物煎出率隨煎煮時間延長而增加；不同粒度煮散顆粒其粒度越小，總煎出物煎出率越高。由表6可知，當藥物顆粒為最細粉時有最佳煎出率，總煎出物的煎出量為原藥的1.6304～1.9154倍；由表7結果表明，當歸煮散在不同時間點的總煎出物顯著高于原飲片，P值均小于0.01；各規格粒度的煮散間無顯著差異，P值均大于0.05。

3 結論與討論

本文對當歸煮散臨床應用的最佳粒度進行研究，結果表明：當歸煮散在不同時間點阿魏酸煎出量和總煎出物均顯著高于原飲片，P值均小于0.01，煮散的煎出量為原飲片的1.5倍左右。當藥物顆粒為最細粉即小于0.25毫米時，總煎出物、阿魏酸在各個時間點煎出量均最高。兩兩對比H檢驗結果可知，五個規格粒度的煮散間總煎出物、阿魏酸煎出量無顯著差異，P值均大于0.05。較細級別煮散煎出量并未顯著高于粒徑范圍規格較大煮散。

將藥材粉碎過細，需要較大的能耗及人力設備，藥材損失量大；且經實驗證明粒度小于0.25毫米的當歸煮散在煎煮過程中易糊化，濾過性差。綜合考慮上述因素，確定當歸煮散粒徑范圍為0.25~4.0毫米。

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