健康獻血者不規則抗體篩查在臨床輸血中的意義

呂學琴，尹向麗（新疆維吾爾自治區農三師圖木舒克市中心血站 843900）

紅細胞血型不規則抗體，也稱意外抗體，是引起血型鑒定困難、疑難配血、溶血性輸血反應以及新生兒溶血癥的主要原因之一［1－4］。正常情況下在血液中不存在不規則抗體，但母嬰血型不合的妊娠或輸注血液制品的免疫刺激均可誘導產生不規則抗體［5］。患者輸入含有不規則抗體的血液會造成急性或遲發性輸血反應，輕則影響治療效果，重則危及患者生命。目前不規則抗體的篩查方法是利用抗體篩選試劑紅細胞與被檢者血清進行反應，以判斷被檢者是否含有臨床意義的不規則抗體［6］。為避免受血者接受意外抗體，保證患者的輸血安全，本中心對2011年8月至2012年10月3 029名健康獻血者的血漿進行不規則抗體篩查，并對其中經鑒定確認的17例不規則抗體陽性結果進行分析，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年8月至2012年10月于本站獻血的健康獻血者3 029名，其中男1 397名，女性1 632名，年齡18～55歲，有輸血史者277例，有妊娠史者632例。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 離心機（德國Eppendorf公司，5810R）；血型血清學離心機（湖南湘鷹離心機有限公司，TD4ZB）；孵育器（德國耶拿分析儀器股份公司，TB2）。

1.2.2 試劑 譜細胞（江陰力博醫藥生物技術有限公司）；抗人球蛋白試劑［東西儀（北京）科技有限公司］；抗－A、抗－B血型定型試劑（單克隆抗體，上海血液生物醫藥有限責任公司）；抗體篩查標準譜細胞（3人份O型紅細胞，北京斑珀斯公司）；抗體鑒定譜細胞（10人份O型紅細胞，北京斑珀斯公司）。

1.3 試驗用篩選紅細胞制備 從健康獻血者中篩選3份包含C、c、D、E、e、M、N、P1、JKa、JKb、Lea、Leb、Mur抗原譜的 O型紅細胞，分別用生理鹽水洗滌篩選紅細胞3次，用生理鹽水制備成5%的紅細胞懸液，用于鹽水法和間接抗人球蛋白法檢測。

1.4 方法

1.4.1 樣本處理 每位獻血者抽取3mL靜脈血液，采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，所有樣本均經充分離心后進行試驗，確保血漿中無纖維蛋白凝塊的干擾。

1.4.2 鹽水介質試驗 （1）取3支玻璃試管，分別標記“1號”、“2號”、“3號”。（2）各試管中分別加入待檢血漿100μL和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選紅細胞50μL。（3）混勻后3 400r／min離心15s，觀察結果，若有凝集反應，則為陽性反應；未出現凝集反應，則為陰性反應。3管中有至少有1管為陽性，則抗體篩選試驗為陽性，說明待檢血清中存在IgM類抗體；若3管均為陰性，則表明鹽水介質抗體篩選試驗陰性。為查明待檢血清中是否含有IgG類抗體，還應進一步做抗人球蛋白試驗。

1.4.3 抗人球蛋白試驗 （1）設置檢測管、陽性對照管和陰性對照管。（2）檢測管加5%相應篩選紅細胞懸液50μL和被檢血清100μL；陽性對照管加5%Rh（D）陽性紅細胞懸液50μL和IgG抗－D血清100μL；陰性對照管加5%Rh（D）陽性紅細胞懸液50μL和AB型血清100μL。（3）各管置37℃孵育器中孵育30～60min后離心，觀察溶血和凝集，并記錄結果。（4）徹底懸浮紅細胞，用生理鹽水充分洗滌3次。（5）最后1次洗滌后，將鹽水棄凈，用濾紙將試管邊緣鹽水吸干，每管加最適稀釋度抗人球蛋白血清100μL，充分混合后離心，輕輕懸浮紅細胞，觀察有無凝集反應，記錄結果。（6）結果判定：陽性對照管和檢測管出現凝集，而陰性對照管不凝集時，即為陽性，說明血清中存在不規則抗體。

1.4.4 不規則抗體的特異性鑒定 篩選陽性的標本用譜細胞進行抗體特異性鑒定，操作步驟同抗體篩選試驗，并根據獻血者血漿與譜細胞的反應格局判斷抗體的特異性。

1.5 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不規則抗體篩查 在3 029例血樣中，共檢出不規則抗體陽性17例，陽性率為0.56%。其中男性不規則抗體陽性6例，陽性率為0.43%，女性不規則抗體陽性11例，陽性率為0.67%，男女不規則抗體陽性率差異無統計學意義（χ2＝0.806，P＞0.05）。有輸血史或妊娠史者不規則抗體陽性15例，無輸血史或妊娠史者不規則抗體陽性有2例，差異有統計學意義（χ2＝23.137，P＜0.001），見表1。

表1 不規則抗體陽性率比較

2.2 不規則抗體的分布 17例不規則抗體中，不規則抗體Rh系統為14例，占82.35%（14／17），其中抗－D抗體比例最高，占52.94%（9／17），抗－E占23.53%（4／17），抗－e占5.88%（1／17）；MNSs系統2例，占11.76%（2／17）；抗－A11例，占5.88%（1／17）。

3 討 論

以往的研究認為，血型抗體在健康人群中檢出率為0.3%～2%［7］，本研究對3 029例健康獻血者標本進行抗體檢測，陽性率與文獻報道相符。人類Rh血型系統主要有5種抗原，其免疫原性的強弱依次為D＞E＞C＞c＞e［8－9］?？梗璂和抗－E是最常見的Rh血型系統不規則抗體，本實驗結果顯示，不規則抗體特異性種類與頻率以Rh系統最多，以抗－D抗體占的比例最高（52.94%），其次是抗－E（23.53%）。Rh（E）抗原是除Rh（D）抗原外抗原性最強的抗原，卻未作為常規檢測，導致近年時有抗Rh（E）抗體引起溶血性輸血反應的報道?，F已有報道指出常規檢測除ABO系統以外的其他一些血型抗原的十分必要［10］。MNSs系統抗體中主要是抗－M 抗體，占11.76%。抗－M抗體為冷凝集素，通常以IgM形式存在，一般不能在體內引起溶血性反應［11］，但當患者處于低溫麻醉狀態下手術時，此類抗體可激活補體；當機體的體溫處于冷抗體最適反應溫度范圍內（4～20℃）時，也可發生溶血反應，因此要選擇與抗－M抗體相合的血液，以免發生意外。

本組資料檢出17例不規則抗體的獻血者中，男性不規則抗體陽性6例（0.43%），女性11例（0.67%），差異無統計學意義（P＞0.05），說明不規則抗體產生不存在性別差異，但這與其他文獻報道結果不相同［12］。分析原因可能是本研究涉及的研究對象相對較少，不能反映實際人群的情況。

輸血、妊娠會使免疫性抗體得以形成，引起輸血不良反應以及輸血相關性疾病的發生。這些不規則抗體的產生，可能與輸血史及妊娠史等因素有關。本組資料檢出的17例不規則抗體獻血者中，88.2%（15例）有輸血史或妊娠史，曹榮祎等［13］報道了120例不規則抗體篩查陽性的患者中，79.2%（95例）有輸血史及妊娠史。此外，由于Rh（D）陰性獻血者產生不規則抗體的概率遠高于Rh（D）陽性獻血者，所以對Rh（D）陰性獻血者的標本進行不規則抗體檢測更有實用價值和臨床意義［14］。80.0%Rh陰性個體輸注Rh陽性血液后2～5個月產生抗－D抗體。筆者所在地區多為維吾爾族人，Rh（D）陰性人群居多，因而于輸血時出現抗原刺激的概率也較大。為保證患者的輸血安全，獻血者進行紅細胞不規則抗體的篩查同樣重要，不但可以防止輸注給受血者含有不規則抗體的血液，避免由不規則抗體導致的溶血性輸血反應［15］；同時也避免血液的浪費，還可制備成含有不規則抗體的血清，用于稀有血型的檢測，為稀有血型患者提供相合血液。

綜上所述，對供血者做抗體篩查，并提高抗體篩查的水平，對減少輸血反應、提高輸血療效、保障臨床輸血安全具有非常重要的作用，且此方法簡單、省時、易于掌握，值得臨床推廣應用。

［1］蔣冬玲，李志強.實用臨床輸血指南［M］.北京：人民衛生出版社，2006：40.

［2］胡麗華.臨床輸血檢驗［M］.2版.北京：中國醫藥出版社，2010：20－21.

［3］Watchko JF.Identification of neonates at risk for hazardous hyperbilirubinemia：emerging clinical insights［J］.Pediatr Clin North Am，2009，56（3）：671－687.

［4］Koelewijn JM，Vrijkotte TG，Vander Schoot CE，et al.Effect of screening for red cell antibodies，other than anti－D，to detect hemolytic disease of the fetus and newborn：apopulation study in the Netherlands［J］.Transfusion （Paris），2008，48（5）：941－952.

［5］Koelewijn JM，Vrijkotte TG，Dehaas M，et al.Risk factors for the presence of non－rhesus D red blood cell antibodies in pregnancy［J］.BJOG，2009，116（5）：655－664.

［6］李勇，楊貴珍.人類紅細胞血型血清學實用理論與實驗技術［M］.北京：中國科學技術出版社，1999：96－103.

［7］肖星甫.輸血技術手冊［M］.成都：四川科學技術出版社，1992：95－96.

［8］王民權，陳月，邱淑業.Rh陰性患者產生抗－C抗－e 1例［J］.中國輸血雜志，2001，14（3）：176.

［9］高峰.輸血與輸血技術［M］.北京：人民衛生出版社，2003：68.

［10］Makarovska－Bojadzieva T，Blagoevska M，Kolevski P，et al.Optimal blood grouping and antibody screening for safe transfusion［J］.Prilozi，2009，30（1）：119－128.

［11］何菊梅，張敏.抗E抗體引起急性溶血性輸血反應2例報告［J］.臨床血液學雜志，2004，1（1）：29.

［12］向東，張雄民，王健蓮，等.220例患者血型不規則抗體分析［J］.臨床輸血與檢驗，2003，5（2）：103.

［13］曹榮祎，劉風華，于洪敏，等.微柱凝膠法檢測不規則抗體的臨床應用［J］.臨床輸血與檢驗，2010，12（2）：149－151.

［14］李健，周英，呂文彬，等.Rh（D）陰性獻血者不規則抗體檢測的結果分析［J］.四川醫學，2012，25（2）：341－343.

［15］王桂萍，羅小華.4 680例患者不規則抗體篩查結果分析［J］.川北醫學院學報，2010，25（6）：564－565.