金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用

劉蓓 劉玉紅

·實驗研究·

金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用

劉蓓 劉玉紅

目的研究金銀花多糖對脾淋巴細胞的增殖作用。方法用MTT法體外觀察金銀花多糖在不同濃度對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。結果金銀花多糖在濃度10～250 μg/ml時可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，以濃度100 μg/ml時作用最為明顯。結論金銀花多糖體外具有免疫促進作用。

金銀花；多糖；淋巴細胞增殖

多糖在抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促進免疫等方面都發揮著重要生物活性，因此對多糖的研究與開發已越來越引起人們的關注。我們前期研究表明，清熱解毒類中藥金銀花，其多糖組分可以抑制小鼠S180肉瘤的生長并且沒有明顯的毒副作用[1]。為進一步探討其抗腫瘤的作用機制，基于多種多糖確切的免疫增強活性報道，本文采用脾淋巴細胞增殖實驗，研究了金銀花多糖體外的免疫活性。

1 實驗材料

金銀花多糖(自制[1])；RPMI-1640培養基(Gibco公司)；刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司)；噻唑籃(MTT)(Sigma公司)。BALB/c小鼠，體重(20+2.0)g，由山東大學實驗動物研究中心提供。

2 實驗方法

2.1脾淋巴細胞懸液制備 取小鼠頸椎脫臼處死，70%酒精浸泡10 min，取脾，研磨過100目篩網，Hank’s液沖洗，收集脾細胞懸液，離心，棄上清；加紅細胞裂解液(Tris-NH4Cl)10 ml，混勻脾細胞，靜止4～5 min，離心，棄上清，Hank’s液洗2～3遍，用RPMI-1640培養液重懸細胞，計數，調整細胞濃度為6～8×106個/ml。

2.2測定法 于96孔培養板中，每孔加入100 μl細胞懸液，再加入100 μl不同濃度的金銀花多糖溶液，同時設空白對照組(Control，加100 μl培養液)、陽性對照組(加100 μl ConA，濃度10 μg/ml)。置5%CO2，37℃培養48 h。培養結束前4 h，于每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培養結束后，每孔加入酸化的20%的SDS溶液120 μl裂解細胞，過夜，在酶標儀上測各孔的A(測定波長570nm，參比波長630nm)。計算結果:淋巴細胞增殖指數=供試樣品組吸光值/空白對照組吸光值。

3 實驗結果

結果見表1。不同濃度的金銀花多糖(10～250 μg/ml)均可顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，在濃度100 μg/ml時作用最強，增殖指數為1.172，高于或低于此濃度，促進作用減弱，呈鐘罩形的劑量-效應曲線。說明金銀花多糖具有一定的免疫促進作用，為金銀花多糖抑制小鼠S180腫瘤生長的作用機制之一。

表1 金銀花多糖對脾淋巴細胞增殖的影響

注：*P<0.05 and**P<0.01 vs. control group

4 討論

多數多糖是通過增強機體的免疫調節作用發揮抗腫瘤作用或治療其他免疫缺陷性疾病。脾臟是T、B淋巴細胞定居和接受抗原刺激后產生免疫應答的重要場所，它們與機體的細胞免疫和體液免疫密切相關。本文研究了金銀花多糖體外對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響，結果表明在濃度10～250 μg/ml范圍內，金銀花多糖對小鼠脾淋巴細胞增殖具有不同程度的刺激作用，并且有最適劑量，超過或低于最適劑量則效應減弱，呈鐘罩形的劑量-效應曲線，這種特點與許多免疫調節劑的量效關系曲線的特點相似，提示其免疫調節作用具有雙向性。金銀花多糖的免疫調節作用可能為其抗腫瘤作用機制之一。

[1] 劉玉紅，劉玉國，蔣海強. 金銀花多糖對小鼠S180肉瘤的抑制作用與機制研究. 腫瘤學雜志，2012,18(8)：584-587.

山東省醫學科學院科技計劃項目(項目編號：200818)

250355 山東中醫藥大學藥學院

劉玉紅 E-mail: liuyuhongwu@126.com