逍遙散及其功效拆方對應激抑郁模型小鼠的影響

楊靖，龔錫平，劉蓉，王哲，武志強，于柳，史玉榮，曾南

抑郁癥作為一種常見且發病率不斷上升的精神障礙性疾病，受到全球精神衛生部門的密切關注，現今其病因、發病機制和治療的基礎與臨床研究亦日益深入。逍遙散是體現“疏肝解郁”功效的經典方劑，臨床已廣泛應用于精神疾病的治療，且療效肯定。課題組前期通過“君臣佐使”拆方研究方法，以小鼠行為絕望抑郁模型為載體，發現逍遙散、柴胡、當歸-白芍藥對及逍遙散去歸芍組均能顯著縮短模型小鼠的不動時間[1]。本研究立足于“功效拆方”方法，探討逍遙散及其方中體現不同治法的功效藥組對應激抑郁模型小鼠行為學的影響，以期進一步為逍遙散組方原理的闡釋提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 藥物及藥液制備

柴胡、當歸、白芍、茯苓、白術、薄荷、生姜、炙甘草等藥材均購自成都太極大藥房，經本校嚴鑄云教授鑒定符合《中國藥典》2010版要求。逍遙散組成參考《方劑學》[2]所載（60 kg成人日用量）：柴胡9 g，當歸9 g，白芍9 g，白術9 g，茯苓9 g、薄荷1.5 g，生姜9 g，炙甘草4.5 g。受試藥物共分6個組：逍遙散組、疏肝藥組（柴胡、薄荷）、養血藥組（當歸、白芍）、健脾藥組（白術、茯苓、生姜、炙甘草）、疏肝藥+健脾藥組（柴胡、薄荷、白術、茯苓、生姜、炙甘草）、養血藥+健脾藥組（當歸、白芍、白術、茯苓、生姜、炙甘草）。各組劑量均按上述所載成人（60 kg）一日用量的30倍計算，即逍遙散30 g﹒kg-1、疏肝藥5.25 g﹒kg-1、養血藥 9 g﹒kg-1、健脾藥15.75 g﹒kg-1、疏肝藥+健脾藥21 g﹒kg-1、養血藥+健脾藥24.75 g﹒kg-1。每組藥物水煎液制備方法如下：按藥物組成要求分別取相應適量藥材，加8倍量水浸泡30 min，加熱煮沸，文火煎煮 1 h，趁熱濾過；再加6倍量水，同法分別煎煮40 min及30 min；合并三次濾液，60℃條件下減壓濃縮至所需濃度，藥液4℃冰箱保存備用。

鹽酸阿米替林（amitriptyline hydrochloride），批號039K1600，SIGMA公司，給藥劑量10 mg﹒kg-1。

1.2 實驗動物

ICR小鼠，雄性，體重18~22g，四川省醫學科學院實驗動物中心提供，合格證號為scxk（川）2008-24。

1.3 主要儀器

小鼠懸尾試驗箱（40 cm×30 cm×40 cm，自制）；小鼠強迫游泳試驗箱（42.5 cm×30.8 cm×18.8 cm，自制）；ZZ-6小鼠自主活動測試儀（成都泰盟科技有限公司）；LT501E 500 g/0.1g電子天平（常熟市天量儀器有限責任公司）；RE-5203旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市予平儀器有限公司）；BS323S 320g/0.001g電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。

2 實驗方法

2.1 逍遙散及其功效拆方對小鼠懸尾試驗的影響

取健康雄性ICR小鼠，按體重分層隨機分為8組：逍遙散組、疏肝藥組、養血藥組、健脾藥組、疏肝藥+健脾藥組、養血藥+健脾藥組、空白對照組、阿米替林組。各組小鼠分別灌胃給予相應藥物或蒸餾水，每日1次，連續7 d。末次給藥1 h后，將小鼠尾端（距尾尖1.5 cm處）用透明膠帶固定于懸尾箱中水平金屬棒上，使其呈倒懸狀態，頭部離箱底約30 cm，適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內小鼠累計保持不動狀態的時間。

2.2 逍遙散及其功效拆方對小鼠強迫游泳試驗的影響

參照Elzbieta N[3]等試驗方法加以改進，分組及給藥方法同“2.1”。各組小鼠于實驗前24 h進行15 min游泳適應訓練。末次給藥1 h后，將小鼠頭部朝下放入自制游泳盒中（水溫23～25℃，水深10 cm），適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內小鼠累計不動時間（小鼠在水中停止掙扎，呈漂浮狀態，僅有細小的肢體運動以保持平衡）。

2.3 逍遙散及其功效拆方對小鼠自主活動的影響

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥后1 h 將小鼠放入ZZ-6小鼠自主活動測定儀中，適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內小鼠的平行活動次數和站立次數。

2.4 統計方法

各組數據均用x±S表示，計量資料符合正態分布且滿足方差齊性者采用SPSS13.0單因素方差分析（One-Way ANOVA），不符合者采用非參數檢驗秩和法分析。

3 實驗結果

無論小鼠懸尾試驗還是小鼠強迫游泳試驗均顯示，逍遙散、疏肝藥、養血藥、疏肝藥+健脾藥、養血藥+健脾藥組能明顯縮短4 min內小鼠的不動時間（P＜0.01），健脾藥組則對小鼠不動時間無顯著影響（P＞0.05）。所有藥物組在所試劑量下對小鼠自主活動無明顯影響（P＞0.05）。實驗結果見表1、表2、表3。

表1 逍遙散及其功效拆方對小鼠懸尾試驗的影響（ x±S）

表2 逍遙散及其功效拆方對小鼠強迫游泳試驗的影響（ x±S）

表3 逍遙散及其功效拆方對小鼠自主活動的影響（ x±S）

4 討論

復方分解研究（即拆方研究）一直是傳統復方藥理研究的重要內容。基于復方整體藥理研究的結果，按特定組方規律對全方進行分解研究，可利于揭示復方中各組藥物的配伍關系，為闡釋中藥復方作用原理的科學實質提供實驗依據。目前常見的中藥復方拆方研究方法主要有以下5類：①單味藥或小藥組研究[4～5]；②君臣佐使拆方[6]；③正交設計拆方[7～8]；④功效拆方[9~11]；⑤復方化學組分拆方[12]。

基于“君臣佐使”組方原則對經典方劑逍遙散抗抑郁作用的拆方研究表明，君藥——柴胡在全方抗抑郁作用的發揮中具有重要地位，是體現逍遙散抗抑郁效應的重要組分[1]；進一步將逍遙散全方分解為君藥、臣藥、君臣藥、全方去君藥、全方去君臣藥等小藥組，發現君臣配伍（柴胡+當歸、白芍）是逍遙散發揮抗抑郁作用的重要配伍形式[13]。上述研究方法均以“君臣佐使”組方理論為指導，是從中藥復方的基本構成框架入手分析逍遙散抗抑郁效應的組成合理性，但并不能完全解釋逍遙散抗抑郁作用的組方特點。本研究引入“功效拆方”（或稱為“功效藥隊”）的研究模式[14]，意在確定逍遙散“疏肝解郁、養血健脾”治法與全方抗抑郁效應之間的對應關系。

中醫基礎理論認為，肝的生理特性為“體陰而用陽”，即肝主藏血又主疏泄，只有肝藏血功能正常，肝氣條達舒暢，人體才能具有正常的生理功能。且五行之中，肝屬木，脾屬土，木本克土，加之病變肝木之亢，故極易引起脾土失司，正所謂“見肝之病，知肝傳脾，當先實脾”。因此在治療中醫肝系統病變時常以疏肝養肝為要，兼以顧護脾胃。針對肝生理情況的特殊性，逍遙散組方的基本思路立足于“肝郁”這一中心病理環節，以柴胡、薄荷疏發郁遏之肝氣，加之當歸、白芍養血涵陰以補肝體助肝用，輔以白術、茯苓、生姜、炙甘草健脾除濕防止傳變。疏肝、養血、健脾三種治法相輔相成，由主證到次證，由局部到全身，層次清晰，最終達到調暢情志、改善周身的作用，并因此形成疏肝、養血、健脾三組功效藥組。因此，本研究所設立的拆方組別為：逍遙散（全方八味藥）、疏肝藥（柴胡、薄荷）、養血藥（當歸、白芍）、健脾藥（白術、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遙散去養血藥（即疏肝藥+健脾藥，柴胡、薄荷、白術、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遙散去疏肝藥（即養血藥+健脾藥，當歸、白芍、白術、茯苓、生姜、炙甘草），以期從中醫治法的角度探討逍遙散抗抑郁作用的科學內涵和功效搭配的合理性。

結果顯示，逍遙散、疏肝藥、養血藥、逍遙散去養血藥、逍遙散去疏肝藥組均能顯著改善應激抑郁模型小鼠的行為學指標，且在有效劑量下不影響小鼠的自主活動，而健脾藥組作用不明顯，由此提示疏肝藥組和養血藥組在逍遙散全方中扮演重要的角色，初步表明柴胡-薄荷藥組所體現的疏肝治法和當歸-白芍藥組所體現的養血治法是逍遙散治療抑郁癥的重要治法，實驗結果與“君臣佐使”拆方研究結果基本吻合。然而關于“疏肝”治法和“養血”治法抗抑郁效應的關聯性、差異性及選擇性等問題，有待今后更深入的研究。

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