揉搓對玉竹中多糖提取率影響的研究※

鐘喜光 劉瑞連 蔣曉煌 蔣孟良 劉朝暉 鐘振平

玉竹為百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill.)Druce的干燥根莖。秋季采挖，除去須根，洗凈，曬至柔軟后，反復揉搓、晾曬至無硬心，曬干；或蒸透后，揉至半透明，曬干。具有養陰潤燥，生津止渴的功能。用于肺胃陰傷，燥熱咳嗽，咽干口渴，內熱消渴[1]。玉竹提取物及多糖具有降血糖[2-4]、抗衰老[5-6]、免疫調節[6]、強心等作用[7-8]。玉竹產地加工，傳統采用揉搓，但揉搓時間沒有具體描述，全憑經驗，以揉至玉竹條呈半透明、滲出糖質為宜。為探討揉搓對玉竹多糖提取率的影響，本文以玉竹中多糖的提取率為評價指標，優選出玉竹的最佳揉搓時間。

1 實驗材料

1.1 儀器UV-2000型紫外分光光度計（日本島津）；DK-S22型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）；AR5120型電子天平（OHAUS）；Tw1100型高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；KDM型調溫電熱套（山東鄆城華魯電熱儀器有限公司）。

1.2 試劑葡萄糖對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號110833-201106）；其它試劑均為分析純；水為純水。

1.3 藥物玉竹購于湖南省邵東縣，經湖南中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室劉塔斯教授鑒定為百合科植物玉竹Polygonatum odoratum (Mill.)Druce的根莖。

2 方法與結果

2.1 藥物炮制玉竹加工傳統要求揉搓至滲出糖質，本實驗對其揉搓時間進行了比較研究。將玉竹洗凈，曬2天后除去須根，用兩塊砧板夾著來回揉搓2、4、6、10min，再切薄片，40℃烘干；另取曬2天除須根的玉竹條不揉搓，直接切薄片，干燥，備用。

2.2 多糖含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取 105℃干燥至恒重的無水葡萄糖 60.2mg，置 100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL中含無水葡萄糖0.602mg)。

2.2.2 供試品溶液的制備取揉搓不同時間的玉竹片10g，精密稱定。置圓底燒瓶中，加水1000mL，加熱回流1h，用脫脂棉濾過，如上重復提取1次，兩次濾液合并，濃縮，移至1000mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。

2.2.3 線性關系考察精密量取對照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，分別置 50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液 2mL，置具塞試管中，分別加4%苯酚溶液1mL，混勻，迅速加入硫酸7.0mL，搖勻，于40℃水浴中保溫30min，取出，置冰水浴中 5min，取出，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版附錄VA），在490nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，得回歸方程：y=9.084x－0.0071，r＝0.9997。

2.2.4 精密度試驗精密吸取葡萄糖對照品溶液2.0mL同 2.2.3 線性關系考察方法測定吸光度，重復6次，計算6次吸光度的均數、標準差與RSD，結果RSD＝1.02 %，表明該方法精密度良好。

2.2.5 穩定性試驗分別精密吸取同一份供試品溶液，于0、0.5、1.0、1.5、2.0h分別測定其吸光度，結果RSD＝1.42%，表明供試品溶液在2h內基本穩定。

2.2.6 重復性試驗對同一批玉竹，按供試品溶液制備方法平行制備6份，依2.2.8 測定法測定吸光度，計算含量，其RSD=2.05%，實驗表明該方法重復性好。

2.2.7 回收率試驗精密稱取已知含量（8.6%）的同一批玉竹約 0.5g 6份，精密稱定，每份加入20.5mg/mL的葡萄糖對照品溶液2.0mL（與樣品中葡萄糖含量的比例約為1:1），按供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，再依 2.2.8 測定法測定吸光度，按回收率（%）＝測得總含量－樣品中含量/加入量×100 %計算，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果

實驗結果表明，該含量測定方法回收率高、準確性高，符合測定要求。

2.2.8 測定法 精密量取供試品溶液2mL，加乙醇10mL，攪拌，離心，取沉淀加水溶解，置50mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取2mL，照標準曲線的制備項下的方法，自“加4%苯酚溶液1mL”起，依法測定吸光度，用回歸方程計算出供試品溶液中無水葡萄糖的重量，再按干燥品計算樣品中葡萄糖的含量，測定結果見表2。

取本品粗粉約1g，精密稱定，按文獻方法提取、測定[1]，以其含量為100%，計算出不同揉搓時間多糖相對提取百分率，結果見表2。

表2 玉竹多糖提取率測定結果(n=3)

實驗結果表明，玉竹未揉葡萄糖提取率最低，揉后提取率增加，且隨時間增加而增加，到 6min含量最高，再延長揉搓時間，多糖提取率反而下降。

3 討論

該研究表明，玉竹多糖提取率在一定內隨時間的延長，多糖含量增加，這可能是在揉搓過程中，使糖汁從植物細胞中揉出，從而加快了糖的擴散、溶出所致，但隨著揉搓時間延長，多糖含量反而下降，這也許是在揉搓過程中糖汁過多滲出，粘附容器內壁，導致損失所致。說明傳統產地加工揉搓的重要性，以及揉搓程度的控制都非常重要。故玉竹在產地加工揉搓時，應掌握好揉搓程度，揉至玉竹柔軟、滲出糖汁、半透明、粘手為宜。不及則多糖提取率較低，則玉竹條曬干后有皺紋，不飽滿，玉竹片色澤不白，影響質量；過度揉搓多糖損失太多，提取率反而降低，且顏色太深，玉竹條易粘灰，難曬干，加之在貯藏中易泛油，也影響藥材質量。揉的時間長短根據毛坯曬的程度、揉的方法以及搓的溫度而異[9-11]。《中國藥典》規定，玉竹含玉竹多糖以葡萄糖（C6H1206）計，不得少于 6.0%，本品含量為8.6%，故符合規定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010:78.

[2]Choi SB,Park SA.Steroidal glycoside from Polygonatum odoratum(Mill.)Druce.Improves insulin resistance but does not alter insulin secretion in 90%panereatectomized rats[J].Biosei Bioteehol Biochem,2002,66(10):2036-2043.

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[5]單穎,潘興瑜,姜東,等.玉竹多糖抗衰老的實驗觀察[J].中國臨床康復,2006,10(3):79-81.

[6]單穎,姜東,潘興瑜,等.玉竹多糖對衰老模型鼠細胞及體液免疫功能的影響[J].中國臨床康復,2006,10(19):146-148.

[7]楊立平.玉竹總苷對大鼠血流動力學的影響[J].湖南中醫藥導報,2004,10(4):68.

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