子癇前期患者外周血中淋巴細胞分型的變化

劉金 梁義娟 劉紅梅 薛會靈 梁玲 李瑞

妊娠是一種成功的半同種異體移植，其成功依賴于母胎間的免疫平衡，妊娠中一旦免疫失衡或免疫調控紊亂可導致不明原因的反復流產、死胎或發展為子癇前期［1］。子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有的、可導致圍產期死亡的多系統疾病，隨著妊娠結束，胎兒及其附屬物的排出病情將逐漸好轉，其病因一直未被闡明。近年來免疫平衡機制是國內外學者關注的焦點，免疫細胞生物功能的強弱，除與其活性有關外還有賴于其在體內的數量，淋巴細胞分型可以反映子癇前期免疫細胞的水平。本研究采用流式細胞技術檢測正常妊娠及重度子癇前期孕婦外周血中淋巴細胞分型的構成變化，探討其在子癇前期發病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年10月至2011年10月就診于河北大學附屬醫院的重度子癇前期患者30例作為病例組，所有病例均符合《婦產科學》第7版重度子癇前期的診斷標準［2］，平均年齡(28.8±2.1)歲，孕周(35.5±2.5)周;另選擇同期住院分娩的健康孕婦20例作為正常組，平均年齡(28.0±2.7)歲，孕周(39.0±1.8)周。所有孕婦均為單胎妊娠，既往無慢性高血壓、糖尿病、腎炎、心臟病等內科疾病，無輸血、移植、免疫治療病史。2組一般資料具有均衡性。

1.2 標本采集與處理 于治療前抽取2組靜脈血2 ml注入肝素抗凝管中，室溫放置不超過2 h，待檢測。

1.3 方法 采用流式細胞技術檢測外周血中各組淋巴細胞水平。流式細胞儀型號BD FACSCalibur(美國)、試劑盒。(1)采集抗凝外周血，按下述步驟進行熒光染色;(2)在5個流式檢測管中分別加入(a CD3-FITC/CD19-PE;b CD3-FITC/CD4-PE;c CD3-FITC/CD8-PE;d CD3-FITC/CD16+CD56-PE)和陰性對照(IgG1-FITC/IgG2a-PE)各20μl;(3)每管加100μl(1×106/L)樣品，室溫避光孵育20 min;(4)每管加入1x溶血素2 ml充分震蕩混勻，室溫避光溶血10 min，以1 000 r/min離心5 min;(5)棄上清，加入2 ml PBS震蕩混勻，1 000 r/min離心5 min，棄上清;(6)重復步驟(5);(7)加入500μl PBS混勻，上機檢測，每個樣品收集20 000個細胞。

1.4 統計學分析應用SPSS16.0統計軟件，計量資料以±s表示，2組間比較采用成組設計比較的t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

外周血中淋巴細胞分型變化 病例組與正常組外周血中CD3+T細胞水平無明顯差異，但從其亞群上觀察有變化：病例組CD4+T細胞較正常組升高(P＜0.05);病例組CD8+T細胞較正常妊娠組明顯下降(P＜0.05);病例組外周血中自然殺傷細胞(NK細胞)水平明顯升高(P＜0.05);病例組與正常組外周血中B細胞水平差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1、圖1。

表1 外周血淋巴細胞分型變化±s

表1 外周血淋巴細胞分型變化±s

t值1.673 2.272 3.905 9.199 0.967 P值0.101 0.028 0.000 0.000 0.338

圖1 外周血淋巴細胞分型變化

3 討論

正常妊娠過程中攜帶有父源性人類白細胞抗原的胎兒直接接觸富含免疫活性細胞的母體蛻膜，沒有遭到母體免疫系統的識別和排斥，相反母體與胎兒“和平共處”，這種特殊的狀態即“母胎免疫平衡”。如果這種免疫平衡被打破，將產生一系列的妊娠期疾病，如反復自發性流產、死胎、子癇前期等病理妊娠情況［3，4］。正常的免疫功能要求反應水平既不能過低也不能亢進，同時還要求各免疫細胞數量之間維持動態平衡，過多過少均會發生免疫失衡。淋巴細胞分型是反映子癇前期免疫狀態的指標之一。免疫細胞主要指淋巴細胞、抗原呈遞細胞和免疫效應細胞。淋巴細胞包括T細胞、B細胞及NK細胞。T細胞來源于骨髓多能干細胞，在胸腺中分化成熟。不同發育階段的T細胞有不同的表面分子標志，即有不同的分化抗原，幾乎所有的T細胞皆表達CD3分子。CD3+T細胞可可分為兩大類：一類是CD4+T細胞，這類細胞主要參與輔助作用(TH)及遲發性超敏反應(TDTH);另一類是CD8+T細胞，它們的主要功能是細胞毒作用(TC)及免疫抑制作用(TS)。

在本研究中，我們選取重度子癇前期患者作為病例組，目的是通過典型病例的比較可以更清晰地顯示差別。本研究發現，病例組與正常妊娠組外周血中T淋巴細胞總水平無明顯差異，但其亞群水平上有變化。CD4+T細胞在病例組較正常妊娠組升高(P＜0.05);CD8+T細胞在病例組較正常妊娠組明顯下降(P＜0.05)。由于CD4+T細胞和CD8+T細胞在體內執行的功能不同，可以推斷子癇前期患者體內的免疫抑制狀態減弱，免疫調控網絡失衡，導致免疫紊亂，發生子癇前期的病理變化，進而出現子癇前期的一系列癥狀。本研究結果與Dimitrakova 等［5，6］結果一致。

NK細胞大部分表面有CD16和CD56，這兩種分子在其他細胞表面一般不表達或表達較低，故通常將CD16和CD56作為NK細胞的標志性分子，其作用主要表現在免疫監視，清除少量變異的或“非己”細胞，抗腫瘤、抗病毒等作用［7］。有研究發現，子癇前期患者可發生類似腎移植急性排斥反應的血管病變，且隨胎兒及其附屬物的排出，母體恢復正常［8］，由此推測NK細胞也參與子癇前期的發生。本研究同樣也觀察了外周血中NK細胞數量的變化，發現子癇前期組NK細胞明顯升高(P＜0.05)。即子癇前期患者體內免疫活動是增強的，NK細胞升高，使免疫微環境遭到破壞，同時發揮細胞毒作用，增強母體對胎兒的排斥作用。至于B細胞變化不大，在子癇前期的發生機制中可能意義不大。

總之，鑒于T細胞及NK細胞在維持母胎免疫平衡作用中發揮的重要作用，今后我們可以從免疫細胞功能活性等方面著手研究子癇前期的發生機制，為子癇前期的監測及治療提供理論依據。

1 Darmochwal KD，Saito S，Rolinski J，etal.Activated T lym-phocytes in preeclampsia.Am J Reprod Immunol，2007，58：39-45.

2 樂杰主編.婦產科學.第7版.北京：人民衛生出版社，2008.231.

3 Wilczynski JR.Munological analogy between allograft rejection，recurrent abortion and preeclampsia the same basic mechanism.Hum Immunol，2006，67：492-511.

4 鄭蓉，孫麗芳，董麗.孕中期血小板與子癇前期的關系.河北醫藥，2012，34：191-192.

5 Dimitrakova DE，Milchev N，Pavlov P，etal.Lymphocyte populations and subpopulations in peripheral blood ofpregnant women with preeclampsia.Akush Ginekol(Sofiia)，2005，44：40-44.

6 黎燕，蘇放明.子癇前期患者及正常孕婦外周血T淋巴細胞亞群的變化.實用醫學雜志，2007，23：1818-1820.

7 趙武述主編.免疫平衡研究及其臨床意義.第1版.北京：科學出版社，2005.15-24.

8 Chaouat G，Ledee-bataile N，Zourbas S，etal.Implantation can immunological parameters of implantation failure be of interest for preeclampsia.Reprod Immunol，2003，59：205-217.