PLA2G2A在胰腺癌組織中的表達及其與患者術后生存期的關系

張勇 蔣堃 王春陽 崔元琴 劉冬聲 張佃良

PLA2G2A在胰腺癌組織中的表達及其與患者術后生存期的關系

張勇 蔣堃 王春陽 崔元琴 劉冬聲 張佃良

ⅡA分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2 groupⅡA, PLA2G2A)是磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)家族中的一員，是花生四稀酸代謝的關鍵酶，參與體內多種生理和病理過程[1-2]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A與胃癌、腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉移及預后密切相關[3-8]。本研究檢測胰腺癌組織PLA2G2A的表達，探討其與胰腺癌臨床病理特征以及患者預后間的相關性。

一、材料與方法

1．臨床資料：收集華中科技大學協(xié)和醫(yī)院和青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院2003年1月至2006年1月間手術切除的76例胰腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋的癌組織標本，另取23例石蠟包埋的正常胰腺組織標本(11例來自外傷性胰腺部分切除，12例為癌旁正常胰腺組織)作為對照，所有標本均經(jīng)病理學證實。所有患者術前、術后均未接受放、化療治療。76例胰腺癌中男性55例，女性21例，年齡31～72歲，其中≤55歲者20例，>55歲者56例，中位年齡56.3。術后進行隨訪，隨訪截止日期為 2008年12月31日。

2．PLA2G2A蛋白檢測：采用免疫組化方法檢測PLA2G2A蛋白。濃縮型鼠抗人PLA2G2A單抗購自福州晶泰生物技術有限公司，工作濃度1∶100。Pv-6000通用型二步法免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，按照說明書操作。以胞質中呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達，根據(jù)染色強度及陽性細胞數(shù)判斷：按染色強度，不著色為0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3 分；按陽性細胞百分比，陽性細胞數(shù)≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%分別計0、1、2、3、4 分。兩分值相乘，0分為陰性，1～4分為弱陽性(+)，5～8為中等陽性(++)，9～12 分定為強陽性(+++)，陰性及弱陽性定義為陰性表達，中等陽性與強陽性定義為陽性表達。

3．統(tǒng)計學處理：用SPSS11.0軟件包對數(shù)據(jù)進行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示，組間生存率比較采用Log-rank檢驗，預后危險因素采用Cox風險比例模型進行單因素和多因素分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

二、結果

1．胰腺癌組織PLA2G2A的表達：76例胰腺癌組織PLA2G2A蛋白表達陽性率為64%(49/76)，23例正常胰腺組織均未見PLA2G2A蛋白表達，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05，圖1)。

圖1正常胰腺組織(a)和胰腺癌組織(b)PLA2G2A蛋白表達 (免疫組化 ×200)

2．胰腺癌組織PLA2G2A表達與臨床病理學特征的關系：PLA2G2A蛋白的表達與患者的年齡、性別及腫瘤部位、大小無相關性，而與臨床分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移呈負相關(表1)。

表1 PLA2G2A表達與胰腺癌臨床病理學特征的關系

3．PLA2G2A表達與患者生存期的關系：76例患者中失訪6例。70例患者中6例生存期<3個月，11例生存3～<6個月，13例生存6～<9個月，7例生存9～<12個月，9例生存12～<15個月，8例生存15～<18個月，7例生存18～<21個月，9例生存21個月仍健在。PLA2G2A陰性表達患者的平均生存期為(9.34±1.28)個月，95%可信區(qū)間為7.46～11.48；陽性表達患者的平均生存期為(15.97±1.66)個月，95%可信區(qū)間為11.53～19.34。兩組患者術后生存期的差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.016，圖2)。

圖2 PLA2G2A陽性表達及陰性表達患者的生存曲線

4．影響患者術后生存的因素分析：Cox風險比例模型行單因素及多因素生存分析結果均顯示臨床分期、PLA2G2A陰性表達是影響胰腺癌患者術后生存的獨立危險因素(表2、3)。

表2 影響患者預后的Cox風險比例模型單因素分析

表3 影響患者預后的Cox風險比例模型多因素分析

討論磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)在生物界中分布廣泛，是一類能夠催化水解甘油磷脂sn-2位點的酰基酯鍵形成自由脂肪酸和溶血磷脂的酶族[9]。PLA2水解代謝產(chǎn)生的花生四稀酸通過下游環(huán)氧合酶和脂氧合酶途徑進一步產(chǎn)生的前列腺素、白三烯和血小板活化因子等脂類活性物質廣泛參與細胞內多種生理和病理變化，在機體脂質平衡、免疫防御和炎癥反應等過程中發(fā)揮重要作用[9-10]。根據(jù)組織分布、氨基酸序列同源性及生物化學功能等特征，PLA2分為分泌型、胞漿型和非鈣離子依賴型[10-11]。

PLA2G2A是磷脂酶A2家族中的一種亞型。人類的PLA2G2A最先是從類風濕患者的滑膜液中發(fā)現(xiàn)并分離出來，其基因定位于1號染色體的p34-36.1，編碼蛋白的分子量約為13000[12-13]。PLA2G2A在哺乳動物天然免疫中扮演著重要角色，尤其是在抗革蘭陽性細菌感染中發(fā)揮關鍵作用。近期的研究顯示，PLA2G2A與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生及演變關系密切。Fijneman等[14]研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A表達可以降低APC基因突變誘發(fā)的Muc2缺陷小鼠腸道腫瘤的發(fā)生率。Tribler等[15]檢測22例結腸腺癌患者腫瘤組織中PLA2G2A的表達，結果顯示結腸癌組織PLA2G2A蛋白的表達量顯著低于癌旁組織。Ganesan等[16]報道，抑制非侵襲性胃癌細胞PLA2G2A表達可以提高癌細胞的侵襲力，而增強PLA2G2A表達可以抑制侵襲性胃癌細胞的侵襲力，提示PLA2G2A可能是胃癌侵襲和轉移的重要調控因素。最近有研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A可作為判斷胃癌、結腸癌、前列腺癌預后的標志物[5,8,17]。

本研究結果顯示，胰腺癌組織表達PLA2G2A蛋白，其表達與淋巴結轉移、臨床分期、腫瘤分化程度均呈負相關。此外，PLA2G2A高表達患者的術后生存期長于低表達的患者，是影響患者術后生存期的獨立危險因素。因此，設法增加PLA2G2A在胰腺癌中的表達可能有效地抑制腫瘤的浸潤生長，這為胰腺癌的基因治療提供了一種新的思路。

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10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2013.05.016

265600 蓬萊，山東蓬萊市人民醫(yī)院普外科(張勇、蔣堃、崔元琴)；華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院(王春陽、劉冬聲)；青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院普外科(劉冬聲、張佃良)

張佃良，Email：phdzdl@yahoo.com

2013-02-15)

(本文編輯：屠振興)