硝酸甘油口腔崩解片的質量控制

杜 芃，李曉華，楊金榮，房志仲

（1.天津醫科大學第二醫院藥劑科，天津 300211；2.天津醫科大學藥學院藥劑學教研室，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津 300070）

硝酸甘油作為抗心絞痛藥，療效肯定，是臨床上最常用于改善冠心病患者的生存質量，減少心絞痛心臟猝死發生的一線藥物。它可緩解各類心絞痛，如勞累誘發的典型心絞痛、冠狀動脈痙攣引起的變異型心絞痛以及不穩定型心絞痛等[1-5]。目前市場上硝酸甘油的劑型有硝酸甘油片、控釋片、控釋貼膜、氣霧劑和硝酸甘油注射液。其控釋片和控釋貼膜能實現穩定、長效釋藥，但不能作為冠心病患者的急救用藥。普通舌下片則因崩解時間過長而不利于療效的迅速發揮，而對于注射劑患者使用很不方便，因此都不太適合于突發性冠心病患者的急救與自救。其氣霧劑雖然有快速、有效、穩定、方便的優點，但是其成本高[6-7]。口腔崩解片是指在口腔內能夠迅速崩解或溶解的片劑，其崩溶時間一般不超過1 min，在口腔中不另用水或很少的水即能崩散形成混懸液或溶液，患者不需用水即可將藥物順利服下。因此非常適合于有吞咽困難的老年患者及突發性心絞痛發作的急癥患者。本文參考相關文獻，研究并建立了硝酸甘油口腔（舌下）崩解片的質量控制方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀，美國Spectraphysics；Spectra Focus 紫外檢測器；輸液泵SP8810；Anstar 色譜工作站；ZRS-8 智能溶出儀（天津大學無線電廠）；德國Sartorius 電子天平（BP211D）；78X 片劑四用測定儀（中國黃海制藥廠）；ZB-IB 型智能崩解儀（天津大學精密儀器廠）；KQ-100 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；微孔濾膜（Φ25 mm，孔徑0.8μm；Φ13 mm，孔徑0.45μm，天津市雙吉色譜儀器經營部）。

1.1.2 試藥與試劑 硝酸甘油溶液對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100236-200401，含量：0.998%w/w）；硝酸甘油原料液（山東省平原制藥廠）；硝酸甘油口腔崩解片3 批（自制）；對照制劑硝酸甘油片（北京益民藥業有限公司，批號：0605231）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色譜純）；乙腈（天津市康科德科技有限公司，色譜純）及其它試劑均為市售分析純，重蒸水自制。

1.2 方法[8-11]

1.2.1 含量測定

1.2.1.1 色譜條件：色譜柱：TIANHE Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-水（52∶5∶43）；流速：0.7 mL/min；檢測波長：215 nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。

1.2.1.2 溶液的制備：（1）對照品溶液的配制：精密量取硝酸甘油對照品1 mL 置于100 mL 量瓶中，用無水乙醇定容至100 mL 量瓶內，作為對照品溶液。（2）樣品溶液的制備：取供試品10 片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于硝酸甘油1.25 mg），置25 mL 量瓶中，加流動相適量，超聲處理3 min，振搖20 min，使硝酸甘油溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，備用。（3）陰性對照液的制備：取空白全輔料適量，研細，精密稱取適量，置25 mL 量瓶中，用流動相稀釋定容至刻線。在“1.2.1.1 項下”分別精密量取上述供試液20μL，進樣。

1.2.1.3 線性關系考察：分別精密量取對照品溶液3.5、4、5、6 和6.5 mL 置于100 mL 量瓶內，用流動相定容至刻度，得到每1 mL 中含硝酸甘油0.035、0.04、0.05、0.06 和0.065 mg 的硝酸甘油系列溶液，分別精密量取20μL，進樣。

1.2.1.4 精密度試驗：按照“1.2.1.1 項下”精密吸取同一供試品溶液重復取樣6 次，測定峰面積。

1.2.1.5 穩定性試驗：精密稱取樣品，按照供試品溶液制備方法操作，在“1.2.1.1 項”色譜條件下，分別測定：（1）日內穩定性：室溫放置0、2、4、6 和8 h 后進樣，分別測定峰面積；（2）日間穩定性：室溫放置0、1、2、3、4 d 后進樣，分別測定峰面積；（3）光照穩定性：在避光和不避光條件下分別在放置0、2、4、6、8、10 和24 h 后進樣，分別測定峰面積。

1.2.1.6 重復性試驗：分別量取供試品溶液6 份，按照“1.2.1.2（2）項下”操作，在“1.2.1.1 項”色譜條件下，各取20μL，進樣，測定峰面積。

1.2.1.7 崩解時間檢查：方法一：采用藥典規定的升降式崩解儀，進行崩解時間的測定。所用的崩解介質為37℃±1℃的水。取供試品10 片，分別置吊籃的玻璃管中，啟動崩解儀進行測定，用秒表記錄崩解所用的時間；方法二：根據《口腔崩解片的劑型特點和質量控制會議紀要》，崩解時間在1 min 以內，介質首選用水，用量應小于2 mL，溫度為37℃，采用靜態方法，用秒表記錄崩解所用的時間。

1.2.1.8 回收率試驗：精密量取0.5 mg/mL 硝酸甘油對照品2.0、2.5 和3.0 mL，分別加入處方量的輔料，置25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制成含量測定濃度的80%、100%、120%的溶液，搖勻，濾過，進樣。

1.2.1.9 樣品測定：取本品3 批，按照供試品溶液的制備方法，按照“1.2.1.1 項”色譜條件下進樣，分別測定硝酸甘油的含量。

1.2.1.10 含量均勻度測定：取本品1 片，置10 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理3 min，振搖20 min，使硝酸甘油溶解，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻，過濾，精密量取續濾液，按含量測定項下的方法測定，按外標法以峰面積計算每片的含量。除限度為±20%以外，應符合以下規定。取本品10 片，按選定的含量測定方法分別測定每片以標示量為100 的相對含量X，求其均值（x）和標準差，以及標示量與均值之差的絕對值：如A+1.8s≤15.0，則供試品的含量均勻度符合規定；若A+s＞15.0，則不符合規定；若A+1.8s＞15.0，且A+s≤15.0，則應另取20 片復試。根據初、復試結果，計算30 片的均值、標準差和標示量與均值之差的絕對值A，如A+1.45s≤15.0，則供試品的含量均勻度符合規定；若A+1.45s＞15.0，則不符合規定。

1.2.1.11 溶出度測定：取供試品，按溶出度測定法《中國藥典》2010年版（二部附錄XC 第三法），以100 mL 水為溶出介質，轉速75 r/min，依法操作，3 min 時取樣，經0.45μm 濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。按“1.2.1.1 項下”的色譜條件測定，分別計算出每片在不同時間的溶出量。

2 結果

2.1 HPLC 測定結果 由圖1 可見，硝酸甘油的保留時間約為13 min，理論塔板數按硝酸甘油峰計算為5 835；硝酸甘油峰的不對稱度為1.21；硝酸甘油峰與相鄰雜質峰的分離度為8.56。因此，制訂質量標準，要求理論塔板數按硝酸甘油峰計算應大于2 000，硝酸甘油峰與相鄰雜質峰的分離度大于1.5。如圖2～3 可見，除溶劑峰外，未見其他色譜峰，表明輔料不干擾樣品測定。

2.2 線性和范圍 結果表明，硝酸甘油在0.035～0.065 mg/mL 濃度范圍內線性關系良好。以硝酸甘油峰面積（Y）為縱坐標，溶液濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線。得標準曲線方程：Y=2.241×107X-2.421×104，r=0.999 9。

2.3 精密度試驗 硝酸甘油峰面積的RSD=1.12%。

2.4 穩定性試驗 日內穩定性：峰面積的RSD＝0.40%，表明溶液8 h 內穩定；日間穩定性：峰面積的RSD＝1.50%，表明溶液4 d 內穩定；光照對測定結果的影響：避光處理和不避光條件的峰面積RSD 分別為1.50%和1.9%，表示光照24 h 內對測定結果沒有影響，在測定含量過程中，樣品可不進行避光處理。

2.5 重復性試驗 供試品中硝酸甘油含量RSD=0.59%，本試驗重復性較好。

2.6 硬度和崩解時間 如表1 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的硬度和崩解度符合規定。

表1 硬度和崩解時間的檢查結果（±s，n=6）Tab 1 Results of hardness and disintegration time test（±s，n=6）

表1 硬度和崩解時間的檢查結果（±s，n=6）Tab 1 Results of hardness and disintegration time test（±s，n=6）

2.7 加樣回收率試驗 結果見表2。

表2 回收率測定結果（n=9，%）Tab 2 Results of recovery test（n=9，%）

2.8 樣品測定 取本品3 批進行測定，硝酸甘油口腔崩解片平均含量分別為97.24%、98.02%和97.54%，RSD 分別為0.45%、1.16%和0.33，符合《中國藥典》規定。

2.9 含量均勻度 如表3 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的含量均勻度符合規定。

表3 含量均勻度檢查結果Tab 3 Results of content uniformity test

2.10 溶出度測定 如圖4 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的溶出度均大于80%，符合規定。由圖5所示，在0.5～5 min 內硝酸甘油口腔崩解片比市售硝酸甘油片溶出度大。由圖結果表明，該方法能夠客觀的反映制劑的溶出情況，從而控制制劑質量。根據以上結果，將溶出時間限定為3 min 時溶出度不低于標示量的80%。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 《中國藥典》2010（二部）版中，對硝酸甘油含量測定的檢查方法中規定215 nm作為檢測波長，而USP29/NF24 中含量測定部分的檢測波長定為220 nm，以減少末端吸收帶來的干擾。試驗中紫外掃描結果顯示，硝酸甘油的最大吸收波長更接近于215 nm，且在220 nm 處測得吸收值僅為215 nm 處測定值的一半，考慮到溶出度測定中，全溶出的濃度僅為5μg/mL，因此，為提高其檢測的靈敏度，本試驗中選擇了215 nm 作為測定波長。

3.2 流動相配比的選擇[12-14]《中國藥典》中，對硝酸甘油含量測定的檢查方法中，推薦的流動相為乙腈∶水=5∶5，USP29/NF24 中推薦的流動相為等比例的甲醇-水，流速均為1 mL/min，另外，有關硝酸甘油的文獻中采用了甲醇-水（6∶4）作為流動相，筆者在試驗過程中，為提高分析時間，首先選用了比例為甲醇-水（6∶4），但即使將流速降低也不能獲得較好的分離效果，硝酸甘油在經過酸或堿的水解破壞后，在硝酸甘油主峰前有一個面積很小的雜質峰，因此在甲醇-水中加入了少量的乙腈，以提高分離效果。綜合考慮到經濟因素，乙腈：水作為流動相固然能獲得較為理想的分離效果，但其分析成本過高。綜上，本試驗選用了甲醇∶乙腈∶水3 種液體的混合物作為流動相。

本試驗建立了硝酸甘油口腔崩解片的質量控制方法，以高效液相色譜法測定硝酸甘油的含量，以薄層色譜法對有關物質進行檢查，并依法對3 批制劑進行質量檢查。本方法具有操作簡便、專屬性好、靈敏度高的優點，可以作為硝酸甘油口腔崩解片的質量控制方法。

［1］Marsh N，Marsh A.A short history of nitroglycerine and nitric oxide in pharmacology and physiology[J].Clin Exp Pharmacol Physiol，2000，27(4):313

［2］鄭虎.藥物化學[M].第5 版.北京：人民衛生出版社，2004：133-135

［3］馬萍，辛艷茹，高文靜，等.口腔速崩片的研究進展[J].中國藥師，2004，7（3）：173

［4］黃勝炎.口內速釋片新進展[J].中國醫藥情報，2003，9（6）：18

［5］Ishikawa T,Koizumi N,Mukai B,et al.Pharmacokinetics of acetaminophen from rapidly disintegrating compressed tablets prepared using microcrystalline cellulose (PH-M-06) and spherical sugar granules[J].Chem Pharm Bull，2001，49：230

［6］沈嵐，林曉，徐德生，等.口服固體速釋制劑的研究進展[J].中國中藥雜志，2005，30（2）：89

［7］Kibbe A H.Handbook of Pharmaceutical Excipients[M].Third edition.American Pharmaceutical Association,USA，2000：13-25

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅤD 高效液相色譜法，附錄29

［9］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅠA 片劑，附錄5

［10］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅩE 含量均勻度檢查法，88-89

［11］國家藥品監督管理局藥品評審中心.口腔崩解片的劑型特點和質量控制會議紀要[C].2003

［12］魏雪芳.硝酸甘油貼膜的含量均勻度和體外釋放度測定[J].廣東藥學院學報，2005，21（1）：34

［13］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：947-949

［14］The United States Pharmacopeial Convention.Official Monographs:Nitroglycerin tablets[M].USP29/NF24,Washington:2005,1543-1545